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宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中不同类型HPV的感染状况

来源:《中华医学实践杂志》 作者: 2009-8-24
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摘要: 【摘要】 目的 探讨不同类型人乳头瘤病毒(HR-HPV)与宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的关系。方法 回顾性研究妇科门诊2800例已确诊的CIN和宫颈癌患者,采用聚合酶链反应(PCR)技术进行HPV分型检测,和第2代杂交捕获试验法(Hybrid Capture Ⅱ,HCⅡ)检测高危型HPV,对比低危型HPV 6/11和高危型HPV16、18两组型别感染者......


【摘要】  目的 探讨不同类型人乳头瘤病毒(HR-HPV)与宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的关系。方法 回顾性研究妇科门诊2800例已确诊的CIN和宫颈癌患者,采用聚合酶链反应(PCR)技术进行HPV分型检测,和第2代杂交捕获试验法(Hybrid Capture Ⅱ,HCⅡ)检测高危型HPV,对比低危型HPV 6/11和高危型HPV16、18两组型别感染者年龄和宫颈病变程度。结果 (1)2800例女性宫颈拭子HPV总感染1985例,阳性率70.89%;高危型HPV 16、18感染者1560例,阳性率55.74%;低危型HPV 6/11感染者840例,阳性率30%。高危型HPV感染率以宫颈癌组最高64.29%(P<0.005)。(2)在CIN Ⅰ患者的所有年龄组中,20~35岁所占比例最高66.49%;在CIN Ⅱ~Ⅲ患者中,>65岁所占比例最高32.82%;在宫颈癌患者中,35~50岁所占比例最高38.29%。(3)HPV感染的高峰年龄为<35岁,HPV阳性率达87.63%(P<0.005),并随年龄的增长,阳性率呈下降趋势;低危型HPV 6/11感染的高峰年龄亦<35岁,占阳性例数的55.78%(P<0.005);高危型HPV 16感染的高峰年龄为50~65岁,占阳性例数的13.4%;高危型HPV18感染的高峰年龄为>65岁,占阳性例数的40.29%(P<0.01)。低危型HPV 6/11多见于年轻妇女,而高危型HPV 16、18则多见于中老年妇女。(4)在CIN Ⅰ组中,低危型HPV 6/11所占阳性例数的比例最高82.63%。在CIN Ⅱ~Ⅲ及宫颈癌组中,均以高危型HPV 16所占阳性例数的比例最高,分别为37.43%、42%。结论 女性生殖道HPV感染率随宫颈病变程度的加重呈现升高趋势;不同宫颈病变中HPV型别分布不同。

【关键词】  宫颈肿瘤;宫颈上皮内瘤变;人乳头瘤病毒;筛选

The infection condition of different types of human papilloma virusin cervical intraepitheliai neoplasia and cervicaI carcinoma

    DENG Man-ling, TANG Wei, JIANG Xiao-lan.Maternal and Child Health Hospital of Binzhou City, Chenzhou 423000,China

    【Abstract】  Objective   To study the relationship among different types of human papilloma virus, cervical intraepithelial neoplasia and cervical carcinoma. Methods  Researching on 2800 gynecologic clinic women who underwent confirmed CIN or cervical carcinoma, applied PCR on HPV type test and Hybrid Capture Ⅱ on high risk HPV test I in order to compare the infection age and cervical lesion degree between low-risk HPV 6/11 type and high-risk HPV 16/18 type. Results  The HPV infection number of 2800 women was 1985, positive rate 70.89%. The high-risk HPV 16/18 type infection number was 1560, positive rate 55.74%. The low-risk HPV 6/11 type infection number was 840, positive rate 30%. The high-risk HPV infection rate of cervical carcinoma was the highest 64.29% (P<0.005). In CIN Ⅰ patients, the portion of 20 to 35 age was the highest 66.49%. In CIN Ⅱ~Ⅲ patients, the portion of >65 age was the highest 32.82%. In cervical carcinoma patients, the portion of 35 to 50 ages was the highest 38.29%. The peak age of HPV infection was <35 age. HPV positive rate reached 87.63% (P<0.005), the positive rate decreased with the increasing of age, the peak age of low-risk HPV 6/11 type infection was also <35 age 55.78% (P<0.005). The peak age of high-risk HVP l6 type infection was 50 to 65 age 13.04%. The peak age of high-risk HVP 18 type infection was >65 age 40.29% (P<0.01). Low-risk HPV 6/ll type was often tested in young women, but high-risk HPV 16/18 type was often tested in middle and old women. In CIN I patients, the portion of low-risk HPV 6/11 type infection was the highest 82.63%. In CIN Ⅱ~Ⅲ and cervical carcinoma patients, the portion of HPV 16 type infection was the highest 37.43% and 42%. Conclusion  The HPV infection rate rises with the malignance of cervical lesions degree and different HPV type exists in different cervical lesions.

