144例乙型肝炎患者T淋巴细胞亚群分析

   【摘要】 目的 探讨急性/慢性乙型肝炎/乙型肝炎肝硬化外周血T淋巴细胞亚群的特点以及其与血清HBV-DNA水平及肝损害程度的关系。方法 检测急性/慢性乙型肝炎/乙型肝炎肝硬化同时间的外周血中HBV-DNA拷贝数、丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平;采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群。结果 肝硬化组外周血CD 3+ 、CD 4+ 、CD 8+ 细胞计数均少于急性、慢性组及正常对照组（P均<0.01）;急乙肝、慢乙肝、肝硬化组CD 4+ /CD 8+ 比值明显高于对照组（P<0.01）。HBV-DNA（+）组CD 3+ 、CD 4+ 、CD 8+ 细胞计数明显少于HBV-DNA（-）组，其中CD 3+ 、CD 4+ 细胞计数差异有显著性（P<0.01）;CD 4+ /CD 8+ 比值差异无显著性。ALT≤80U/L组CD 3+ 、CD 4+ 、CD 8+ 细胞计数明显少于ALT>80U/L组，差异有显著性（P<0.05）。上述两组CD 4+ /CD 8+ 比值差异均无显著性。结论 在慢性HBV感染者外周血中细胞免疫的异常表现为以T淋巴细胞计数的异常为主，T淋巴细胞计数与乙型肝炎的临床分型有一定的相关性，与血清HBV-DNA水平呈负相关，在ALT上升期T淋巴细胞计数增高，提示T淋巴细胞计数可作为判断病情、选择抗病毒时机及判断疗效的指标之一。

关键词 乙型肝炎 T淋巴细胞亚群

The analysis of T lymphocyte subset in144patients with hepatitis B infection

Huang Yunli，Ma Lina，Zhang Yonghong，et al.

Affiliated Beijing YouAn Hospital of capital Medical University，Beijing100054.

【Abstract】 Objective To investigate the relationship of T lymphocyte subset，level of serum HBV-DNA and liver function. Methods The patients were divided into three groups，acute hepatitis B，chronic hepatitis B and cirrhosis. A retrospective study was designed to compare the relationship of HBV-DNA，ALT，and T lymphocyte subset in the three groups. Flow cytometer was used to exam T lymphocyte subset. Results CD 3+ T cell count，CD 4+ cell count，and CD 8+ T cell count in cirrhosis group are all lower than acute group，chronic group，and normal control（P<0.01）. CD 4+ /CD 8+ T in acute group，chronic group，and cirrhosis group are higher than in normal control（P<0.01）. CD 3+ T cell count，CD 4+ T cell count，and CD 8+ T cell count are lower in HBV-DNA positive group than HBV-DNA negative group. There are significant difference in CD 3+ T and CD 4+ T（P<0.01），and no difference in CD 4+ /CD 8+ T. CD 3+ T cell count，CD 4+ T cell count，and CD 8+ T cell count are lower in ALT≤80U/L group than ALT>80U/L group（P<0.05）. Conclusion Abnormality of cellular immunity in patients with chronic hepatitis B infection display abnormality of T lymphocyte subset count mainly. There is relation ship of T lymphocyte subset count and clinical diagnosis of hepatitis B infection. Negative correlation was found with level of HBV-DNA and T lymphocyte subset. T lymphocyte subset count increase with the increasing of ALT. T lymphocyte subset count can be as one of index of judging the condition of patients and prognosis and deciding the time and result of the anti virus treatment.

Key words hepatitis B T lymphocyte subset

乙型肝炎（乙肝）的发生、发展与宿主的细胞免疫功能的状态密切相关，但确切的发病机制尚未明了，本文对144例乙肝患者的T淋巴细胞亚群进行检测，并初步探讨了其与血清HBV-DNA水平、血清ALT水平及与乙肝临床分型的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象 全部病例均为2003年1月～2003年12月期间我院住院病人，其中男118例，女26例，共144例，年龄平均42.12±13.14岁，诊断符合2000年西安第10次全国传染病与寄生虫学术会议修订的标准 ［1］ ，其中急性乙肝29例，慢性乙肝56例，乙肝肝硬化59例，并排除合并糖尿病、甲状腺疾病及HAV、HCV、HDV、HEV感染，其中29例急性乙肝患者2月后均出现HBsAg血清学转换。另有健康献血员18人。

1.2 方法 全部病例均入院后第2日采血。外周血T淋巴细胞计数检测使用BD公司的流式细胞仪检测;扩增法定量检测血清中HBV-DNA水平，检测值下限为HBV-DNA<10 3 ;血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测仪器使用Olympus AU640全自动生化检测仪，正常值<40U/L。

1.3 统计学处理 资料采用SPSS10.0统计软件进行单因素方差分析和t检验，数据用均数±标准差（X±s）表示。

2 结果

2.1 临床型别与T淋巴细胞 对急乙肝、慢乙肝、乙肝肝硬化及正常对照组进行T淋巴细胞亚群检测，发现从急乙肝、慢乙肝到乙肝肝硬化CD 3+ 、CD 4+ 、CD 8+ 细胞计数呈现逐渐减少趋势（详见表1）。肝硬化组CD 3+ 、CD 4+ 、CD 8+ 细胞计数均少于急、慢性乙肝组及正常对照组，有统计学差异（P均<0.01）;慢乙肝组CD 3+ 、CD4+ 、CD8+ 细胞计数略低于急乙肝组，但差异无显著性;3组病例CD 4+ /CD 8+ 比值明显高于对照组（P<0.01）;肝硬化组CD4+/CD8+ 比值高于急乙肝和慢乙肝组，但无统计学差异。

