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脊灰实验室监测工作的质量控制

来源:INTERNET 作者:于子颖 许立平 王水香 何伟 2005-5-30
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摘要: 随着消灭脊灰工作的深入,脊灰实验室监测工作质量显得更为重要,脊灰实验室监测工作是证实本土无脊灰野病毒存在的关键。近年来脊灰实验室的工作环境和实验条件有了很大改善,同时对脊灰实验室监测工作质量也提出更高要求。影响脊灰实验室监测工作质量的主要因素不仅是技术人员水平,而且包括实验室的整体管理水平。标本采......


  随着消灭脊灰工作的深入,脊灰实验室监测工作质量显得更为重要,脊灰实验室监测工作是证实本土无脊灰野病毒存在的关键。近年来脊灰实验室的工作环境和实验条件有了很大改善,同时对脊灰实验室监测工作质量也提出更高要求。影响脊灰实验室监测工作质量的主要因素不仅是技术人员水平,而且包括实验室的整体管理水平。标本采集、运输和保存,仪器设备的使用和保养,数据管理和传递等都会影响脊灰实验室监测工作质量。为了更好地做好消灭脊髓灰质炎的工作,有必要加强脊灰实验室的质量管理工作,提高脊灰实验室监测工作质量。

  1 专业技术人员的培训

    从事脊灰检验工作的人员必须接受过专业教育,并达到国家规定的相应资格要求,具备相应的专业知识。上岗前必须进行专门的专业培训,并通过专业考试,方可在资深的专业技术人员指导下从事检验工作。检验工作人员每年至少在本单位培训两次,以便更新知识,提高技术。实验室要有年度培训计划和总结,要建立人员培训记录和个人技术档案。

    2 实验室管理程序

    应制订实验室程序管理文件,建立实验室质量保证体系。对实验室程序管理文件定期审核和修订,以满足检验工作的要求。从管理和技术两方面对检验过程实施全面质量控制。实验室至少要有两位高级管理人员,一位负责质量管理,一位负责技术管理。

    严格按照WHO和国家脊灰实验室的要求,制订详细的实验室作业指导书,包括试剂配制、标本处理、病毒分离和鉴定等。做到人人都按照作业指导书操作,不会因为实验室技术人员不同,实验方法差异而出现不同检测结果。

  3 实验室间检测质量的比对

    影响实验室检测质量的因素很多,为了保证各实验室检测结果一致,应该定期进行实验室比对实验,以便提高实验室检验工作质量。国家脊灰实验室的考核也是非常重要的,它有助于检查各实验室的检验水平。

  4 仪器设备的管理

    实验室仪器设备的使用与维修要有详细的记录。CO 2 培养箱的温度及CO 2 的浓度、冰箱的温度等每天都要有检查记录。CO 2 培养箱的温度及CO2的浓度控制要定期校正,至少每年一次。需要定期检查生物安全柜的生物安全性。

  5 试剂质量的控制

    试剂质量对检测结果影响非常大。试剂质量不好会严重影响检验结果,甚至造成实验失败。氯仿纯度不好,杂质过多会严重影响细胞的生长;小牛血清质量不好,营养成份不够,细胞生长形态不好,容易老化;谷胺酰氨过期、失效会造成细胞不贴瓶生长;脊灰抗血清特异性不好会影响脊灰型别鉴定结果,出现假阳性或假阴性结果。每次使用新的试剂之前都应该与老的试剂进行对比实验,以便确认试剂质量没有问题。

    6 实验室的生物安全

    实验室要有严格的生物安全管理制度,要有专人负责实验室的生物安全。实验室要分清洁区、半污染区和污染区。实验室的污染物要有严格的消毒制度,污物在离开实验室之前都要经过严格消毒。要制定严格的毒种保存制度,实验室的毒株必须双人双锁保管。

  7 实验室技术的质量控制

    7.1 粪便标本的采集、运送与保存 粪便标本质量对脊灰病毒分离来说至关重要,它直接影响脊灰病毒的分离率,是脊灰实验室监测工作关键所在。粪便标本应在7天内尽早采集。为了提高脊灰病毒的分离率,应采集双份标本,两份标本采集间隔时间为24h,标本量不少于8g。标本采集后应及时冷藏送至省脊灰实验室;如果不能及时运送,那么可置-20℃冰箱短暂保存。采集标本时要注明病人姓名、年龄、住址以及采样日期。实验室要做好标本登记记录,尽快进行病毒分离工作,剩余标本置-20℃保存,留作以后复核用。

  7.2 标本的处理 AFP粪便标本中含有大量的病原微生物,它们会严重影响脊灰病毒的分离与鉴定。氯仿是处理这些标本比较好的试剂,它可以破坏微生物表面的蛋白质结构,并将其杀灭。但是它不会破坏脊灰病毒的感染性,因为脊灰病毒是无囊膜的肠道病毒。氯仿对细胞也有毒性,特别是质量不好、杂质含量高的氯仿。氯仿比重较大,离心后沉在离心管底部,吸取上清液时注意不要吸到氯仿。有些粪便标本是病人服药后采集的,这些药物有时对细胞有毒性,会影响细胞正常生长。在进行病毒分离工作时,如果出现这种情况,那么要及时转接到另一细胞管。

    7.3 细胞培养 细胞质量直接影响病毒的分离率。常用于脊灰病毒的细胞有RD、L20B和Hep-2细胞,它们都是传代细胞。细胞代数、生长状况与细胞对病毒的敏感性有关。细胞代数越低,生长形态越好,病毒分离率也就约高。细胞在实验室传代一般不超过十五代。在控制细胞代数的同时,要注意保持细胞的生长状态,生长旺盛的细胞对病毒更敏感。

    7.4 病毒分离与鉴定 标本接种到细胞培养管后至少要盲传二代,每代培养7天。如果遇到标本有毒性或细胞无法维持7天,那么需要再接种一代,以便保证标本感染细胞14天以上。有些标本病毒量少,加上细胞代数,细胞生长形态不好,对脊灰病毒不敏感,容易漏检。如果出现这种情况,那么需要继续盲传一代。

    及时对阳性标本进行型别鉴定。鉴定用的脊灰病毒中和血清宜采用WHO抗血清,特异性好。有些混合型阳性标本中,有的型别病毒浓度高,有的型别病毒浓度低,鉴定时浓度低的病毒病变较慢,有时仅有一孔病变。如果出现这种情况,那么需要用单型脊灰抗血清中和滴度较高的那型病毒,然后再传一代,使滴度较低的那型病毒滴度增加,再进行病毒型别鉴定,这样可以避免脊灰病毒的漏检。    

  作者单位:330029江西省疾病预防控制中心 


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