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中药对耐甲氧西林葡萄球菌的体外敏感性研究*

来源:《中华中西医杂志》 作者:栾耀芳,吴国英,孔祥山,王 军 2008-7-4
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摘要: 结论 对MRS引起的感染,在抗生素选择压力增大的情况下,中药可以成为治疗的较好选择。 【关键词】 中药。耐甲氧西林葡萄球菌。体外敏感性 耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)通过合成分泌&beta。...


【摘要】  目的 对多重耐药的耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)进行中药体外敏感试验,观察其诸多改变对中药治疗作用的影响,筛选有效中药。方法 采用琼脂扩散法,以临床收集的MRS 30株为实验组,非耐甲氧西林的葡萄球菌30株为对照组进行体外敏感性研究,所选中药通过水提、醇提法制备药液,观察各种中药的抑菌环直径。结果 所试中药体外抑菌效果从强到弱依次为:半枝莲水提液、半枝莲醇提液、射干醇提液、蒲公英醇提液、鱼腥草醇提液、蒲公英水提液、白头翁水提液、鱼腥草水提液、白头翁醇提液、射干水提液。实验组与对照组细菌的抑菌效果经统计学分析,P>0.05,差异无显著性。结论 对MRS引起的感染,在抗生素选择压力增大的情况下,中药可以成为治疗的较好选择。

【关键词】  中药;耐甲氧西林葡萄球菌;体外敏感性


    耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)通过合成分泌β-

    *基金项目:山东中医药管理局“十一五”计划项目(编号:2005-218)

    内酰胺酶及改变膜的渗透性、基因突变等方式,使自己呈现多重耐药性。通常MRS不论其体外药敏试验结果如何,所有的青霉素类、头孢菌素类、β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂均无临床疗效,并且绝大多数对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素耐药,临床治疗起来非常困难。那么细菌的诸多改变是否影响中药的治疗作用呢?这一方面未曾见有报道,为此我们选择了具有清热解毒、清热燥湿作用的中药通过水提与醇提的方法制备药液,对MRS进行了体外敏感性的对比研究,并对有效中药进行筛选,现报告如下。

    1  实验材料

    1.1  中药选择  鱼腥草:三白草科植物蕺菜Horttuynia cordata Thunb.的干燥地上部分,切段。射干:鸢尾科植物射干Belamcanda chinensis(L.)DC.的干燥根茎,切片。蒲公英:菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.、碱地蒲公英T.sinicum Kitag.或同属数种植物的干燥全草,切段。半枝莲:唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的干燥全草,切段。白头翁:毛茛科植物白头翁Pulsatilla chinensis(Bge.) Regel的干燥根,切薄片。以上药物均购自我院中药房。

    1.2  实验菌株  来自本院门诊及病房临床标本中分离的葡萄球菌。选择经鉴定为耐甲氧西林的葡萄球菌(MRS)菌株30株为实验组,其中MRSA 8株,MRCNS 22株; 非MRS菌株30株为对照组,其中金黄色葡萄球菌17株,其他凝固酶阴性葡萄球菌13株。(仪器:英国先德SENSITITRE全自动微生物鉴定仪,鉴定符合率95%以上。MRS鉴定采用2004年NCCLS出版的药敏试验指南M100-S14手册推荐的30μg头孢西丁纸片法。)

    2  实验方法

    2.1  中药制备

    2.1.1  中药水提液  取中药鱼腥草、射干、蒲公英、半枝莲、白头翁各500g,分别置提取容器中,加水适量,浸泡20min,继续加水6~8倍(根据药物容积不同,加水量不同),加热煎煮提取2次(2h, 2h),过滤去渣,合并2次提取液,慢火浓缩至500ml左右(1g/ml),灌封,备用[1]。

    2.1.2  中药醇提液  取中药鱼腥草、射干、半枝莲、白头翁各500g,分别置提取容器中,加65%乙醇适量,浸泡20min,继续加提取溶剂6~8倍量,加热煎煮提取2次(2h, 2h),过滤去渣,合并2次滤液,回收乙醇。慢火浓缩至500ml左右(1g/ml),灌封,备用[1]。

