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新复方大青叶片中大黄素、大黄酚含量测定方法研究

来源:中华实用医药杂志 作者:高国敬,靳维荣,王蕴 2006-8-20
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摘要: 【摘要】 目的 建立HPLC法测定大黄素、大黄酚含量方法,控制新复方大青叶片的质量。结果 大黄素在21。2μg、大黄酚在34。结论 首次建立的高效液相色谱法测定新复方大青叶片中大黄素、大黄酚含量的方法简便,快速准确,灵敏度高,适用于新复方大青叶片生产工艺过程及该药品质量控制。...


  【摘要】  目的  建立HPLC法测定大黄素、大黄酚含量方法,控制新复方大青叶片的质量。方法  采用高效液相色谱法,色谱柱:Prodigy ODS3 C18(250nm×4.6nm,5μm),流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15),检测波长:254nm。结果  大黄素在21.2~127.2μg、大黄酚在34.4~206.4μg间有良好的线性关系(r1 =0.9993,r2 =0.9997),回收率分别为99.50%、99.50%,RSD分别为0.73%、0.56%。结论  首次建立的高效液相色谱法测定新复方大青叶片中大黄素、大黄酚含量的方法简便,快速准确,灵敏度高,适用于新复方大青叶片生产工艺过程及该药品质量控制。 

  【关键词】  HPLC测定;新复方大青叶片;大黄素;大黄酚

  Study on quantitative of emodin and chrysophanol in Xinfufang Daqingye Pian by HPLC

  GAO Guo-jing,JIN Wei-rong,WANG Yun.

  Liaocheng Traditional Medicine Hospital,Shandong 252000,China

  【Abstract】  Objective  The HPLC method was established for the emodin and chrysophanol quantitative in order to control the quality of Xinfufang Daqingye Pian.Methods  Column: Prodigy ODS3 C18(250nm×4.6nm,5μm); column temperature:28℃; mobile phase: a mixture of methanol and 0.1% phosphoric acid (85:15); flow rate:1.0ml/min; detection wavelength:254nm;aliquot injected into the HPLC system:20μl.Results  The linear range of the emodin was 21.2~127.2μg and  the recovery of the assay was 98.89% with the RSD=1.41%;The linear range of the chrysophanol  was 34.4~206.4μg and  the recovery of the assay was 99.40% with the RSD=0.59%.Conclusion  This method was found to be simple,rapid,sensitive and accurate for determination of emodin and chrysophanol in Xinfufang Daqingye Pian. In the same time, the method can be used to control the produce process and the quality of Xinfufang Daqingye Pian.

  【Key words】  HPLC(high performance liquid chromatography) analysis;xinfufang daqingye pian;emodin;chrysophanol

  新复方大青叶片为卫生部药品标中药成方制剂第五册准收载品种,主要由复方大青叶提取物、扑热息痛、咖啡因、异戊巴比妥、维生素C组成,是比较常用的伤风感冒药,主要用于伤风感冒,发热头痛、鼻流清涕、骨节酸痛等症。本制剂由于其药品质量标准制订的过于简单,其内在质量难以控制。因其生产工艺中大青叶提取物系由大青叶、大黄、金银花等五味中药的提取物,故通过测定本制剂大黄中大黄素的含量,从而可有效地控制本品生产工艺及内在质量。通过多次实验,本文首次建立了用高效液相色谱法测定新复方大青叶片中大黄素和大黄酚含量的方法。

  1  仪器与材料

  1.1  仪器  美国TSP公司Spectra series P200高效液相色谱仪、Spectra SERIES UV100紫外—可见检测器;KT-300V型超声波仪(山东济宁中冠超声波有限公司)。

  1.2  材料  新复方大青叶片(东阿阿胶集团临清华威药业有限公司,批号20050330,20050327,20050204);大黄素、大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所);甲醇(色谱纯);0.45μm微孔滤膜,高纯水;磷酸(分析纯);其他试剂均为分析纯。

  2  方法

  2.1  供试品的溶液的制备  根据大黄素、大黄酚及其苷的性质,参考《中国药典》(2000年版一部)以及有关文献报道[1],用Lg(27)正交设计表安排试验对提取方法、水解条件和水解时间等进行了优选(见表1)。

  表1  因素水平表(略)

  最佳条件为A2,B3,C1,D1。故取新复方大青叶片20片,除去糖衣,精密称定(平均片重0.3989g),研细,取3g,精密称定,精密加入甲醇30ml,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。取续滤液25 ml,挥去甲醇,残渣加入10%HCI 20ml,水浴加热水解30min,冷却。用乙醚分3次提取,每次30ml,合并乙醚液,挥去乙醚,残渣用甲醇溶解并转移至10 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。

