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荧光定量PCR检测347例HBV-DNA结果分析

来源:INTERNET 作者:邱耿娴 苏丹 刘俊峰 2005-5-18
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摘要: 【摘要】 目的 用ELISA法检测患者血清HBV-M不同的标志物组合时,观察其HBV-DNA阴性、阳性及阳性的拷贝数。方法 347例患者血清分别用ELISA和荧光定量PCR(FQ-PCR)检测。结果 148例HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+),其HBV-DNA阳性146例,阳性率99%,定量结果对数值的靶值为6。187例HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(......


  【摘要】 目的 用ELISA法检测患者血清HBV-M不同的标志物组合时,观察其HBV-DNA阴性、阳性及阳性的拷贝数。方法 347例患者血清分别用ELISA和荧光定量PCR(FQ-PCR)检测。结果 148例HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+),其HBV-DNA阳性146例,阳性率99%,定量结果对数值的靶值为6.701;187例HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+),其HBV-DNA阳性63例,阳性率34%,定量结果对数值的靶值为4.142;3例HBsAg(+)、抗-HBc(+),其HBV-DNA阳性2例,阳性率67%,定量结果对数值的靶值为6.397;3例抗-HBe(+)、抗-HBc(+),其HBV-DNA阳性1例,阳性率33%,定量结果对数值的靶值为7.278。结论 FQ-PCR能快速、特异、灵敏地定量检测血液中HBV-DNA,对疾病的诊断、治疗过程的监测、愈后监控及药效评价等都具有很高的实用价值。

关键词 乙肝病毒DNA 乙肝病毒血清学标志 荧光定量聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验

The analysis for the results of HBV-DNA from

347clinical samples which were tested by FQ-PCR

Qiu Gengxian,Su Dan,Liu Junfeng

Department of Clinical Laboratory,People’s Hospital,Yingde,Guangdong513000,China

【Abstract】 Objective Using ELISA to detect the HBV-M in clinical samples and the results were presentˉed with combinations of different labeled compound.Meanwhile,all these samples were tested by FQ-PCR,so as to get the results which were presented with HBV-DNA(-)、HBV-DNA(+)and the number of copies.Methods A total of347samples of sera were detected by ELISA and FQ-PCR respectively.Results In the combinations of HBsAg(+)、HBeAg(+)、anti-HBc(+);HBsAg(+)、anti-HBe(+)、anti-HBc(+);HBsAg(+)、anti-HBc(+);anti-HBe(+)、anti-HBc(+),the positive rate of HBV-DNA(+)were found to be99%,34%,67%,33%respectively and the logarithm of the target value were found to be6.701,4.142,6.397,7.278respecˉtively.Conclusion FQ-PCR is a rapid,sensitive,and specific method for quantitative detection of HBV-DNA.It is suitable for the screening and diagnosis of HBV infection and monitoring the effectiveness of treatment.

Key words HBV-DNA HBV-M FQ-PCR ELISA

临床常用ELISA法进行HBV-M的检测和PCR法进行HBV-DNA的定性检测来判断HBV的感染或疗效 [1] 。FQ-PCR是在PCR定性的基础上,增加了一条荧光探针,并标记荧光报告基团(R)和荧光淬灭基团(Q)。当荧光探针保持完整时,R的荧光信号被Q所淬灭;而在PCR反应中,Taq酶将探针切断,R释放出荧光信号,检测其荧光信号强弱,可反映HBV-DNA浓度 [2] 。并且因为FQ-PCR克服了定性PCR的易污染、假阳性高、操作者要接触强致癌物等不足,整个操作过程无需开盖,因而其临床应用越来越广泛。本文采用FQ-PCR法和ELISA法对照检查了347例标本,现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 347例均为2003年9月~2004年1月本院门诊和住院的患者,其中男231例,女116例,年龄2~68岁,采静脉血3ml(不抗凝)送检。

1.2 仪器、试剂、方法

1.2.1 血清HBV-M检测 美国biocell2010酶标仪,美国biocell AWL洗板机,深圳月亮湾生物工程公司生产的EILˉSA试剂,并按说明书操作。

1.2.2 血清HBV-DNA检测 美国MJO Pticon(2)荧光定量PCR仪,深圳匹基生物工程股份有限公司生产的FQ-PCR检测HBV-DNA试剂,并严格按说明书操作。

2 结果

ELISA法检测HBV-M时,以HBsAg为1,抗-HBs为2,HBeAg为3,抗-HBe为4,抗-HBc为5。将347例标本按HBV-M组合的不同分7组与HBV-DNA定量结果比较。结果见表1。

3 讨论

组别1(俗称大三阳),其FQ-PCR法的HBV-DNA阳性率达99%,定量结果对数值的靶值高达6.701,组别2(俗称小三阳),其FQ-PCR法的HBV-DNA阳性率为34%,定量结果对数值的靶值为4.142,经t检验P<0.05,故认为两者定量结果对数值的靶值差异显著,HBeAg自感染细胞分泌入血液循环,其消长与病毒体及DNA多聚酶的消长基本一致,故HBeAg可作为体内有复制及血清具有强感染性的一个指标 [3] 。同时表明组别1,其HBV-DNA复制活跃,HBV浓度高,传染性也强。

表1 HBV-DNA定量结果与HBV-DNA检测结果

近来我国及国外学者均发现有HBV的PreC区突变株,主要见于我国及地中海区,变异毒株不产生HBeAg,可在抗-HBe阳性的情况下仍大量繁殖 [3] 。符合组别2中少数个 例定量结果对数值偏高。因此对抗-HBe阳性患者应同时检测其血清中病毒DNA,以综合其病情作出判断。组别3,3例HBsAg(+)、抗-HBc(+),其HBV-DNA阳性2例,阳性率67%,定量结果对数值的靶值为6.397;组别4,3例抗-HBe(+)、抗-HBc(+),其HBV-DNA阳性1例,阳性率33%,定量结果对数值的靶值为7.278。从组别3、组别4可知非大三阳、小三阳患者,部分患者定量结果对数值的靶值相对较高,有较强的传染性,复制活跃,需接受治疗。用ELISA法作HBV-M检测是临床上传统的诊断HBV感染,评价HBV传染性及预后的手段。而FQ-PCR能快速、特异、灵敏地定量HBV-DNA,对乙型肝炎疾病的诊断,治疗过程的监测,愈后监控及药效评价等都具有很高的实用价值。

参考文献

1 徐志学,李东进.中华肝病学会肝病杂志,1995,3:74.

2 程钢,何蕴韶,周新宇.中华医学检验杂志,1999,22(3):135.

3 查国章.微生物和微生物学检验,1996,24(6):382-383.

作者单位:513000广东省英德市人民医院检验科


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