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Ca(OH)2对BET法检测输血用1号抗凝液细菌内毒素的抗干扰研究

来源:中华实用医药杂志 作者:王洪,王 欣,王学刚,张晓寒 2006-8-20
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摘要: 【摘要】 目的 排除细菌内毒素检测(BET)法检测输血用1号抗凝液(1号抗凝液)细菌内毒素时的抑制性干扰。方法 将Ca(OH)2制成无热原的饱和溶液来稀释供试品,从而补充试验过程的Ca2+,排除枸橼酸根的干扰。结果 用无热原的Ca(OH)2饱和溶液将供试品稀释11倍,再用无热原水稀释2倍,即稀释22倍时,可以排除阳性抑制干扰......


      【摘要】  目的  排除细菌内毒素检测(BET)法检测输血用1号抗凝液(1号抗凝液)细菌内毒素时的抑制性干扰。方法  将Ca(OH)2制成无热原的饱和溶液来稀释供试品,从而补充试验过程的Ca2+,排除枸橼酸根的干扰。结果  用无热原的Ca(OH)2饱和溶液将供试品稀释11倍,再用无热原水稀释2倍,即稀释22倍时,可以排除阳性抑制干扰。结论  BET法检测1号抗凝液时,Ca(OH)2饱和溶液的应用可以排除抑制性干扰因素,能够建立可行的日常检测方法。

    【关键词】  细菌内毒素检测法;枸橼酸根;抑制性干扰;Ca(OH)2

        输血用1号抗凝液是血液中心和血站常用的血液保存液,它的主要成分是枸橼酸和枸橼酸钠,由于大量枸橼酸根离子的存在,在用BET凝胶法检测细菌内毒素时产生阳性抑制作用,如果不排除干扰,就会出现假阴性的结果[1]。笔者通过向供试液中加入无热原的饱和Ca(OH)2溶液,以补充Ca2+的方法以排除试验过程枸橼酸根离子的干扰,取得了良好的效果,实验过程如下。

    1  实验材料

      鲎试剂(TAL,批号:0510141,规格:0.25EU/ml);细菌内毒素检查用水(BET水,批号:0503150);以上均为湛江安度斯生物制品有限公司生产;细菌内毒素工作标准品(CSE,中国药品生物制品鉴定所,批号:2005-6,规格:100EU/支)。

     采血袋(山东威高集团医用高分子制品股份有限公司,批号:200504302、200506062、200510292、200510142)。

     旋涡混合器(湛江安度斯生物制品有限公司,型号:XY-80A);恒温水浴箱(武汉市武昌实验仪器厂,型号:HH·S11-2)。

    2  实验方法与结果

    2.1  鲎试剂灵敏度复核  按《中国药典》2005版二部附录Ⅺ E,对所用鲎试剂进行灵敏度复核,λC=0.25EU/ml,在2.0λ~0.25λ之间,可按标示值使用[2]。

    2.2  供试品热原检查  按照《国家药品标准》29册WS1-(X-049)-2002Z计算,1号抗凝液的细菌内毒素限值是<5.70EU/ml,4批供试品通过家兔法检查热原,注射剂量为:M=K/L=1ml/kg[3]。结果均符合规定。

    2.3  干扰试验  取少量分析纯Ca(OH)2于玻璃容器中,250℃干烤1h以除热原,再用BET水将其溶解,得过饱和溶液。取上清液将供试品稀释11倍,再用BET水稀释2倍,得供试品22倍稀释液,符合公式MVD=L/λ=5.70EU·ml-1/0.25EU·ml-1≈22倍。按照《中国药典》2005版二部附录Ⅺ E制备系列溶液A、B、C、D,分别与灵敏度为0.25EU/ml的鲎试剂反应,A、D溶液平行2管,B、C溶液平行4管,结果见表1。表1  排除干扰试验结果  

    3  结论与讨论

    我们测定了表3中,4批1号抗凝液A溶液的pH值,均在10~11之间,从结果看出,pH值对鲎试验结果的影响不是很大,加入Ca(OH)2饱和溶液的方法是可取的。用此方法我们检测了30多个批号的采血袋,均与生产厂家用家兔法检测的结果一致,说明该方法可以作为血液中心或血站对采血袋进行质量监控的方法。

      Ca(OH)2的理化性质比较稳定,580℃时才会分解[4],250℃干烤1h除热原时理化性质不会产生变化,但是其溶解度比较小,我们根据其在20℃时的溶解度(0.161g/100ml水),通过计算1号抗凝液枸橼酸根离子的浓度,选择用Ca(OH)2的饱和溶液。

      由于该方法供试品稀释倍数低,所须鲎试剂的灵敏度较低,相对价格也较低;而且,检测多联采血袋时,根据国标规定,空袋所用的鲎试剂的灵敏度也是0.25EU/ml[5],所以血站可购买同一种灵敏度规格的鲎试剂。

    【参考文献】

    1  马凤秋,王忠秋.鲎试验法检查复方枸橼酸钠注射液细菌内毒素.中国药学杂志,1996,31(4):233.

    2  国家药典委员会.中国药典.北京:化学工业出版社,2005,附录Ⅺ E.附录85-附录88.

    3  国家药典委员会(审定),国家食品药品监督管理局(发布).国家药品标准WS1-(X-049)-2002Z. 北京:化学工业出版社,2002,(29-164)~(29-165).

    4  周公度.化学辞典.北京:化学工业出版社,2004,553.

    5  中华人民共和国国家标准GB/14233.2-93.

      作者单位:056001 河北邯郸,邯郸市中心血站

 (编辑:若  木)


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