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三糖铁尿素靛基质培养基的配制及与三糖铁琼脂对比试验

来源:中华医学实践杂志 作者:林吉年 2006-8-20
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摘要: 方法 自行配制了一种三糖铁尿素靛基质培养基,并与国家标准方法中三糖铁琼脂进行了对比试验。结果 两培养基的培养结果差异有显著性。经三糖铁尿素靛基质培养基筛检出的菌落阳性率为28。91%,比三糖铁培养基筛检出的菌落阳性率(7。...


  【摘要】  目的  为了简便快速地筛检出肠道致病菌。方法  自行配制了一种三糖铁尿素靛基质培养基,并与国家标准方法中三糖铁琼脂进行了对比试验。结果  两培养基的培养结果差异有显著性。经三糖铁尿素靛基质培养基筛检出的菌落阳性率为28.91%,比三糖铁培养基筛检出的菌落阳性率(7.67%)高。结论  应用三糖铁尿素靛基质培养基再结合血清凝集可简便快速地鉴定出肠道致病菌。

  【关键词】  三糖铁;尿素;靛基质;肠道致病菌
   
  【Abstract】  Objective   In order to easily fast exam the intestinal tract pathogenic bacteria. Methods   Compounded one kind of trisaccharide iron urea indol culture medium and the trisaccharide iron agar has carried on the contrast experiment with the national standard method in voluntarily.  Results   Two culture medium raise results have the remarkable difference. The colony positive rate exam which after the trisaccharide iron urea indol culture medium is 28.91%,higher than the exam the colony positive rate using the trisaccharide iron culture medium (7.67%). Conclusion  It may easily fast appraise the intestinal tract pathogenic bacteria using the trisaccharide iron urea indol culture medium recombination

  【Key words】  trisaccharide iron; urea; indol; intestinal tract pathogenic bacteria

  目前分离肠道致病菌所用的鉴别培养基多数实验室采用双糖铁琼脂或三糖铁琼脂培养基,同时接种蛋白胨水、尿素、氰化钾、赖氨酸等培养基。一般挑取几个菌落进行接种筛选,但是工作量大,实际工作难以同步进行。本实验室根据肠杆菌科各属生化反应特点,在三糖铁培养基基础上,配制出一种三糖铁尿素靛基质培养基。在24h内可同时观察7种生化反应结果,更快地排除大量非致病菌。此方法省时省力,如三糖铁琼脂培养基培养后直接做血清凝集,用此方法提高了血清凝集阳性率。现将结果报告如下。

  1  材料与方法

  1.1  材料

  1.1.1  菌株  标准菌株:伤寒沙门氏菌、鸭沙门氏菌、福氏志贺氏菌、大肠杆菌、枸橼酸杆菌、普通变形杆菌 ;可疑菌株:工作中从业人员体检中的大便经SS琼脂平板培养后的可疑菌株。

  1.1.2  三糖铁尿素培养基  胰蛋白胨5g、蛋白胨(日产)15g、牛肉膏3g、酵母浸膏3g、葡萄糖1g、乳糖10g、蔗糖10g、氯化钠5g、硫酸亚铁0.2g、硫代硫酸钠0.3g、尿素10g、琼脂12g、0.2%麝香草酚蓝10ml;0.2%溴麝香草酚蓝12.5ml、0.2%甲酚红4ml、H2O 1000ml。将除指示剂和琼脂以外的各成分加热溶解于水、校正pH 7.1~7.2,加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂,然后加入以上三种指示剂摇匀。分装于100×12mm试管中,每管约3ml,115℃高压灭菌10min。制成高层斜面备用。

  1.1.3  靛基质滤纸条  对二甲氨基苯甲醛5g、甲醇50ml、磷酸10ml,按顺序加入后混匀溶解即成靛基质试剂。将定性滤纸剪成3mm×40mm的长条,放入直径9cm的平皿内高压灭菌后,倒入靛基质试剂使其吸收,置50℃左右烘干,置干燥暗处保存备用。

  1.1.4  三糖铁琼脂培养基  购于江苏省疾病预防控制中心微生物试剂厂,按说明书配制备用。

  1.1.5  血清凝集用血清  购于卫生部成都生物制品研究所,均在有效期内使用。

  1.2  方法

  1.2.1  样品接种  挑取SS琼脂平板上的可疑菌落1327个,分别接种于三糖铁琼脂培养基和三糖铁尿素琼脂培养基,然后用眼科镊子将靛基质滤纸条的一端弯曲成90°角,放入接种好的三糖铁尿素培养基内,使弯曲的一端与斜面上端接触。两种培养基直立放置37℃ 18~24h后观察结果。以两种培养基中的生化反应为依据,初步判断所属的属或种,然后再以血清学试验证实。

  1.2.2  结果观察  斜面阴性、底层产酸产气、硫化氢阳性,尿素阴性,靛基质阴性的疑沙门氏菌;斜面阴性,底层产酸不产气,尿素阴性、靛基质阴性、硫化氢少量的疑伤寒杆菌;斜面阴性、底层产酸不产气、无动力,硫化氢阴性的疑志贺氏菌。

  2  结果

  2.1  两法可疑的菌落数及经血清凝集试验确诊的阳性数及阳性率  见表1。两种培养基筛检出的菌落阳性率分别为7.67%和28.91%,经两阳性率的u检验,u=6.54>5.28,P<0.01,两种结果差异有显著性。

  表1   两法的可凝菌数和确诊的阳性数(略)

  2.2  已知6种肠道细菌接种于三糖铁尿素靛基质培养中37℃ 18~24h观察结果  见表2。

  表2  已知6种肠道细菌在三糖铁尿素靛基质培养基上的实验结果(略)

  3  讨论
  
  三糖铁尿素靛基质培养基经沙门氏菌及有关细菌6个属(种)的实验,结合血清学试验2h内可对沙门氏菌、志贺氏菌等做出鉴定。在食品从业人员体检中是一种较理想的肠道致病菌筛选培养基[1]。三糖铁尿素靛基质培养基能观察7种生化反应。能对受试菌株的属或种做出较明确分辨。
  
  此培养基中尿素经高压灭菌后,变形杆菌的尿素酶反应呈阳性,说明在培养中尿素可与其他成分一起高压灭菌。靛基质试验反应结果:变形杆菌、志贺氏杆菌、大肠杆菌对培养基中蛋白胨的靛基质反应结果均呈阳性,证明该靛基质滤纸条试验是可行的[2]。
  
  实验中培养基分别用Na2HPO4和NaOH溶液进行校正pH,经高压灭菌后,用NaOH校正的培养基,可出现偏碱的倾向。而用Na2HPO4校正的培养基pH较为稳定,因此,笔者认为用Na2HPO4校正培养基pH较好。

  【参考文献】

  1  GB/T4789.4-GB/T4789.6-2003.食品卫生微生物学检验[S].

  2  P.R. 爱德华,W.H. 爱文. 肠杆菌科的鉴定. 卫生部药品生物制品检定所,1978.

  (编辑:石  岚)

  作者单位:212300 江苏丹阳,丹阳市疾病预防控制中心

 


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