    【Key words】  cervix neoplasm; cervical intraepithelial neoplasia; human papilloma virus; screening

    宫颈癌是一种可预防、可治愈的疾病,关键是进行宫颈病变的诊断或宫颈癌的筛查,及早发现宫颈上皮内瘤变(CIN),使CIN于早期得到正确处理[1,2] 。HPV持续感染可引起子宫颈癌前期病变-宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)与宫颈癌。本文对我院2800例妇科门诊患者进行回顾性分析总结,应用聚合酶链反应(PCR)技术对不同宫颈病变组织进行HPV DNA分型检测,以探讨不同类型人乳头瘤病毒的感染状况;同时应用目前世界上最先进的第2代杂变捕获试验(hybrid capture Ⅱ,HCⅡ)技术,旨在探讨高危型HPV感染状况。

    1  资料与方法

    1.1  一般资料  标本为2003年1月—2007年10月我院门诊患者,以细胞学和组织病理结果为标准。年龄18~78岁,平均36.7岁。其中CINⅠ患者1119例占39.96%,CIN Ⅱ~Ⅲ患者981例占35.04%,宫颈癌患者700例占25%。

    1.2  检查方法  目前临床用于检测HPV的主要有华美生物的HPV DNA检测(PCR)和美国Digone的杂交捕获第二代(HCⅡ),两种方法都有信号放大作用。

    1.2.1  标本采集与保存  2800例患者均采用无菌棉拭子取女性宫颈上皮细胞,置cppcndoff离心管,加无菌生理盐水1.5ml,放置10~15min后弃棉拭子,14000rpm离心5min,弃上清液-70℃保存。

    1.2.2  聚合酶链反应(PCR)技术进行HPV分型检测  PCR检测HPV亚型很多,本文主要检测4种亚型,即低危型HPV 6、11,高危型HPV 16、18。试剂由华美生物工程公司提供。标本-70℃取出解冻,加入50μl裂解液,充分振荡混匀,100℃煮沸1min,14000rpm离心5min,取上清液2μl作为反应模板加入反应管中。扩增参数设定为:94℃ 5min变性进行35个循环,最后1次循环后72℃延伸5min。每次扩增均设阳性和阴性对照。PCR产物于2%琼脂糖凝胶电泳,8~100V电泳20~30min,电泳的凝胶置凝胶成像仪中,302nm紫外线观察结果。在紫外灯下被溴化乙锭染色的DNA呈现明亮的红橙色荧光。样品出现和阳性对照在同一水平位置上的红橙色荧光带即为阳性,否则为阴性。

    1.3  第二代杂交捕获试验(hybrid capture Ⅱ,HCⅡ)检测HPV DNA  检测高危型HPV采用HCⅡ检测技术,术前按照操作说明将Digene宫颈刷伸入宫颈管1~1.5 cm,直到最大刷缘接触宫颈外口,顺时针旋转3周,取出保存在Digene管中;CIN术后患者操作同前,宫颈癌术后患者用Digene宫颈刷在阴道残端顺时针旋转3周;所有HPV检测的标本均由医生按操作说明采取。HC Ⅱ采用96平板法,可一次检测13种高危型(HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、56、58、59和68),诊断阳性指标定为标本中检出的HPV DNA≥1.0pg/ml。

    1.4  统计学处理  应用SPSS 10.0统计软件进行χ2检验

    2  结果

    2.1  宫颈病变程度、不同类型HPV感染与年龄的关系  见表1、表2。表1  不同宫颈病变的年龄分布  由表1可以看出,在CINⅠ患者的所有年龄组中,20~35岁所占比例最大66.49%;在CINⅡ~Ⅲ患者中,>65岁所占比例最大32.82%;在宫颈癌患者中,35~50岁所占比例最大38.29%。证实了确实随着年龄的增长,宫颈病变程度越严重。

    应用PCR技术对CIN Ⅰ~Ⅲ和宫颈癌的患者进行HPV DNA分型检测发现,在2800例宫颈病变中,HPV总感染为1985例70.89%;并随着年龄的增长,HPV的阳性率逐渐降低,详情及HPV分型结果见表2。表2  不同年龄中PCR检测HPV DNA结果由表2可以看出,HPV感染的高峰年龄为<35岁,HPV阳性率达87.63%,明显高于其他年龄组(P<0.005);低危型HPV 6/11感染的高峰年龄亦<35岁,占阳性例数的55.78%,明显高于其他年龄组(P<0.005);高危型HPV 16感染的高峰年龄为50~65岁,占阳性例数的13.04%;高危型HPV 18感染的高峰年龄为>65岁,占阳性例数的40.29%,明显高于其他年龄组(P<0.01);不同类型HPV混合感染的高峰年龄为>65岁、20~35岁,分别占阳性例数的22.06%、21.25%,明显高于其他年龄组(P<0.01)。实验结果显示低危型HPV 6/11多见于年轻妇女,而高危型HPV 16、18则多见于中老年妇女。

