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丹参葡萄糖注射液细菌内毒素检查

来源:INTERNET 作者:王 雪 王先坤 2005-8-5
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摘要: 【摘要】 目的 建立丹参葡萄糖注射液细菌内毒素检查法(BET法)。方法 按《中国药典》2000年版(二部)附录收载的细菌内毒素检查法。结果 丹参葡萄糖注射液经1→8倍稀释后可排除干扰。结论 细菌内毒素检测法可用于丹参葡萄糖注射液的热原检查。...


    【摘要】 目的 建立丹参葡萄糖注射液细菌内毒素检查法(BET法)。方法 按《中国药典》2000年版(二部)附录收载的细菌内毒素检查法。结果 丹参葡萄糖注射液经1→8倍稀释后可排除干扰。结论 细菌内毒素检测法可用于丹参葡萄糖注射液的热原检查。

关键词 细菌内毒素 鲎试剂 丹参葡萄糖注射液

Testing the bacterial endotoxin in salvia miltiorrhizae glucose injection

Wang Xue,Wang Xiankun

The People’s Hospital of Qiannan Autonomous Prefecture for Buyi and Miao Nationalties,Guizhou558000.

【Abstract】 Objective To test the bacterial endotoxin in Salvia Miltiorhizae Glucose injection.Methods Detection was carried out according to the bacterialendotoxin test procedure in Chinese Pharmacopeia.2000ediction.Results Salvia Miltiorrhizae Glucose injection did not interfere with limulus agent in8diluted concentrations.Conˉclusion Bacteria endotoxin test could be used in Salvia Miltiorrhizae Glucose Injection.

Key words bacterial endotoxin test limulus agent salvia miltiorrhiza glucoseinjection

丹参主要成分为丹参酮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和丹参素,经实验和临床研究证明有扩张血管、增加血流量、改善微循环等作用,我院制剂室曾于1997~1998年配制250ml5%丹参葡萄糖注射液供心内科使用,在其热原检查上,用家兔法较为繁琐,成本过高,且由于用药剂量往往高于人最大剂量几倍甚至10倍,影响检验结果准确性,而细菌内毒素法近年用于注射剂检测的实验研究不少,《美国药典》(USPXXⅢ)收录的650多种药品注射剂,其中620多种要求做细菌内毒素检查项 [1] ;《中国药典》(2000年版)也新增43种注射剂采用BET法,但所有BET法的药品均为西药,没有中草药注射剂。因此,在我院生产5%丹参葡萄糖注射液过程中,笔者经过反复实验,认为:本品经1→8倍稀释后,使用灵敏度为0.5EU/ml TAL的检测其热原的方法是可行的。

1 材料与试剂

鲎试剂(灵敏度0.5EU/ml,厦门鲎试剂厂,批号970506),细菌内毒素工作标准品(10EU/支,中国药品生物制品检定所,批号970303,细菌内毒素检查用(2ml/支,厦门鲎试剂厂,内毒素含量<0.03EU/ml,批号970508),5%丹参葡萄糖注射液(供试品、规格250ml/瓶,批号:970718971204980407980604980918)试管,吸管等玻璃器皿均按《中国药典》2000年版除细菌内毒素处理。

2 方法与结果

2.1 细菌内毒素理论限值的确定 根据L=K/M,其中K为按规定的给药途径,人用每kg体重每h可接受的内毒素最大剂量,M值是以成人每kg体重每h给药的最大剂量来计算,按平均体重60kg计算,静脉滴注250ml按1.5h计算,经计算M=1.0ml/(kg·h),因此细菌内毒素理论限值为L=K/M=5/1.0=5EU/ml。

2.2 供试品的最大有效稀释(MVD)倍数 目前在中草药细菌内毒素检查中排除干扰因素多用最大有效释释法,其计算公式为:MVD=样品内毒素限量/TAL灵敏度,按TAL灵敏度为0.5EU/ml计算,本品最大有效释稀倍数为MVD=L/λ=(5EU/ml)/(0.5EU/ml)=10倍。因此,对本品的干扰实验从最大有效浓度10倍稀释后开始。

2.3 鲎试剂灵敏度复核 按《中国药典》(2000年版二部附录XIE)细菌内毒素检查法进行灵敏度复核 [2] ,结果如表1示:λ=0.5EU/ml,在0.5~2.0λ范围内,符合《药典》规定,可用于实验。

表1 鲎试剂灵敏度复核试验试管编号

2.4 干扰实验 选批号为971204供试品(家兔法合格)一批,用BET水将其分别稀释成:原液1→21→41→81→16共5种浓度供试品溶液,再以各稀释浓度供试品及BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成2.0、1.0、0.5、0.25、0.125共5个浓度的内毒素溶液,与鲎试剂0.5EU/ml混合进行干扰实验,如用细菌内毒素检查用水(BET)制成的内毒素标准溶液,反应终点浓度的几何平均值λ S ,与用样品某一稀释度制成的内毒素标准溶液反应点浓度的几何平均值(λt )均在0.5~2.0之间,则认为样品在该浓度下不干扰实验 [3] ,结果如表2。

表2 供试品干扰试验供试品稀释倍数

结果表明:样品经1→8倍稀释后可消除干扰,小于最大有效稀释倍数。

2.5 细菌内毒素检查 按细菌内毒素检查法,检查我院生产的5批丹参葡萄糖注射液,经1→8倍稀释后检验结果如表3示。

表3 供试品稀释溶液(1→8)的细菌内毒素检测结果样品批号

结果表明:5批5%丹参葡萄糖注射液经细菌内毒素检查均为合格品。

2.6 热原法检查结果 用热原法对该5批产品进行检查,结果热原法5批均为阴性,与细菌内毒素法检查结果相符,投入临床使用后,未出现热原反应。

3 讨论

中草药注射剂由于其提取,精制过程较复杂,流程较长,易引入热原。我国《药典》对该类制剂未规定热原检查项,即便有规定,也是使用家兔法检查热原,成本过高,费时而繁琐,因而我院配制的丹参葡萄糖注射液经反复实验证明其样品经稀释1→8倍后,可排除干扰,用0.5EU/ml的TAL检查其内毒素。从热原法平行实验检测结果来看,此法是可行的,且快捷、方便,可作为院内制剂控制质量的参考。

参考文献

1 Dabbah R.USP articles with bacteriale ndotoxin testing.USP23,Supˉplmet1to7,January12,1998.

2 中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典(二部),北京:化学工业出版社,2000,附录86,204.

3 黄清泉,夏振民.药品细菌内毒素检查的试验设计.中国药学杂志,1997,32(2):74.

作者单位:558000贵州省黔南州人民医院


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