慢性胃炎、消化性溃疡患者幽门螺旋杆菌的分离鉴定和耐药性分析

　　【摘要】  目的  通过对慢性胃炎和消化性溃疡幽门螺旋杆菌的分离培养和耐药性分析，为幽门螺杆菌感染的根除性治疗提供依据。方法  经胃镜活检快速尿素酶阳性的195例慢性胃病患者，取病变黏膜组织，常规方法培养鉴定幽门螺杆菌，采用平皿稀释法对分离菌株进行药物敏感试验。结果  195例慢性胃炎及消化性溃疡患者中，幽门螺杆菌的分离率高达79.5%。药敏显示，此次分离的幽门螺杆菌对甲硝唑和替硝唑呈现不同程度的耐药，对阿莫西林、克拉霉素敏感。结论  幽门螺杆菌是慢性胃炎和消化性溃疡发病的首要因素，阿莫西林、克拉霉素仍然是根除治疗首选药物。

    【关键词】  消化性溃疡；胃炎；幽门螺杆菌
 
    Isolation of Helicobacter pylori in patients with chronic gastritis and peptic ulcer and resistant analysis of Helicobacter pylori to antibiotics

    ZHANG Xue-ying，SUN Yan-bo，SHI Hong-yan.Department of Clinical Liboratory，Sino-Japan Unit Hospital，Jilin University，Changchun，130021，China

    【Abstract】  Objective  In order to supply the basis of eradicative therapy for Helicobacter pylori infection，isolation of Helicobacter pylori and resistance to antibiotics were carried out. Methods  195 cases of patients with chronic gastritc disease were selected for cultivation of Helicobacter pylori from biopsy，isolated strains were tested to antibiotics using series dilution.Results  Infection rate of Helicobacter pylori was 79.5% among these patients and the isolated strains of Helicobacter pylori exhibit resistance to methonidazole and tinidazole. Conclusion  Helicobacter pylori is an important pathogen causing chronic gastritis，peptic ulcer，antimicrobial susceptibility of Helicobacter pylori demonstrated that clarithromycin and amoxycilline should be preferentially used to protect patients against Helicobacter pylori infection.

    【Key words】  peptic ulcer;gastritis;Helicobacter pylori

    幽门螺杆菌（helicobacter pylori，Hp）感染是人类最常见的慢性感染之一，估计全球Hp感染人数超过50%［1］。Hp是定植于人胃黏膜并引起多种胃、十二指肠疾病的革兰阴性细菌。Hp的致病因素包括内毒素、空泡毒素、粘附素和Cag毒力岛编码的一些基因产物［2，3］。Hp感染是慢性胃炎及消化性溃疡的主要原因，在慢性活动性胃炎患者活检标本中Hp检出率达90%［4］，在消化性溃疡患者活检标本中Hp检出率可达100%［5］。因此，慢性胃炎患者胃黏膜标本中Hp的检查，对Hp感染进行根治性治疗、彻底治愈胃炎和消化性溃疡有着重要的临床意义。

    1  资料与方法

    1.1  病例的选择  胃组织标本来自2003年2月～2004年8月在吉林大学中日联谊医院消化内科就诊，经胃镜活检快速尿素酶试验阳性的195例慢性胃病患者。在留取标本的当天采取外周血分别检测Hp-IgG抗体和Hp-CagA抗体。所有患者在胃镜检查前30天内未服用铋制剂、质子泵制剂、抗菌药及甾体类抗炎药物，亦无心、肝、肺、肾等重要脏器疾患。

    1.2  血清Hp-IgG抗体及Hp-CagA抗体的检测  空腹静脉血3ml，常温下分离血清-20℃保存。采用ELISA法检测Hp-IgG抗体及Hp-CagA抗体。试剂盒由上海生物工程公司提供。

    1.3  Hp的分离培养鉴定  胃窦部及胃体部组织标本证实尿素酶阳性的前提下，胃窦部距幽门2～3cm处胃体小弯处分别钳取黏膜组织，置无菌生理盐水中4℃保存，在4h内接种SKirrow S选择性培养基中，置厌氧罐内，缓慢注入混合气体（5%O2、10%CO2、85%N2），37℃培养连续5天观察结果。Hp的鉴定依据主要包括：革兰染色阴性，外观呈S或弧形，生化反应结果为尿素酶试验阳性、触酶试验阳性和氧化酶试验阳性。

    1.4  最低抑菌浓度的测定  采用平皿二倍稀释法检测接种细菌对抗生素的最低抑菌浓度。具体方法和药敏判断按NCCLS2000年的规定。标准菌株：幽门螺杆菌NCTC11637（CagA阳性）作为质控菌株。抗生素：甲硝唑、替硝唑、克拉霉素、阿莫西林、红霉素、呋喃唑酮、四环素。

    2  结果

    2.1  不同慢性胃病患者幽门螺杆菌分离鉴定结果  在不同类型的慢性胃病患者的胃黏膜标本中Hp的分离培养呈现较高的阳性率，且不同慢性胃病患者Hp的阳性率差异无显著性（P＞0.05），见表1。表1  不同慢性胃病患者Hp分离培养结果

