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低压液相层析法与离子交换层析法测定糖化血红蛋白的方法学比较

来源:INTERNET 作者:马江涛 邹钢 纪玲等 2005-8-2
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摘要: 【摘要】 目的 探讨低压液相层析法(LPLC)与离子交换层析法测定糖化血红蛋白方法学的差异。 方法 分别对低压液相层析法与离子交换层析法进行方法学评价,考察2种方法的精密度、相关性等。50%,离子交换层析的批内、批间平均变异系数为4。8%,离子交换层析法的平均回收率为107。...


  【摘要】 目的  探讨低压液相层析法(LPLC)与离子交换层析法测定糖化血红蛋白方法学的差异。 方法 分别对低压液相层析法与离子交换层析法进行方法学评价,考察2种方法的精密度、相关性等。 结果  LPLC的批内、批间平均变异系数为3.01%,3.50%,离子交换层析的批内、批间平均变异系数为4.93%,5.23%;HbA1c实际值为4.6%,7.9%,12.8%时,LPLC平均回收率为101.8%,离子交换层析法的平均回收率为107.4%;2种方法结果呈正相关(r=0.982,b=-0.351),直线回归方程为Y(LPLC)=0.982X(离子交换层析)-0.351,两法比较差异无显著性(P>0.05);黄疸和脂血对2种方法无干扰。 结论  低压液相层析法与离子交换层析法测定糖化血红蛋白适用于临床
      
  【关键词】  糖化血红蛋白;低压液相层析;离子交换层析
     
  【Abstract】 Objective To study the methodology differences about measuring HbA 1c by the low performance liquid chromatography(LPLC)and ion exchange chromatography(IEC).Methods Respectively examine the accuracy,pre-cision,interference element and relationship of measuring HbA1c by the low performance liquid chromatography and ion exchange chromatography.Results The average CV value was respectively3.01%in batch assay and3.05%in day to day assay for LPLC,while for IEC,the average CV value was respectively4.93%in batch assay and5.23%in day to day assay.The average recovery rat for LPLC and IEC was respectively101.8%and107.4%when true value of HbA1c was4.6%,7.9%and12.8%.the relationship of LPLC and IEC was described as following formu-las:Y=0.982X-0.351,had not statistical differences(P>0.05),bilirubin,triglycerides and cholesterol had no interference for LPLC and IEC.Conclusion The LPLC and IEC were simple,sensitive and quantitative methods for measuring HbA 1c .
   
  【Key words】 HbA 1c ;low performance liquid chromatography(LPLC);ion exchange chromatography(IEC)
      
  糖化血红蛋白(HbA1c)的测定是糖尿病患者(DM)监测血糖控制水平的重要指标之一。本院现用Bio-Rad公司的DiaSTAT系统(采用的是低压液相层析法)和微柱离子交换层析法测定糖化血红蛋白,为了考察这两种方法的可行性,我们进行了方法学分析,以了解两者之间的差异,现报道如下。
    
  1 材料与方法
    
  1.1 材料与仪器 722光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂),DiaSTAT糖化血红蛋白测定仪(Bio-Rad公司),其检测试剂Bio-Rad公司提供,离子交换层析法试剂盒由西班牙Biosystem.S.A公司提供。
    
  1.2 标本采集及方法 采集门诊或体验标本80例,其中健康人和糖尿病患者各40例,EDTA-K2抗凝,分别用Dia-STAT系统和离子交换层析法测定HbA1c,所有操作严格按操作说明书进行。
   
  1.3 统计学处理 所有数据经SPSS10.0for windows软件进行分析。

  2 结果
    
  2.1 重复性试验 批内、批间变异系数:选用高、中、低值标本各1例,重复测定20次,结果见表1。LPLC的批内、批间平均变异系数为3.01%,3.50%,离子交换层析的批内、批间平均变异系数为4.93%,5.23%。

  表1 两种方法测定糖化血红蛋白重复性试验结果 (略)
    
  2.2 回收试验 选用高中低标本各1例进行测定,结果如表2。LPLC平均回收率为101.8%,离子交换层析法的平均回收率为107.4%。

  表2 两种方法测定糖化血红蛋白回收试验结果 (略)
   
