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TR-FIA与EIA检测HBV标志物结果对比分析

来源:INTERNET 作者:吴淑梅 张乐之 王智华 雷长海 2005-6-15

摘要: 【摘要】 目的 探讨TR-FIA测定HBV标志物结果的可靠性。 方法 采用TR-FIA二步定量法与EIA一步定性同时检测HBV标志五项指标,对两种方法结果进行统计对比分析。 结果 TR-FIA法与EIA法测定HBV标志物结果基本一致,对比组之间差异不显著(P0。 结论 TR-FIA法定量测定HBV标志物,检测结果准确稳定,具有良好的应用前景。...


  【摘要】 目的  探讨TR-FIA测定HBV标志物结果的可靠性。 方法  采用TR-FIA二步定量法与EIA一步定性同时检测HBV标志五项指标,对两种方法结果进行统计对比分析。 结果  TR-FIA法与EIA法测定HBV标志物结果基本一致,对比组之间差异不显著(P>0.05)。 结论  TR-FIA法定量测定HBV标志物,检测结果准确稳定,具有良好的应用前景。

    Comparative analysis on HBV marker results from TR-FIA and EIA detection

    Wu Shumei,Zhang Lezhi,Wang Zhihua,et al.

    Department of Laboratory Diagnosis,Changhai Hospital,the Second Military Medical University,Shanghai200433.
   
    【Abstract】 Objective To investigate the reliability of TR-FIA in testing HBV marker.Methods By TR-FIA two-step quantitative analysis and EIA one-step qualitative analysis five HBV markers were detected.Con-trastively the results were analysed.Results Better uniformity between TR-FIA and EIA detection results was found,there is no significant difference between experiment and control group(P>0.05).Conclusion TR-FIA,applied in detecting HBV marker,can insure the accuracy and stability of the outcome,and has enormous potential in the application.

    【Key words】 HBV marker time-resolved fluoroimmunoassay enzyme-linked immunosorbent assay

    以往检测乙型肝炎病毒(HBV)标志物五项指标(简称“二对半”)的酶联免疫吸附试验(ELISA)定性一步法,简称酶免法(EIA),以免疫化学技术为主,存在方法稳定性欠佳、检测过程中干扰因素较多和环境污染等缺陷。近年发展的时间分辨荧光免疫(TR-FIA)定量二步法测定技术具有测量灵敏度高,操作简便,干扰因素少,示踪物稳定,定量分析量程宽,无放射性污染和价格低廉等优点 [1] 。我们对此与EIA定量法进行了结果对比统计分析,现报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源 450例标本,均来源于2004年8月。我院门诊和住院患者HBV标志物五项指标常规检测标本。

    1.2 试剂 TR-FIA由上海新波生物技术有限公司提供。EIA由上海科华生物技术有限公司提供。

    1.3 测定方法

    1.3.1 TR-FIA定量二步法 HBsAg和HBeAg测定采用双抗体夹心时间分辨荧光免疫分析法,HBsAg采用单克隆抗-HBs包被反应板(HBeAg采用多克隆抗-HBe抗体包被反应板),当标本中有相应的抗原即与包被的单克隆抗-HBs(或多克隆抗-HBe)形成相应的复合物,再加入铕(Eu)标记物单克隆抗-HBs(或单克隆抗-HBe)抗体,即形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-DTTA-Eu(或抗HBe-HBeAg-抗-HBe-DTTA-Eu)复合物。增强液(β-NTA)将复合物上的Eu 3+ 解离到溶液中,并与增强液中的有效成分形成高荧光强度的鳌合物,其荧光强度和标本中的抗原浓度成正比。通过测定荧光强度,可知标本中的抗原含量。抗-HBs测定采用双抗原夹心、抗-HBe和抗-HBc采用中和抑制时间分辨荧光免疫分析测定,该两项除在加入标本的同时加入中和抑制剂外,其余与上三项方法相同,但其(抗-HBs除外)荧光强度和标本中的抗体浓度成反比。

    1.3.2 EIA定性一步法 HBsAg和HBeAg测定采用双抗体夹心、抗-HBs测定采用双抗原夹心、抗HBe和抗HBc采用竞争法。按试剂盒说明操作。用以上两种方法同时测定450例(即每项指标各测90例)临床HBV标志物血清标本(阴性、阳性各占例数不等),统计两种方法检测结果的符合程度。

    1.4 仪器 TR-FIA用Wallac公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪测量结果。EIA用Ladsystems Dragon Wellscan MK3酶标仪判读结果。以上两种方法五项指标阴性、阳性判断标准按试剂盒标准要求。1.5 统计学方法 卡方检验

    2 结果

    HBV标志物五项指标EIA和TRFIA结果对比统计分析P>0.05,结果见表1。

    表1 EIA与TR-FIA法检测“二对半”结果(略)注: * 450例标本EIA法确认阴、阳性后,与TR-FIA一同检测

    3 讨论

    HBV血清标志物检测,是诊断HBV感染和分析乙肝患者病程转归的重要指标之一,特别是观察疗效,用定量的分析手段最佳。目前测定HBV血清标志物的方法有EIA法、RIA法、GI-CA法等多种方法,大多数医院应用EIA法。这些方法除RIA外,灵敏度均低,如EIA定性法的灵敏度只有1ng/ml,且实验过程受干扰因素较多,稳定性差。RIA虽可以进行定量分析,并具有较高的灵敏度,但是,由于放射性同位素半衰期短,存在放射性污染等问题,近年已应用不多。R-FIA法,可准确定量测定,其基本原理是利用镧系元素铕(Eu)标记抗原或抗体,形成免疫复合物固定于固相载体上,加入待测标本,再加入增强液后形成铕鳌合物,光照激发后在固定时间段检测特异性荧光,具有长的荧光寿命,通过时间延迟,将特异性荧光与非特异性荧光、发射荧光与激发荧光分离开来,该法本底极低,从而提高了灵敏度和精确性,其线性范围宽,灵敏度可达10 -13 mol/L~10 -18 mol/L,超过了RIA法 [2,3] ,更超过了EIA法,标准曲线保留时间长,受环境影响小,是目前最先进的HBV标志物诊断技术。本文检测的450例HBV标志物标本,是经过EIA法反复核实确定阴阳性后,再用TR-FIA检测,五项指标阴性、阳性结果用卡方统计学比较P值>0.05,两种方法检测结果差异不显著。因此,仅从阴阳性结果的符合程度来看,TR-FIA是一种非常稳定的检测方法,因为TR-FIA法检测抗-HBe和抗-HBc的铕标记抗体与待测抗体是同时公平竞争中和抗原,所以,假阴性、假阳性可以避免,结果准确。TR-FIA定量分析,以其突出的准确性、稳定性,无污染,价格低廉,易于存储等优点,将在HBV标志物检测中有着广泛的应用前景。

    参考文献

    1 Mitrunen K,Piironen T.Du-al-label one-step immunoassay for simuitaneous measurement of free and total prostate-specific antigen concentrations and ratios in serum.Clin Chem,1995,41:1115-1120.

    2 袁汉尧,吕世静,黄日安,等.乙肝病毒标志物时间分辨荧光免疫测定与放射免疫测定的分析比较.数理医药学杂志,2003,16(5):456-458.

    3 秦卫仕,田蓉.时间分辨荧光免疫分析方法学评价.免疫学杂志,2002,1(5):398.

   作者单位:1200433上海第二军医大学长海医院实验诊断科
    2353000福建南平解放军第92医院检验科
    3200433上海第二军医大学基础部


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