    2.2  宫颈病变程度与不同类型HPV感染的关系  见表3、表4。 表3  不同宫颈病变中PCR检测HPV DNA结果由表3可以看出,在不同宫颈病变组织中 HPV的类型分布不同。在CIN Ⅰ组,低危型HPV  6/11所占比例最高,占阳性例数的82.63%,而在CIN Ⅱ~Ⅲ及宫颈癌组仅分别占35.08%、11.8%,差别是明显的。在CIN Ⅱ~Ⅲ及宫颈癌组中,均以高危型HPV 16所占比例最高,分别占阳性例数的37.43%、42%;其次是高危型HPV 18,在CIN Ⅱ~Ⅲ及宫颈癌中分别占21.39%、34%。显示了高危型HPV 16、18与CINⅡ~Ⅲ和宫颈癌的密切关系。表4  不同宫颈病变中HCⅡ检测高危型HPV DNA结果由表4可以看出,HCⅡ仅检测高危型HPV DNA,高危型HPV感染1240例占44.29%,明显低于PCR检测的多种类型HPV感染阳性率。在不同宫颈癌病变中,高危型HPV阳性率以宫颈癌最高,占阳性例数的64.29%(P<0.005);其余依次是CIN Ⅱ~Ⅲ 56.79%,CIN Ⅰ 45.13%。呈现CIN级别越高、宫颈病变越重,其高危型HPV阳性率也越高。

    3  讨论  

    3.1  CIN的隐匿性和重要性  目前认为宫颈癌的发生、发展是量变到质变、渐变到突变,即由CIN-原位癌-早期浸润癌-浸润癌的连续发展过程。CIN具有两种不同结局,一种是病变自然消退,很少发展为浸润癌;另一种是病变具有癌变潜能,可能发展为浸润癌。由于宫颈癌存在着一个较长的可逆转的癌前病变期,早期宫颈癌患者5年治愈率高达90%,因此对宫颈癌的筛查研究一直受到人们的关注。

    3.2  CIN、宫颈癌与HPV感染的关系  HPV泛存在于自然界,只能以人类为宿主,是一种与皮肤/黏膜增生性病变有关的小型DNA病毒,属乳头多瘤空泡病毒科。目前发现HPV有85余型,其中HPV 6、Ⅱ、42、43、44属低危型,一般不诱发癌变,多见于生殖道良性病变;HPVⅠ、6、18、31、33、35、39、45、54、52、56或58属高危型。高危型HPV亚型产生两种癌蛋白,E6和E7蛋白,癌蛋白可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白(抑癌蛋白如P53、RB等)相结合(E6蛋白与P53结合,E7蛋白RB,P107和cyclin A结合),导致细胞周期控制失常发生癌变[3]。

    宫颈癌发病的首要因素为高危型HPV感染,HPV阴性者患病的风险几乎为零[4,5]。高危型HPV 16、18型的感染以隐性感染长期存在,先引起不典型增生,当有其他协同因子参与时即导致癌变,这提示对隐性感染不容忽视。临床上易见的是显性感染,而要提高防癌效果不能遗漏对隐性感染者的追踪,因此对高危人群进行宫颈HPV感染的筛查对防癌意义重大。

    本研究发现,在CIN和宫颈癌的患者中,HPV的总感染率达70.89%,低危型HPV6/11的感染率达55.78%,高危型HPV的感染率达55.71%。结果表明:(1)女性生殖道HPV感染率随宫颈病变的加重呈现升高趋势。在不同宫颈病变中,高危型HPV 16、18阳性率以宫颈癌最高,占阳性例数的64.29%:其余依次是CIN Ⅱ~Ⅲ56.79%,CIN Ⅰ 45.13%。呈现CIN级别越高、宫颈病变越重,其高危型HPV阳性率也越高。有学者提出,宫颈的轻度非典型增生CIN Ⅰ主要是由HPV感染造成细胞形态和结构异常,随着机体抵抗力的增强,HPV感染渐消退,形态结构也恢复正常,反之,则病变进展。多数HPV感染是一过性的,只有持续的HPV感染才会导致宫颈癌的发生[6]。(2)不同宫颈病变中HPV型别分布不同,CIN Ⅰ常与低危型HPV 6/11感染有关,HPV 6/11在CIN Ⅰ组占阳性例数的82.63%;CIN Ⅱ~Ⅲ和宫颈癌的发生则与高危型HPV 16、18,尤其是HPV 16感染关系密切,HPV 16在CIN Ⅱ~Ⅲ和宫颈癌组占阳性例数的37.43%、42%。因此,不同类型的HPV感染生殖道,其危险性也就不同。本研究结果与文献报道一致,而且发现在本地区人群中,高危型HPV 16的感染与宫颈病变的进展紧密相关,提示我们在以后的临床工作中尤其要注意HPV 16的感染情况。

