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新生隐球菌两种培养方法的比较

来源:中华医学实践杂志 作者:王 娅,冯桂香,金志雄,朱明磊 2011-6-29

摘要: 【关键词】 新生隐球菌 培养方法 【中图分类号】 R446。5 【文献标识码】 B 【文章编号】 1684-2030(2010)02-0102-01新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)是一种深部致病真菌,可在土壤、鸟粪,尤其是鸽粪中大量存在。人因吸入鸽粪污染的空气而感染,引起隐球菌病。在微生物实验教学过程中,常需要培养出形态典......


【关键词】  新生隐球菌 培养方法

【中图分类号】  R446.5        【文献标识码】  B        【文章编号】  1684-2030(2010)02-0102-01

  新生隐球菌(Cryptococcus  neoformans)是一种深部致病真菌,可在土壤、鸟粪,尤其是鸽粪中大量存在。人因吸入鸽粪污染的空气而感染,引起隐球菌病。荚膜多糖是其重要的致病物质[1]。在微生物实验教学过程中,常需要培养出形态典型的新生隐球菌,即圆形或卵圆形的菌体外周有一圈透明的肥厚荚膜。常规培养将菌种接种于沙保弱琼脂培养基,室温或37℃培养2~5天后形成白色,不规则的酵母型菌落。镜检可见圆形或卵圆形菌体,常观察不到宽厚的荚膜,我们采用两种方法培养出带荚膜的新型隐球菌,现介绍如下。

  1  实验材料

  沙保弱琼脂高层斜面培养基(常规方法配制);无菌兔血清 ; "一得阁"墨汁;新生隐球菌菌种(本实验室保存)。

  2  实验方法

  2.1  传统方法  (1) 将新生隐球菌菌种接种于高层斜面沙保弱琼脂培养基上,电热恒温培养箱37℃培养约48h可形成肉眼可见的菌落。(2)取菌苔用生理盐水稀释成浓度为108个/ml(麦氏比浊管第7管)菌液,注意浓度不能过高,否则小鼠易迅速死亡。(3)腹腔注射(方法:先将针头平穿入小白鼠腹腔皮下,再将针头立起刺入腹腔内,这样可防止拔针后菌液外溢)接种剂量分别为0.5、0.7、 1.0、1.2、 1.5ml。每种用量3只,用不同颜色标记不同剂量。注射时小白鼠头朝下,偏右胯,偏离生殖器。(4)观察小白鼠(一般至少9天才会有反应,方有芽孢长出),待发病后,处死解剖,用棉签直接取腹腔液涂片,用火柴棒取墨汁与其混合均匀,加盖玻片,尽量避免产生气泡,置显微镜下观察有无新型隐球菌宽厚荚膜和芽生孢子。

  2.2  改良方法[2]  (1)将新型生球菌接种于沙氏斜面培养基上,置37℃培养至肉眼可见培养基表面有菌生长(约2天)。(2)将无菌兔血清加入沙氏斜面培养物中,其量约占斜面高度一半。然后倾斜试管,使血清完全淹没整个斜面。再将试管直立。置37℃培养5~8天。(3)取上述培养基靠近液面处的培养物少许与一滴墨汁在玻璃片上混合,加上盖玻片,轻压,使标本混合变薄,在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞,找到后转换高倍镜确认。

  3  实验结果 

  两种方法均能找到菌体大且荚膜肥厚的新型隐球菌。4  讨论(1) 传统方法虽能获得满意结果,但操作繁杂,耗时长,实验过程中易污染环境。(2) 改良培养方法,实验材料易获得,操作简便安全,获得的菌体形态典型。(3)经多次实验发现,传统方法在小白鼠体内实验获得的新生隐球菌多且芽生现象明显,荚膜直径较改良方法稍大。

【参考文献】
   1 李凡,刘晶星.医学微生物学.北京: 人民卫生出版社,2008,340-341.

  2 黄小珠.新型隐球菌培养方法.卫生职业教育,2007, 25(5):108.

  


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