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不同温度对HBV标志物检测结果的影响

来源:INTERNET 作者:吴淑梅 高默杰 张乐之 2005-7-28
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摘要: 【摘要】 目的 探讨不同温度对乙型肝炎病毒(HBV)标志物检测结果OD值的质量影响。方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法,将同一份标本血清分别加入两块预先包被的酶标反应板内,在同一时间按照两种不同的预温方式一同在37℃水浴箱内预温,测定两种预温方式结果的OD值差异。结果 同一份标本两种预温方式的检测结果OD值存......


    【摘要】 目的 探讨不同温度对乙型肝炎病毒(HBV)标志物检测结果OD值的质量影响。方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法,将同一份标本血清分别加入两块预先包被的酶标反应板内,在同一时间按照两种不同的预温方式一同在37℃水浴箱内预温,测定两种预温方式结果的OD值差异。结果 同一份标本两种预温方式的检测结果OD值存在一定的差异(甚至是阴阳性的差异)。结论 温度对HBV标志物检测结果OD值质量有直接影响。

关键词 温度HBV OD值 质量

Effect of temperature variance on HBV markers detection result

 Wu Shumei,Gao Mojie,Zhang Lezhi

Department of Laboratory Diagnosis,Changhai Hospital,Second Military Medical University,Shanghai200433.

【Abstract】 Objective To study the effect of temperature variance on OD detection result of hepatitis B virus(HBV)markers.Methods The serum samples from the same patient were added to two enzyme linked plates which were heated up in water bath bin at37℃by two different methods simultaneously.The OD value difference of two heating methods was detected with enzymelinked immunosorbent assay(ELISA).Results The OD value was signifiˉcantly different between serum samples in two heating methods.Some samples were HBV positive in one heating method,while negative in the other method.Conclusion Temperature can directly affect the OD detection quality of HBV markers.

Key words temperature HBV OD value quality

HBV标志物五项指标:表面抗原(HBsAg)、表面抗体(抗-HBs)、E抗原(HBeAg)、E抗体(抗-HBe)、核心抗体(抗-HBc)的检测(俗称三抗、两对半),是全国众多医院多年以来的常规检测项目,多采用ELISA法(除外少数医院应用进口仪器和试剂检测)。按照试验的要求,加样的酶标反应板要在37℃水浴箱内预温,在一定的温度及时间内使包被物与相应的抗原或抗体及酶标记物结合。但是,如果采用的预温方式不妥,结合反应则达不到37℃,因而直接影响检测结果的OD值真值质量,甚至出现阴、阳性结果的判断错误。我们做了两种预温方式的试验(简称老方式、新方式),得出的结论是:新、老预温方式结果OD值存在一定差异;老的预温方式可造成部分弱阳性的标本检测结果成为假阴性;表面抗原和E抗原的质控标本检测质控值偏低;E抗体和核心抗体的临界值(COTOFF)偏低。

1 材料和方法

1.1 标本收集 本试验6个不同OD值梯度的表面抗原、表面抗体、E抗原标本均为本院门诊和住院病人标本,选择OD值由弱到强不同梯度的弱阳性、阳性标本进行试验。E抗体、核心抗体标本采用试剂盒配备的阴阳性对照品。表面抗原、E抗原质控品采用上海市临床检验质量控制中心提供的定值血清。

1.2 仪器与试剂 OD值测定使用Labsystems Dragon Wellscan MK3酶标仪比色。试剂由上海科华生物技术有限公司提供。

1.3 预温方式 见表1。

表1 预温方式老方式

1.4 数据处理 以标本测定实际OD值数据取均值(X)表示,组间比较为新方式OD值减去老方式OD值换算之差。2 结果两种预温方式对乙型肝炎病毒(HBV)标志物检测结果OD值的影响见表2。

 表2 同一标本两种预温方式检测结果OD值对比

注:A代表老方式结果;B代表新方式结果;+代表阳性;-代表阴性;每个标本两种预温方式各做10孔OD值取均值(X);OD值均值计算采用四舍五入保留小数点后2位;表面抗体、E抗原的标本,两种预温方式的检测OD值差与表面抗原基本相同,不再表述。