    2.2  不同慢性胃病患者血清Hp-IgG抗体与Hp培养阳性率的关系  在195例慢性胃病患者中，165例呈现Hp-IgG抗体阳性。其Hp的阳性率达88.0%。而Hp-IgG抗体阴性患者，其Hp的阳性率仅为33.3%，两者差异有显著性（P＜0.01），见表2。表2  血清Hp-IgG抗体与Hp培养阳性率的关系

    2.3  不同慢性胃病患者血清Hp-CagA抗体与Hp培养阳性率的关系  在195例慢性胃病患者中，血清Hp-CagA抗体阳性为125例，其Hp的阳性率为84.4%。而Hp-CagA抗体阴性患者，其Hp的阳性率为62.5%。见表3。 表3  血清Hp-CagA抗体与Hp培养阳性率的关系

    2.4  195株Hp分离株药敏试验结果  阿莫西林、克拉霉素、四环素及呋喃唑酮对Hp显示了较强的抗菌活性，红霉素较次之，甲硝唑及替硝唑对Hp的敏感性较低。见表4。表4  7种抗生素对195株Hp的药敏结果

    3  讨论

    Hp是革兰染色阴性的微需氧细菌，是慢性胃炎及消化性溃疡的主要病因。该项研究对195例快速尿素酶试验阳性的慢性胃病患者进行了分离培养，结果符合Hp判定标准的菌株共155株，阳性率达到79.5%。与欧美等发达国家在90%以上的培养阳性率相比还有一定的差距，分析原因可能是在技术及方法的成熟方面相对比较落后。在比较不同胃病Hp培养阳性率发现，各种类型的慢性胃病之间无明显差异。说明Hp是引起慢性胃病不可忽视的重要因素。

    应用于Hp诊断方法有很多种。我国1999年制定的诊断标准科研诊断标准及临床诊断标准。科研诊断标准要求形态学、尿素酶依赖性试验、血清学试验及特异性PCR四项中的任意两项或Hp培养阳性即可确诊。该项工作采用了Hp分离培养和血清学检测。结果表明，在Hp培养阳性的基础上，Hp-IgG抗体和Hp-CagA抗体都呈现了较高的阳性率，但单纯的血清学检测结果仍有阴性结果。分析原因一方面不能排除患者由于免疫力较低的因素，不能有效地产生抗体，另一方面也不能排除技术操作方面的偏差。因此，笔者认为在分离培养Hp的基础上，结合这两种血清学检测指标，以提高诊断的正确性。

    随着抗生素在Hp根除治疗中的应用，Hp的耐药株也有陆续的报道，直接影响了Hp的根除效果，也是导致抗感染失败的重要原因。由于抗生素在体内易受胃内pH影响而失去活性，硝基咪唑类药物在胃内不受pH影响，已经成为治疗Hp感染的重要药物。阿莫西林及克拉霉素在胃内受pH影响较少，是根除Hp感染的重要药物，对195株Hp进行药敏分析发现，甲硝唑的MIC50已超过125μg/ml，说明敏感性很差，替硝唑的MIC50也已达到64μg/ml，敏感性亦不理想。这与国内的相关报道一致。克拉霉素是目前抗生素中对幽门螺杆菌作用最强的药物之一，该药敏试验也说明在分离的95株Hp中，克拉霉素是Hp感染根除治疗的首选药物。尽管四环素和呋喃唑酮目前在临床已经很少应用，但药敏结果提示可以作为根除Hp感染的辅助疗法。

    【参考文献】

    1  Vakil N. Helicobacter pylori treatment： a practical approach. Am Gastroenterol，2006，101 (3)： 497-499.

    2  Salomma-Rasanen A，Kosunen TU，Karjalainen J，et al. IgA antibodies in persisting Helicobacter pylori infection in finnish adults. Clin Microbio Infect，2006，12 (3)： 236-240.

    3  Tovey FI，Hobsley M，Holton J.  Helicobacter pylori virulence factors in duodenal ulceration： a primary cause or secondary infection causing chronicity. World J Gastroenterol，2006，12(1)： 6-9.

    4  Aydemir S，Ozdemir BH，Gur G，et al. Effect of Helicobacter pylori infection on gastric epithelial cell kinetics in patients with chronic renal failure. World J Gastroenterol，2005，11(45)：7183-7187.

    5  Ali M，Khan AA，Tiwari SK，et al. Association between cag-pathogenicity island in Helicobacter pylori isolates from peptic ulcer，gastric carcinoma，and non-ulcer dyspepsia subjects with histological changes.  World J Gastroenterol，2005，11(43)： 6815-6822.

  
    作者单位： 1 130031 吉林长春，吉林大学中日联谊医院检验科

    2 130021 吉林长春，吉林大学基础医学院病原生物学教研室(Δ通讯作者)

　  (编辑：余  强)