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用正交试验法优选通络清脑胶囊水煎醇沉的提取工艺

来源:INTERNET 作者:李丽贤 黄晓巍 王明星 2005-5-23
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摘要: 上述有效成分易溶于水,又溶于乙醇,故对方中白芍、甘草采用水煎醇沉法提取。本试验用正交试验法,以出膏率和芍药苷含量为指标,用HPLC法对白芍进行含量测定,用方差分析的方法进行分析,以优选通络清脑胶囊水煎醇沉的提取工艺条件。2 以出膏率为指标优选最佳水煎工艺2。1 试验因素与水平 见表1。...


新药通络清脑胶囊是由延胡索、独活、白芍、甘草等七味中药组成的中药复方制剂,具有镇静、镇痛之功效,主要用于治疗头痛。方中白芍主要含有芍药苷,具有镇静、镇痛、抗菌等功效,甘草有效成分为甘草酸、甘草次酸等,具有解毒、解痉等功效 [1]。上述有效成分易溶于水,又溶于乙醇,故对方中白芍、甘草采用水煎醇沉法提取。本试验用正交试验法,以出膏率和芍药苷含量为指标,用HPLC法对白芍进行含量测定,用方差分析的方法进行分析,以优选通络清脑胶囊水煎醇沉的提取工艺条件。

1 仪器与药品

1.1 药品 白芍、甘草药材,购于北京同仁堂药店吉林分店,经鉴定符合中国药典2000年版一部标准。芍药苷,中国药品生物制品检定所提供,批号为0736-200219,规格:供含量测定用。甲醇:色谱纯;其它试剂均为分析纯。

1.2 仪器 日本岛津LC-2010A型高效液相色谱仪。

2 以出膏率为指标优选最佳水煎工艺

2.1 试验因素与水平 见表1。

表1 水提试验L 9 (3 4 )因素水平因素水平 A 加水量

正交试验 称取白芍9g,甘草6g,精密称定,按表1试验条件进行水提试验。水提液滤过,适当浓缩,转移至100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,作为供试品溶液。精密量取1~9号供试品溶液各10ml,置干燥恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,置80℃烘箱干燥3h,移至干燥器中冷却  30min,迅速精称,计算出膏率。正交试验结果,见表2。

表2 白芍、甘草水提以出膏率为指标正交试验结果

2.3 结果分析 由表2可见,四个因素的极差大小顺序为B>C>A>D,各因素与水平的组合应为A 2 B 3 C 3 。进一步进行方差分析,结果见表3。

表3 方差分析

3 以白芍中芍药苷的含量为指标优选最佳水煎工艺

3.1 试验因素与水平 见表1。

3.2 L 9 (3 4 )正交试验

3.2.1 色谱条件 色谱柱C 18 ;流动相:甲醇-水(30:70);流速:1ml/min;检测波长230nm;柱温:室温。

3.2.2 标准曲线的制备 取干燥至恒重的芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.50mg的溶液(实际称样量12.50mg定容于25ml量瓶中,每1ml含0.5mg),精密吸取对照品溶液1、2、5、10、15μl,分别注入液相色谱仪,测定。以进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,结果见表4。

表4 标准曲线数据

3.2.3 供试品溶液的制备与测定 分别精密量取定容100 ml量瓶中的1~9号提取液各20ml,分别置分液漏斗中,用乙醚提取1次,每次20ml,弃去乙醚液,水层用饱和的正丁醇提取3次,每次20ml,合并正丁醇提取液,蒸干,残渣用甲醇分别定容于25ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,再分别精密量取5ml置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液2μl,供试品溶液1号、2号各15μl,3号、9号各5μl,4号~8号各10μl,分别注入液相色谱仪,按标准曲线制备方法进行测定,结果,见表5。

表5 白芍、甘草水提以芍药苷含量为指标正交试验结果

3.3 结果分析 由表5可见,四个因素的极差大小顺序为A>B>D>C,各因素与水平的组合应为A 3 B 3 C 2 。进一步进行方差分析,结果见表6。

表6 方差分析方差来源离均差平方和自由度

4 优选最佳醇沉工艺

4.1 出膏率的测定 称取白芍9g、甘草6g,精密称定,按上述优选的工艺条件(加6倍量的水,提取3次,每次2h)进行水煎、滤过、浓缩,加水定容于100ml量瓶中。分别精密量取10ml共3份置具塞锥形瓶中,浓缩至干,残渣分别加入50%、60%、70%乙醇各20ml,超声使溶解,充分搅拌,密塞,静置24h(4℃),滤过置干燥恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,置80℃烘箱干燥3h,移至干燥器中冷却30min,迅速精称,计算出膏率。结果见表7。

4.2 芍药苷含量的测定 残渣分别加水20ml使溶解,用乙醚提取1次,每次20ml,弃去乙醚液,水层用饱和的正丁醇提取3次,每次20ml,合并正丁醇提液,蒸干,残渣用甲醇分别定容于25ml量瓶中,作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液2μl、供试品溶液10μl,分别注入液相色谱仪,按标准曲线制备方法进行测定,计算白芍不同浓度醇沉后芍药苷的含量。结果见表7。

表7 白芍、甘草不同浓度醇沉后试验结果

结果表明:60%醇沉后,芍药苷含量最高。故最后确定白芍、甘草水煎醇沉工艺为:加6倍量的水,提取3次,每次2h,醇沉浓度为60%。

5 讨论

本文采用正交试验法,以出膏率和芍药苷含量为指标,用高效液相色谱法进行含量测定,优选通络清脑胶囊水煎醇沉提取工艺条件,最终选用6倍量的水,煎煮3次,每次2h,然后用60%乙醇进行沉淀(于4℃静置24h)的制备工艺。此工艺能够保证通络清脑胶囊中白芍和甘草有效成分提取较完全,以确保疗效。

参考文献

1 郑虎古.中药现代研究与应用.北京:学苑出版社,1997,1261,2132.

作者单位:130021吉林长春长春中医学院附属医院

130061吉林长春吉林省药品检验


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