3 讨论

酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HBV标志物(定性试验)的特点是敏感、特异、快速、检测量大、成本低,这已被医学界检验系统公认。但其方法的缺点是干扰因素特别多,从加样、预温、洗板、显色到比色步骤繁多,其中的每一步控制不好都可能影响检测结果的质量。尤其是酶(此试验标记的酶是辣根过氧化物酶)对温度的敏感性是众所周知的,鉴于此,对HBV标志物检测时的温度控制就显得特别重要,尤其是预温方法的选择,更是保证检测质量的关键。然而,长期以来对HBV标志物的检测质量把关并没有引起大家的足够重视,从而出现同一患者的标本在各家医院的检测结果的不一致性,造成医患矛盾。探究其质量的把关关键问题,我们认为除人为的操作技术及偶然性误差外,在检测的系统误差内,最关键的就是对酶标记物(酶标记抗原或抗体)的预温温度控制,而对酶温度控制的优劣则取决于采取什么样的预温方式,从而直接控制检测标本的结果质量。

我们通过多次的试验证明,预先包被的酶标反应板加样加酶后,将反应板直接放入预先设定并恒温的37℃水浴箱内的试管架上进行预温(试管架上的温度计显示必须要达到37℃),此种方法除去开关水浴箱盖产生的温度差,可使包被物及标本与酶标记物的结合反应2min内达到37℃,并能恒温到所要求的预温时间,从而达到试验所要求的温度,相对保证检测结果的质量。以上试验已充分说明同一份标本老方式和新方式的预温方法(见表2)使检测结果及OD值存在一定的差异,尤其是标本的OD值在临界值(COTOFF值)附近的弱阳性标本,老方式预温方法由于达不到试验所要求的温度(最终反应温度只有33℃),酶标记抗 体(或抗原)与相应的抗原(或抗体)不能充分反应,易直接导致假阴性的错误结果。例如,第1、2号标本,按照试剂规定的COTOFF值0.105的判断标准,老方式预温则出现了假阴性结果。表面抗原质控标本测定OD值老方式预温较新方式低0.22。E抗体和核心抗体的临界值检测结果(阴性对照+阳性对照/2)按照试剂规定COTOFF值应不低于1.0,而老方式较新方式COTOFF值偏低0.3,以E抗体为例,按照测定的COTOFF值0.82(老方式)为判断标准,则小于0.82的判断为阳性,大于0.82的判断为阴性,其结果则造成E抗体标本测定OD值在0.82(老方式)至1.10(新方式)之间的标本出现假阴性的错误。以此类推,核心抗体也同样是老方式预温使标本OD值在一定范围内的会出现假阴性的错误。所以,以往检测采用的老方式预温必须废除。综上所述,如果标本检测的预温达不到试验要求的温度,将会对试验结果产生直接的影响,而使检测标本结果出现偏差,影响检测的质量。因此,务必重视HBV标志物的检测质量,尤其是预温方式和温度的把握。此外,鉴于此项目检测的特异性,必须选用有国家医药监督管理局批检,且室间质评活动中成绩好的试剂长期使用 [1] 。只有注重质量管理 [2] ,保证检验的结果质量,才能对患者的病情诊断、治疗效果及预后观察提供准确的依据 [3]

参考文献

1 吴淑梅,惠小阳,郭品娥.乙型肝炎病毒标志物检验的质量控制.解放军医院管理杂志,2003,10(1):42-43.

2 赵宁志,郭爱勇,顾军.新形式下军队医院医疗质量管理.解放军医院管理杂志,2002,9(3):234-235.

3 程红革.影响乙肝两对半检验质量的因素.齐齐哈尔医学院杂志,2001,22(9):10-12.

作者单位:200433第二军医大学长海医院实验诊断科

300162天津武警医学院附属医院检验科


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