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酶法测定血清(浆)酒精浓度

来源:INTERNET 作者:范云程 马小宏 2005-8-2
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摘要: 【摘要】 目的 建立简单、快速、灵敏和特异的血液中酒精浓度检测的方法。结果 112人承认饮酒后驾车,血中乙醇浓度34~290mg/dl。15人血清乙醇浓度30mg/dl,除1人(24mg/dl)承认饮酒外,其余14人均否认饮酒。结论 NADH方法检测血液中酒精浓度准确可靠。...


    【摘要】 目的 建立简单、快速、灵敏和特异的血液中酒精浓度检测的方法。方法 对交通管理部门送检疑有酒后驾车的127人进行检测。结果 112人承认饮酒后驾车,血中乙醇浓度34~290mg/dl。15人血清乙醇浓度<30mg/dl,除1人(24mg/dl)承认饮酒外,其余14人均否认饮酒。结论 NADH方法检测血液中酒精浓度准确可靠。

关键词 酶法 血液 酒精浓度

酒后驾车是一个世界性的交通安全问题,每年都有大量的交通死亡事故与酒后驾车有关。血液中酒精浓度测定,是交通部门用以判断酒后驾驶或醉酒驾驶的重要依据。血液中酒精浓度测定早期用蒸馏氧化法和渗透压法,准确性和特异性均较差。后来用醇氢脱氢酶法和气相色谱分析,虽然准确性高,但仪器价格昂贵,一般医院难以推广。为了配合交通管理部门的工作,本省内我们首家引进美国罗氏(Roche)公司生产的酒精测定试剂盒,用全自动生化分析仪进行血液中乙醇含量测定,经一年多的应用,结果比较满意且测定非常方便。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 测定原理 乙醇+NAG + ∠乙醛+NADH+H +反应产生NADH,根据吸光度的变化,测得乙醇的浓度。

1.2 试剂盒货号11776312190,Roche公司生产。R 1 :缓冲液及防腐剂;R 2 :NAD/ADH ≥3mmol/L NAD ≥37U/ml ADH 稳定剂及防腐剂

1.3 c.f.a.s校正品货号20751995190,Roche公司生产,浓度为227mg/dl(49.3mmol/L)。

1.4 质控品(自配)精确吸取无水乙醇(AR)1.0ml,用1000ml的容量瓶稀释至刻度。

1.5 仪器HITACHI7170A全自动生化分析仪。

1.6 仪器分析参数:Assay/Point:Rate A5/11~17。Wave(Sub/Main):700/340nm。Normal:8μl。Reagent:R 1 100μl;R 2 220μl。

2 结果

2.1 线性范围 取混合血清一份,加入无水乙醇至500mg/dl,分别稀释成400、300、200、100、50、10和5mg/dl8个浓度,用本法测定,按NCCLS EP6-P文件作线性评价 [1] ,其线性回归方程为:Y=0.98X-1.52,r=0.999。在0~500mg/dl范围内线性良好。

2.2 精度试验 按NCCLS EP5-T2文件评价 [1] ,用自配的质控品每天测定1次,共40次。X=76.64mg/dl,SD=1.7mg/dl,批内CV=1.02%,批间CV=2.20%。说明精密度良好。

2.3 干扰试验 胆红素<60mg/dl;血红蛋白<200mg/dl;甘油三酯<1000mg/dl对本试验无影响。

2.4 方法比较 选10份含量不同的标本(范围在5~290mg/dl)用本法(Y)和气相色谱法(X)测定,按NCCLS EP9-P评价方案作方法比较,结果:Y=1.022X+0.08,r=0.998。

2.5 结果 2003年4月份起,我市交通管理部门共送检疑有酒后驾车者127人,其中15人血清乙醇浓度<30mg/dl(0~29mg/dl),除1人(24mg/dl)承认饮酒外,其余14人(0~13mg/dl)均否认饮酒。另外112人均最终承认饮过酒,血中乙醇浓度在34~290mg/dl。

3 讨论

血液中的酒精浓度达到50~100mg/dl时,其症状为面色潮红、精神兴奋、反射减慢、视敏度减低,此时驾车有可能发生交通事故;酒精浓度>100mg/ml时,中枢神经受抑制,驾车时很容易发生交通事故。欧美国家将血清中乙醇含量≥50mg/dl作为酒后驾驶的标准。依据1997年国家颁布的《机动车驾驶员驾车时血液中酒精含量规定》,我省出台驾车人血液酒精含量限定标准的地方标准为:驾驶员血液中酒精含量大于或等于30mg/dl为酒后驾车,含量大于或等于100mg/dl为醉酒驾车。新的道路交通安全法实施后,发生交通事故是否酒后驾车、酒后驾车还是醉酒驾车的法律依据都是用量化来表示的,实验室为交通管理部门提供驾驶人员血液中酒精含量,是判断事故责任的依据之一,因此准确性是至关重要的。

酶法催化乙醇为乙醛,同时还原NAG + 为NADH。样本中乙醇浓度可以通过监测340nm波长处NADH吸光度获得。该法灵敏度高,精密度好,批间CV=2.20%,且和气相色谱法有良好相关,适合各种类型的自动生化分析仪,临床实验室测定非常方便。是一种简单、快速、灵敏和特异的检测方法。注意事项:由于乙醇易挥发,采集标本时要使用一次性真空针管采血,隔绝标本与空气的接触,以免影响结果的准确性。

参考文献

1 杨昌国,许叶.线性评价和干扰试验中NCCLS评价方案的应用.临床检验杂志,1999,17(3):47-49;184-186.

作者单位:226500江苏省如皋市人民医院


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