  2.2  对照品溶液的制备  精密称取大黄素对照品5.30mg、大黄酚对照品4.30mg,分别置50 ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀;精密吸取大黄素1 ml、大黄酚2 ml,分别置25 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(大黄素每1ml中含4.24μg、大黄酚每1ml中含6.88μg)。

  2.3  阴性对照样品溶液(缺大黄)的制备  取缺大黄药材的新复方大青叶片20片(根据卫生部药品标[2]自制),除去糖衣(平均片重0.3991g),研细,取3g,精密称定,精密加入甲醇30ml,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。取续滤液25 ml,挥去甲醇,残渣加入10%HCI 20ml,水浴加热水解30min,冷却。用乙醚分3次提取,每次30ml,合并乙醚液,挥去乙醚,残渣用甲醇溶解并转移至10 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。

  2.4  色谱条件  色谱柱:Prodigy ODS3 C18(250nm×4.6nm,5μm),柱温:28℃;流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15);流速:1.0ml/min;检测波长:254nm;进样量:20μl。

  3  结果

  3.1  标准曲线的制备  分别精密吸取大黄素对照品溶液(4.24μg/ml)、大黄酚对照品溶液(6.88μg/ml)5、10、15、20、25、30μl,注入高效液相色谱仪,测定其峰面积,结果见表2、表3。大黄素回归方程为:Y1=17410.15+3646.64X1,r1=0.9991;大黄酚回归方程为:Y2= 14309.17+5351.37X2,r2=0.9997(见图1~3)。

  表2  大黄素线性范围(略)

  表3  大黄酚线性范围(略)

  图1  对照品HPLC图(A-大黄素  B-大黄酚)(略)

  图2  样品HPLC图(A-大黄素  B-大黄酚)(略)

  图3  阴性对照样品HPLC图(缺大黄)(略)

  3.2  稳定性试验  分别精密吸取大黄素对照品溶液(4.24μg/ml)、大黄酚对照品溶液(6.88μg/ml)各20μl,分别注入液相色谱仪中,每隔30 min测定1次,RSD(%)=1.23,结果见表4、表5。

  表4  大黄素稳定性试验(略)

  3.3  精密度试验  分别精密吸取对照大黄对照品溶液(4.24μg/ml)、大黄酚对照品溶液(6.88μg/ml)各10μl,连续进样5次,按上述相同条件测定,大黄素峰面积积分值为:171095、169897、168962.4、170065.1、172073,RSD(%)=0.70。大黄酚峰面积积分值为:383844、369997、379035.9、379006.1、382080,RSD(%)=1.41。

  表5  大黄酚稳定性试验(略)

  3.4  重复性试验  按上述相同条件对同一批新复方大青叶片(东阿阿胶集团临清华威药业有限公司,批号20050330)样品测定5次,每片大黄素含量(mg)分别为0.0176,0.0173,0.0175,0.0172,0.0173,RSD(%)=1.15。每片大黄酚含量(mg)分别为0.509,0.0504,0.0495,0.0508,0.0494,RSD(%)=1.49。

  3.5  加样回收率试验  取本品粉末约0.2g,精密称定,加入一定量的大黄素对照品,按“2.1”项下方法提取,制备供试品溶液,按上述条件进行测定,结果见表6、表7。

  表6  大黄素加样回收率试验(略)

  表7  大黄酚加样回收率试验(略)

  3.6  样品测定  取3批新复方大青叶片(东阿阿胶集团临清华威药业有限公司,批号20050330,20050327,20050204),按上述条件测定,结果见表8。暂定本品每片含大黄以大黄素(C15H10O5)计,不得少于0.017mg;每片含大黄以大黄酚(C15H10O4)计,不得少于0.050mg。

  表8  样品测定结果(略)
 
  4  讨论

  新复方大青叶片由于其生产工艺中大黄是以复方大青叶提取物进行投料的,若采用高效液相色谱法对大黄所含的大黄素为指标进行质量控制,不但有效地保证其药品质量,同时还加强了对其生产工艺的监督,从而有效防范一些生产厂家以大黄药材直接进行生产的不法行为。

  【参考文献】

  1  丁安伟,黄敏,孔令东,等.正交试验法对大黄总蒽醌衍生物提取条件的优选.中药通报,1988,13(5):293.

  2  新复方大青叶片.中华人民共和国卫生部药品标.中药成方制剂,第5册,1992,195.

  (编辑:余  强)

  作者单位: 252000 山东聊城,聊城市药品检验所 

        250014 山东济南,山东中医药大学(2005级中药学博士生)

 


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