    3.3  HPV感染与年龄的关系  本研究发现,CIN Ⅰ患者中,20~35岁所占比例最高66.49%;CIN Ⅱ~Ⅲ患者中,>65岁所占比例最高32.82%:宫颈癌患者中,35~50岁所占比例最高38.29%。宫颈癌的发生是一个连续的过程,即由细胞分化失调到不典型增生,到原位癌,最后发展成宫颈癌,这个过程约需10年。本组资料显示HPV感染的高峰年龄为20~35岁,与宫颈癌发病的高发年龄35~50岁相差10~15岁,与宫颈癌的自然发展时间一致。因此,笔者认为35~50岁应是本地区宫颈癌防治的重点人群。研究还发现随着年龄的增长,宫颈HPV的感染率明显下降,而宫颈癌的发病率随着年龄的增长而增高。

    近年来宫颈癌的发病有明显年轻化趋势。本研究中,CIN Ⅰ患者中最小年龄18岁,宫颈癌患者中最小年龄19.5岁;而且HPV感染的高峰年龄为<35岁,HPV阳性率达87.63%;低危型HPV 6/11感染的高峰年龄亦<35岁,占阳性例数的48.88%。因此,对年轻妇女,尤其是对性生活出现早、性伴侣多、性生活比较活跃的妇女要定期进行宫颈细胞学检查及人乳头瘤病毒的检测。

    3.4  联合PCR和HC Ⅱ进行HPV检测  有研究结果表明高危型HPV 16/18感染在年轻女性(<30岁)更易引起宫颈癌,HPV病毒感染在年轻女性宫颈癌的发病学方面较其他病因可能起更重要的作用;而年龄较大的女性(>41岁)宫颈癌的发生可能与其他病因如早婚、多产、宫颈裂伤等关系密切。因此,对年轻女性宫颈癌的预防应着重放在预防和及时治疗HPV感染方面(尤其是高危型HPV 16/18)[7]。

    HR-HPV存在不同类型,在不同人群中产生不同的致病机制和病变。我院采用HCⅡ检测高危型HPV,结果证实高危型HPV感染与宫颈癌前病变和宫颈癌的发生密切相关。低危型HPV感染的患者亦不能掉以轻心,而PCR技术则是一种很好的检测方法。

    由于HPV检测有较好的阴性预计值,应重视HPV在随访中的作用。目前HPV的检测成本较高,尤其在经济欠发达地区,还不能完全用于大面积的宫颈癌集中筛查时,我们可选择性地在重点人群中联合PCR和HCⅡ检测人群中低危型和高危型HPV的感染状况。根据筛查结果建立宫颈癌的防治队列,对其中HPV阳性特别是高危型HPV 16/18的人群进行长期的跟踪监测,有利于预防宫颈癌的发生并了解HPV感染的转归。

【参考文献】
  1 Parkin DM,Pisani P,Ferlay J,et al. Global cancer statistics.CA Cancer J Clin,1999,49(1):31-44.

2 王启俊,祝伟星,邢秀梅,等.北京城区居民1982年—1997年癌症发病趋势.中国肿瘤,2001,31(10):547-549.

3 乐杰.妇产科学.北京:人民卫生出版社,2004,285-294.

4 Bosch FX, Munoz N,Chichareon S,et al.The causal relation between human papilloma virus and cervical cancer. J Clin Pathol,2002,55(4):244.

5 Clavel C,Masure M,Bory JP, et al.Human papilloma virus in primary screening for the detection of high-grade cervical lesions:a study of 7932 women. Br J Cancer,2001,84(12):1616.

6 Dalstein V, Riethmullet D,Pretet JL,et al. Persistence and load of high-risk HPV are predictors for development of high-grade cervical lesions:a longitudinal French cohort study. Iant J Cancer, 2003, 106(3):396-403.

7 何劲薇,李丽娟.宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中HPV16、18 的关系.广东医学,2006,27(4):557-558.

(编辑:余 强)


作者单位:423000 湖南郴州,郴州市妇幼保健院


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