  2.3 LPLC与离子交换层析法测定糖化血红蛋白的比较 同时测定50份样品,两种方法结果呈正相关(r=0.982,b=-0.351),直线回归方程为Y(LPLC)=0.982X(离子交换层析)-0.351;两法比较差异无显著性(P>0.05)。
   
  2.4 干扰试验 分别将高脂血浆(胆固醇、甘油三酯浓度分别为7.53mmol/L,9.54mmol/L)、黄疸血浆(总胆红素为334.62μmol/L)混入血标本中进行检测,结果表明黄疸和脂血对两种方法无干扰。
   
  2.5 LPLC与离子交换层析法测定糖化血红蛋白的临床应用 健康组和糖尿病组测定值显示,离子交换层析法略高于LPLC,结果如表3。
    
  表3 两种方法测定值HbA 1c 测定值比较(略)
    
  3 讨论
    
  HbA 1c 是每一个β链N端缬氨酸与葡萄糖进行非酶缩合反应,形成不稳定的Schiff碱,然后经过Amadori重排,形成稳定的酮胺化合物HbA 1c[1] 。血液中葡萄糖浓度越高,维持时间越长,HbA 1c 的百分含量也越高[2] ,由于红细胞的半寿期为60天,因而HbA 1c 可反映近2~3个月的血糖水平,这对于监测DM患者药物的疗效和病情起到至关重要的作用 [3,4] 。
   
  现检测HbA 1c 的方法有分光光度法、电泳法、离子交换 层析、亲和层析法、高压液相层析法(HPLC)、低压液相层析法等(LPLC)等,其中HPLC被公认为金标法 [4,5] ,但其需要昂贵的仪器或耗材,不易推广。考虑到DM患者长期花费,需寻找一种准确、操作简单便利、快速的方法,为临床实验室应用。
   
  虽然LPLC并非检测HbA 1c 的金标法,但其准确性、重复性和HPLC一起通过了NGSP(美国糖化血红蛋白标准化项目)的认证,被认定为是一种可靠的方法。本研究结果显示,其批内、批间平均变异系数为3.01%,3.50%,与NGSP认证的<4%相合,且其平均回收率为101.8%,这充分说明了此方法的精密度高,准确性好。而离子交换层析法,批内、批间平均变异系数为4.93%,5.23%,平均回收率为107.4%,较LPLC稍显不足,操作也较繁琐,属于手工方法,易受温度、操作者和异种血红蛋白(如HbF)等的影响 [1] ,不便于自动化和大批量标本的检测,适合于中小型医院临床应用。但与LPLC呈正相关(r=0.982,b=-0.351),两种方法比较差异无显著性,显示其精确度、准确度良好,也可为临床所接受。
   
  同时我们也检测了其主要干扰因素甘油三酯和胆红素对标本的影响,结果表明其影响极小,这也保证了结果的稳定性和可靠性,为临床和患者的标本采集提供了极大的方便。本文还进一步分别对健康人和糖尿病患者进行了测定,也充分证明了以上论点。可见,这两种方法均适用于临床监测糖尿病的病情。

  【参考文献】
    
  1 朱忠勇,马立人,王艾丽,等.实用医学检验学,北京:人民军医出版社,1997,428-433.
   
  2 Tietz NW.Clinical guide to laboratory test,3rd ed.Sauders CO,1999.
   
  3 The Diabetes Control and Complications Trial Research Group.The ef-fect of intensive treatment of diabetes on the development and progres-sion of long term complications in insulin-dependent diabetes mellitus. N Engl J Med,1993,329:977-986.
   
  4 Pravatmuang P,SAE Ngow B,Whanpuch T,et al.Effect of HbE and HbH on HbA1c level by ionc exchange HPLC comparing to immunotur-bidimetry.Clin Chim Acta,2001,313(2):171-178.
   
  5 文建新,周继凯,伍汉文,等.HPLC系统测定人红细胞HbA 1c 的方法.湖南医科大学学报,1998,23(3):317-319.
   
  作者单位:518020广东深圳,深圳市人民医院,暨南大学医学院附属第二医院检验医学部
   
       518030广东深圳,深圳市福田区人民医院


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