    2.2  菌液制备  挑取培养18~24h的纯菌落,制成0.5麦氏单位,浓度相当于(1~1.5)×108CFU/ml的菌悬液,备用。

    2.3  操作  以无菌棉棒蘸取菌悬液,均匀涂抹于M-H琼脂平板,稍倾,在平板上打5~6个直径6mm左右的孔,深度约为4~5mm,加入浓度为1g/ml的中药液60μl,置平板于35℃~37℃孵箱培养,24h后量取抑菌环直径,以无菌生长的透明环的直径为最终结果。

    3  结果

    经24h培养观察,所有中药对实验组及对照组细菌表现出不同的抑制效果,结果见表1、表2、表3,图1。表1  不同中药对两组细菌的抑制效果比较 表2  中药的不同提纯方法对实验组细菌抑制效果比较 表3  中药的不同提纯方法对对照组细菌抑制 效果比较从表1中可以看出,所试中药对实验组及对照组细菌在抑菌效果上经统计学分析,均P>0.05,差异无显著性,因此,无论是显示多重耐药的葡萄球菌还是普通的葡萄球菌,中药的抑菌效果是基本相同的,说明这些多重耐药的特殊菌的诸多改变尚未影响中药的治疗作用,这样在用药环境上比较西药显示出了很大的优势,无需实验室进一步分类即可用药,可做到及时、高效。

      另外,根据抑菌环直径大小,所试中药体外抑菌效果从强到弱依次为:半枝莲水提液、半枝莲醇提液、射干醇提液、蒲公英醇提液、鱼腥草醇提液、蒲公英水提液、白头翁水提液、鱼腥草水提液、白头翁醇提液、射干水提液。

    从表2、表3中可以看出,鱼腥草醇提液、射干醇提液、蒲公英醇提液抑菌效果均明显优于相应的水提液,经统计学分析,P<0.01,两者对比差异有非常显著性。对照组半枝莲水提液效果优于醇提液,经统计学分析,P<0.05,两者对比差异有显著性。而白头翁其醇提液、水提液在抑菌效果上经统计学分析,P>0.05,两者对比差异无显著性。

    4  讨论

    MRSA自1961年被发现后,到20世纪80年代后期就已成为全球发生率最高的医院内感染病原菌之一。全世界范围内,目前能够被证实对MRSA有效的只有万古霉素。因此,MRSA被列为世界三大最难解决感染性疾患的第一位,甚至有专家将之称为“超级病菌”。2007年10月17日美国弗吉尼亚贝德福德一名17岁高中生就因感染MRSA而死亡。我国20世纪70年代上海报道MRSA约占金黄色葡萄球菌的5%,1985~1988年上海及北京等地区为10%~24%,1994~1996年上升到50%~77.9%[2],2001年我国的全国调查报道波动在40%~90%[3],比利时报道波动在1.6%~62.4%,表明世界各地都有不同程度的增长,甚至各医院病房之间亦可有明显差异[4]。30%~60%MRSA定植的病人以后会并发感染,一旦某部门发生MRSA流行,则院内MRSA感染发生率增加,病死率高,会给患者造成极大痛苦。但抗生素的开发明显滞后,并且始终围绕高效、广谱,其用于临床的后果自然是细菌的耐药性越来越强,在这一方面无疑中药具有很大优势,我们国家是中药生产大国,药源广泛,价格低廉,如果能够及早得到开发利用,必将惠及全社会。

【参考文献】
  1 谢秀琼.现代中药制剂新技术,北京:化学工业出版社,2004,4.

2 韦莉萍,靳士英,李春梅,等.金黄色葡萄球菌医院感染危险因素的调查.中国抗感染化疗杂志,2001,1(2):91-93.

3 马越,金少鸿.我国细菌耐药性监测研究的新特点.中华检验医学杂志,2005,28(4):344-348.

4 Herwaldt LA. Control of MRSA in the hospital setting. Am J Med,1999,106(5A):11-18.


作者单位:250011 山东济南,山东中医药大学附属医院


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