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ELISA检测抗HCV影响因素分析

来源:中华医学实践杂志 作者:陈景芬,张员梅,刘殿香 2007-4-26

摘要: ELISA检测抗HCV目前已是血站、医院的常规检测项目,虽然该方法操作简单,灵敏度高,但在实际操作中,ELISA检测抗HCV结果假阴性、假阳性问题还是比较常见,该临床诊断给治疗带来很大困难。影响ELISA检测抗HCV因素众多[1]。现就比较常见的影响因素加以分析总结。 1 试剂影响因素 目前ELISA检测抗HCV试剂盒均采用HCV基因......


     ELISA检测抗HCV目前已是血站、医院的常规检测项目,虽然该方法操作简单,灵敏度高,但在实际操作中,ELISA检测抗HCV结果假阴性、假阳性问题还是比较常见,该临床诊断给治疗带来很大困难。影响ELISA检测抗HCV因素众多[1]。现就比较常见的影响因素加以分析总结。

    1 试剂影响因素

    目前ELISA检测抗HCV试剂盒均采用HCV基因工程或合成多肽抗原核心区,NS3,NS4,NS5等包被固相,由于不同厂家HCV抗原组合不同,来源和用量方面也有差异,就造成临床上使用不同厂家的ELISA检测抗HCV试剂盒检测结果有很大差异,经常是这家试剂检测阳性,另一家试剂检测阴性,尤其是较弱阳性标本,这不但是这部分患者HCV感染的临床诊断不明确,而且在筛检献血员时,极易发生漏检,造成输血后HCV感染。

    2 内源性物质的影响

    由于患者体内特有内源性物质的存在,与固相HCV抗原非特异性结合而造成假阳性结果。

    2.1 类风湿因子(RF)的干扰 类风湿因子可大量存在于类风湿性关节炎及某些自身免疫性疾病患者血液中,RF有与变性的IgG非特异性结合的性质,在ELISA检测抗HCV过程中,标本中的RF就与固相上的IgG及酶标记IgG结合,出现假阳性反应。

    2.2 高免疫球蛋白血干扰 血清中高浓度的非特异性免疫球蛋白可与酶标记IgG结合,非特异性的吸附在固相表面,造成假阳性。

    2.3 超氧化物歧化酶(SOD)的干扰 用于包被固相的重组HCV抗原片段C-100如为酵母菌产生的SOD融合蛋白,那么标本中SOD会造成HCV片段的假阳性。

    3 试验过程中影响因素分析

    3.1 温育的影响 温育是ELISA测定抗HCV影响结果的关键因素,温育时间不够,弱阳性标本检测不出,温育温度不够,弱阳性标本也难以检出。

    3.2 洗板的影响 洗板对ELISA测定HCV来说也是关键步骤,洗板分手工洗板和机器洗板,一般认为机器洗板较手工洗板效果要好,关键是洗板次数的选择。洗板次数较少,造成残留,可引起假阳性结果。洗板次数过多,可造成抗原抗体结合物洗脱,造成假阴性结果[3]。

    3.3 显色的影响 显色影响的关键是显色温度和显色时间,有些实验室操作人员不严格按说明书操作,因为担心“花板”,往往是显色时间不到就匆忙终止显色,结果造成弱阳性标本不能显色而导致假阴性发生。

    4 讨论

    ELISA检测抗HCV影响因素众多,上述只是一些常见因素分析,要想提高ELISA检测抗HCV的检测质量,关键还要加强实验室科学管理,强化标准化流程操作,加强质量控制,提高人员素质,以减少抗HCV检测假阳性、假阴性结果的发生。

    【参考文献】

    1 李金明.临床酶免疫测定技术.北京:人民军医出版社,2005,202-208.

    2 陈鹄,刘庆菊.温育温度及时间对ELISA快速分析法检测乙型肝炎标志物的影响.南华大学学报,2006,34(1):138-139.

    3 刘祖勇.增加洗板次数对HBsAg ELISA检测结果的影响.中国输血杂志,2006,19(2):135-136.

    作者单位:164361 黑龙江大庆,大庆市第二医院检验

   (编辑:邓 锋)


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