热灭活法检测骨碱性磷酸酶技术的临床应用

　　【摘要】 目的  应用灭活法检测大批量儿童骨碱性磷酸酶（bone alkaline phosphatase，BALP）项目以弥补干化学法测BALP之不足。 方法  采指血于生化分析仪上测定灭活前和灭活后碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）值。 结果  灭活法筛查出来的阳性结果同干化学法检出的阳性结果一致。 结论  本法具有成本低、可以定量分析、适合大批量标本测定的优点。

　　关键词  骨碱性磷酸酶 佝偻病 同工酶

　　Clinical application of heat-inactivity method to assay bone alkaline phosphatase

　　Li Changlin，Ma Sheng，Lin Hongmei，et al.

　　Department of Clinical Laboratory，Leliu Hospital of Shunde District，Foshan528322

　　【Abstract】 Objective To assay the content of bone alkaline phosphatase of children's large batch samples using heat-inactivaty method in compensation for the deficiency of dry chemistry.Methods Finger blood was collected，and alkaline phosphatase was examined by using biochemistry analyzer before and after heat-inactivaty of samples.Results The positive results of this method were in accord with the results of dry chemistry.Conclusion In contrast with dry chemistry，this method is in possession of the charactristics of lower cost，fitting for large batch samples'filtrate，quantita-tive analysis，etc.

　　Key words bone alkaline phosphatase rachitis isoenzyme

　　碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）几乎存在于人体的各种组织，系膜结合酶，肠上皮、肾小管、成骨细胞、肝脏、胎盘及白细胞中尤其丰富。血清中ALP主要源于肝和骨。ALP由一组同工酶组成，根据聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率，依次命名为ALP Ⅰ-Ⅶ［1］ 。儿童血清中ALP以ALP Ⅲ 为主，其来源于成骨及软骨细胞。医院日常检测BALP多采用干化学法，此法操作复杂、结果判定易产生人为误差、不适合大批量标本检测。本课题尝试用灭活法检测大批量儿童BALP项目。
　　
　　1 材料与方法

　　1.1 试验对象 5633例1.5～4.0岁的儿童，其中男2917例，女2716例，均来自本地区幼儿园。

　　1.2 仪器 DADE全自动生化分析仪。

    1.3 主要试剂 DADE的ALP试剂，Beckman标准血清，Randox定值质控血清，安徽高山药业生产的BALP试剂盒。

　　1.4 方法 （1）实验方法的建立:将Beckman的标准血清按1∶6稀释，在DADE全自动生化分析仪上作ALP定标，得到满意的定标曲线后，测定亦按1∶6稀释的Randox定值质控血清的ALP值（5水平），结果作线性回归方程，得到校正系数后，将生化分析仪上计算因子乘以校正系数。选50例健康儿童（干化学法测BALP正常者），采集手指末梢血50μl加入盛有300μl生理盐水的试管中，3500rpm离心5min，取上清液于生化分析仪上测定ALP，所得结果计算均值ˉx、标准差（SD），以ˉx+2SD作为临床参考值上限（ALP<400u/L），以ˉx+3SD（ALP>500u/L）为警示限。（2）5633例标本依上述方法测定ALP值，将结果超出参考范围上限的儿童，用干化学法测定其BALP。（3）将结果超出参考范围上限的标本测谷丙转氨酶（ALT）后，置56℃孵育10min，再测定ALP。

　　2 结果

　　5633例标本中有77例ALP超过参考范围上限，占总数的1.37%;有46例ALP超过警示限，占总数的0.82%。经干化学法测定77例儿童BALP:ALP小于警示限的标本中有4例BALP为弱阳性，占总数的0.71‰，其余均为阴性;ALP大于警示限的标本有6例显示强阳性，26例显示阳性，13例显示弱阳性，1例为阴性。77例标本测ALT值，其中1例标本ALT异常（ALT:88u/L），余均正常。ALT异常的病例即为46例ALP大于警示限的标本中的BALP阴性者。将77例标本置56℃孵育10min之后，在生化分析仪上测ALP。计算灭活后与灭活前ALP的百分率，其中1例标本为58.4%，1例标本为28.7%，1例标本为23.5%，其余均小于20%。

　　3 讨论

　　BALP是诊断儿童佝偻病的非常有价值的实验室指标 ［2］ 。干化学法测定BALP是医院检验科常用的方法，该方法由于操作步骤多，不适合大批量标本的检测。我院每年均有大批儿童体检任务，因此，建立适合大批量BALP检测的方法十分必要。国内，孟泽在《实用医学检验学》一书中描述:在56℃条件下，肝ALP较BALP稳定，56℃孵育10min，剩余ALP活力若小于热处理前的20%，提示该标本中ALP以BALP为主;剩余酶活力在25%～55%，表明该标本中ALP以肝型或肠型为主，或二者占优势 ［1］ 。本实验测定灭活前的ALP值，已初步筛查出可疑BALP升高病例 ［3］ 。为进一步确证儿童标本ALP升高是否为BALP升高所致，以灭活法鉴定之。实验结果显示5633例标本中有77例ALP超过参考值上限，36例超过警示限。灭活后与灭活前ALP的比率仅有3例超过20%。77例标本测定ALT，仅1例结果异常（ALT:88u/L）。此例标本恰好是比率为58.4%的那份标本，提示本例ALP升高为肝胆疾病所致。超过参考值上限，小于警示限的标本31例，其中干化学法测定BALP显示弱阳性的仅4例，占总病例数的0.71‰，此4例标本ALP均>450u/L，提示可以将450u/L设为粗筛警示限，450u/L以下者基本可以视为正常，但方面的依据略显不足，日后有必要提供充分的数据。其余27例标本干化学法测定BALP皆显示阴性。ALP>500u/L的标本中，干化学法测定BALP阳性率为97.8%，提示2种方法有很好的相关性。同干化学法相比，热灭活法可以定量分析、进一步尚可以研究BALP水平同疾病严重程度的关系。热灭活法的成本较干化学法的成本大大降低，约为后者的1/8。在批量标本的检测中，本法用生化分析仪测定，大大提高了测试速度及准确性，也避免了主观因素对判定结果的影响。

　　综上所述，本法具有成本低、批量标本测试快、定量分析、结果准确、适合大批量儿童体检的优点;同时对了解本地区儿童的发育状况颇有临床价值。

　　参考文献

　　1 朱忠勇.实用医学检验学.北京:人民军医出版社，1998，372-375.

　　2 马贤才.我国佝偻病发病现状及防治.中国农村医学，1998，26（1）:12.

　　3 陈文贞.小儿佝偻病简易诊断与BALP检测相关性探讨.中华儿童保健杂志，1995，2:23-24.

　　（编辑莉 莉）

　　作者单位:528322广东省佛山市顺德勒流医院检验科