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ELISA一步法对高浓度HBsAg的影响分析

来源:中华现代临床医学杂志 作者:贾保林作者单位:830063 新疆乌鲁木齐,武警兵团指挥 2013-9-26

摘要: 【摘要】 目的 探讨导致二对半中HBsAg阴性e抗原阳性的原因。方法 收集本院2008年以来体检和住院病人两对半结果中HBsAg阴性e抗原阳性的3例标本,用ELISA法双试剂分一步法和二步法分别测定,并应用 DNA进行确认。结论 对可疑样本复检时,不能选择同一厂家的一步法试剂,避免HooK effect的出现而影响检测结果。 ......


【摘要】  目的 探讨导致二对半中HBsAg阴性e抗原阳性的原因。方法 收集本院2008年以来体检和住院病人两对半结果中HBsAg阴性e抗原阳性的3例标本,用ELISA法双试剂分一步法和二步法分别测定,并应用 DNA进行确认。结果 3例标本中1例阴性,2例阳性。结论 对可疑样本复检时,不能选择同一厂家的一步法试剂,避免HooK effect的出现而影响检测结果。

【关键词】  表面抗原;e抗原;前带现象

 酶联免疫吸附(ELISA)实验,按其操作步骤分为一步法和二步法;一步法因为操作更简单而深受广大用户的青睐。笔者在常规检查乙肝五项时,发现3例HBsAg阴性HBeAg单显阳性的样本,后经两步法复检,DNA确认,1例阴性,2例阳性,证实为ELISA一步法引起的假阴性结果,报告如下。

  1 材料与方法

  1.1 标本来源

  标本采自本院正常体检者。

  1.2 试剂

  HBsAg试剂盒使用北京金豪公司和上海科华公司,通过国家批批检。

  1.3 主要仪器

  KHB ST-360酶标仪,KHB ST-36洗板机。

  1.4 方法

  血样本在常规下用一步法和两步法分别进行检测,操作严格按试剂说明书进行。

  2 结果

  见表1。表1 3例HBsAg阴性e抗原阳性标本检测结果

  3 讨论

  HBeAg存在于乙肝病毒Danna颗粒的核心部分,HBeAg存在表明HBV处于增殖和复制状态,具有强烈的传染性。乙肝两点半检测HBeAg阳性较为罕见,文献报道可能是与INF-a治疗中C基因区的短暂整合或s基因序列中a决定簇前有插入性变异有关。从实验的结果看,一步法在检测中2例出现了假阴性结果,而两步法检测结果呈阳性,这是一种叫做前带现象(或Hook效应)引起,即在检测高滴度抗原(抗体)时出现的极低水平阳性和假阴性结果。产生“Hook effect”的原因,多数的研究认为,在检测高滴度抗原(抗体)时,抗原(抗体)与固相抗体(抗原)反应的比例不当,过剩的抗原(抗体)仅与标记抗体(抗原)结合,而不能与固相抗体(抗原)吸附,洗涤时被洗掉,从而导致仅有少量抗体(抗原)被利用,造成假阴性结果。要改善“HOOK”,最简单的方法时稀释高滴度的待测样本,这无疑将增加工作量,而采用二步法检测可完全消除“HOOK”效应,降低漏检率。因此,笔者认为对可疑样本复检时,不能选择同一厂家的一步法试剂,避免HooK effect的出现而影响检测结果。这样既避免了假阳性(阴性)结果的出现,又减少了医疗纠纷

【参考文献】
  1 洪宏,赵枰.ELISA法检测血清HBsAg前带现象的探讨.检验医学与临床,2007,(1):39.

  2 何刚,宋本先,董五平.ELISA法检测HBsAg前带现象1例.临床输血与检验,2003,(2):147-148.

  3 毛新友.酶免疫一步法检测HBsAg前带现象及其对策.现代检验医学杂志,2003,(2):38.

  4 常立俊.HBeAg酶试荆假阳性原因探讨.华美通讯,1999,1(2):21.

  


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