2.2 病毒载量与T淋巴细胞 按血清HBV-DNA水平将 病例分组，HBV-DNA定量<10 3 为（-）组，HBV-DNA定量≥10 3 为（+）组，比较两组间的T淋巴细胞亚群特点（见表2），HBV-DNA（+）组CD 3+ 、CD 4+ 、CD 8+ 绝对计数明显低于HBV-DNA（-）组，其中CD 3+ 、CD 4+绝对计数差异有显著性（P<0.01）;CD 4+ /CD 8+ 比值差异无显著性。

2.3 转氨酶水平与T淋巴细胞 按血清ALT水平将144例病人2组，比较T淋巴细胞亚群的差异（见表3）。1组ALT<80U/L（低酶组），2组ALT≥80U/L（高酶组）。1组CD 3+ 、CD 4+ 、CD8+ 绝对计数明显少于2组，与2组差异有显著性（P<0.05）;两组中CD 4+ /CD 8+ 比值均差异无显著性。

表1 各型乙型肝炎外周血T淋巴细胞亚群特点 （X±s）（略） 注:肝硬化与各组比较 △ P<0.01;3组病例与对照组比较 ˇ P<0.01。

表2 慢性乙肝中HBV-DNA定量水平与T淋巴细胞亚群的关系 （X±s）（略）注:两组中CD 3+、CD 4+ 绝对计数差异有显著性 ˇ P<0.01

表3 144例病人ALT水平与T淋巴细胞亚群的关系 （X±s）（略）注:a为1组与2组比较CD 3+、CD 4+ 、CD 8+ 绝对计数差异有显著性P<0.05;

3 讨论

乙型肝炎的发病机制与免疫应答有着十分密切的关系 ［2］ ，HBV感染肝细胞并在其中复制，一般并不直接引起肝细胞病变。引起肝细胞损伤是宿主免疫系统对被HBV感染肝细胞的免疫应答所致。HBV感染仅起到“点火”的作用，而宿主的免疫功能状态显著影响疾病的发展。乙型肝炎的免疫病理变化主要由T细胞调节，T细胞的功能有双重性:清除病毒或控制病毒的扩散;但同时也因免疫损伤而加重病变 ［3］ 。T淋巴细胞有不同亚群，CD 3+ T淋巴细胞的表面标志，CD4+ T细胞主要为辅助性T细胞，可产生多种细胞因子，引起迟发型超敏性炎症反应（DTH），诱发细胞凋亡。CD 8+ T细胞主要为细胞毒性T细胞（CTL），CTL介导的细胞毒活性是基于穿孔素引起的溶细胞损伤和坏死，或基于Fas介导的细胞凋亡。CTL是免疫系统清除病毒感染细胞的主要效应细胞 ［3］ 。T淋巴细胞的数量和状态直接反映细胞免疫功能的状态。 本文研究表明，在29例急性乙型肝炎患者外周血中T淋巴细胞亚群的细胞数较正常对照明显增加，提示免疫功能正常者在急性病毒感染后，能刺激特异性的T淋巴细胞增生、活化，从而清除病毒。而慢乙肝患者可能存在不同程度的细胞免疫功能异常，因而T淋巴细胞的激活、分化不明显，以至于不能完全清除病毒。随着病程的进展，T淋巴细胞被高负荷的病毒所消耗，尤其是CTL降低明显［4］ 。本组资料表明CD 3+ 、CD 4+、CD 8+ 细胞计数在急肝、慢肝到肝硬化呈现逐渐减少，提示T淋巴细胞计数与临床型别有一定关系，肝硬化患者各T淋巴细胞亚群计数均最低。在肝硬化患者虽有CD 3+ 、CD 4+ 明显减少，但CD 4+ /CD 8+ 比值确可增高，可能与CTL的耗竭更明显有关。比较ALT与T淋巴细胞计数的关系发现，低酶组患者的CD 3+ 、CD 4+ 、CD 8+ 绝对计数明显低于高酶组患者，差异有显著性（P<0.01），特别是CD 8+ 数的减少。表明低酶的乙肝患者的免疫应答较弱，T淋巴细胞激活不明显，因而免疫损伤亦轻，故ALT较低。相反，高酶患者的T淋巴细胞激活明显，尤其是CTL的增加，其有利于清除病毒，但由于免疫清除是“双刃剑”，在清除被HBV感染的肝细胞时也会造成肝细胞膜的损伤而引起ALT的升高。因此，ALT的高低在某种程度上与细胞免疫功能有相关性。正是在抗病毒治疗时往往选择在ALT上升期的道理所在。因此推测，CD 8+ 计数也可能是选择抗病毒治疗时机和预测抗病毒效果的可靠指标。本研究也证明血清HBV-DNA（+）组较HBV-DNA（-）组CD 3+ 、CD 4+ 数明显减少，CD 8+ 细胞数也明显减少，与Wang KX ［5］ 及Sobao Y ［6］ 等报道一致。高病毒载量不仅可以消耗T淋巴细胞，也可诱发机体的免疫耐受，这均可导致免疫应答低微。我们在临床常可见到这类病人的抗病毒疗效欠佳。本文就乙肝患者外周血中T淋巴细胞亚群的特点进行了初步分析，提示T淋巴细胞计数:①与乙肝的临床分型有一定的关系，T淋巴细胞计数在急肝、慢肝到肝硬化呈现逐渐减少趋势;②与乙肝病毒载量呈负相关，HBV-DNA<10 3 组患者T淋巴细胞计数明显高于HBV-DNA定量≥10 3 组患者;③与ALT水平正相关，可作为选择抗病毒治疗时机 和预测抗病毒效果的指标之一。

由于本文尚未检测HBV特异性T淋巴细胞亚群的情况，外周血T淋巴亚群的意义有待于进一步的研究。

参考文献

1 中华医