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HPLC法测定复方檗龙片中盐酸小檗碱的含量

来源:中华现代临床医学杂志 作者:陈 志1,王成永2△作者单位:1 246001 安徽安庆,安庆 2013-9-26

摘要: 【摘要】 目的 采用反相高效液相色谱(HPLC)法测定复方檗龙片中盐酸小檗碱的含量。结论 本方法简便、准确、重复性好,可用于复方檗龙片中盐酸小檗碱的含量测定。 【关键词】 盐酸小檗碱。复方檗龙片。...


【摘要】  目的 采用反相高效液相色谱(HPLC)法测定复方檗龙片中盐酸小檗碱的含量。方法 色谱柱:依利特C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水-0.6%磷酸二氢钾-0.3%十二烷基磺酸钠(100:100:1:1),流速:1.0ml/min,柱温:40℃,检测波长为345nm。结果 线性关系良好,线性范围21.2~318.0 ng/ml;Y=3510000X-15900,r2=0.9998,平均回收率为98.59%,RSD:0.34%。结论 本方法简便、准确、重复性好,可用于复方檗龙片中盐酸小檗碱的含量测定。

【关键词】  盐酸小檗碱;复方檗龙片;含量测定;HPLC

  Objective To establish an HPLC method to determine berberine from prescription of berberine.Methods Yilite C18(250mm×4.6mm,5μm)column was used, the mobile phase consisted of methyl cyanide-water-0.6%KDP-0.3%SDS(100:100:1:1), the flow rate was 1.0ml/min and the UV detector was set at 345nm. Results The method displayed good linearity within the concentration ranges of 21.2~318.0ng/ml(r2=0.9998). The average recovery was 98.59%, RSD:0.34%.Conclusion This method is simple, accurate, replicate and suitable for the determination of berberine in prescription of berberine.

  [Key words] berberine;prescription of berberine pill;determination;HPLC

  复方檗龙片,由龙胆花、小檗皮、甘草、木香、陈皮等多味中药材组成,含有龙胆碱、龙胆苦苷、三萜皂苷类成分、生物碱及莨菪类成分等,具清热化痰,止咳平喘的功效[1]。小檗碱是主要有效成分之一,临床主要用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染、眼结膜炎[2,3]。本实验建立HPLC法测定复方檗龙片中盐酸小檗碱的含量,简便、快速、准确、专属性好,适用于制剂的含量测定和质量控制。

  1 仪器与试药

  1.1 仪器

  岛津HPLC色谱仪(LC-10ATvp泵,SPD-10Avp紫外检测器),Anastar色谱工作站;梅特勒AE-240双量程电子分析天平;雷磁PHS-3C精密pH计。

  1.2 试药

  盐酸小檗碱对照品(由中国药品生物制品检定所提供,07139906,纯度99.68%),供试品为市场抽样;乙腈(色谱纯,德国默克,SF81219),水为重蒸馏水,磷酸二氢钾(分析纯,南京化学试剂一厂,20071121),其他试剂为分析纯。

  2 方法与结果

  2.1 色谱条件

  色谱柱:依利特C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水-0.6%磷酸二氢钾-0.3%十二烷基磺酸钠(100:100:1:1);流速:1.0ml/min;柱温:40℃;检测波长:345nm;进样量:10μl。

  2.2 对照品及供试品溶液制备

  2.2.1 对照品溶液

  精密称取盐酸小檗碱对照品2.12mg,置100ml量瓶中,加50%甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,即得21.2μg/ml盐酸小檗碱对照品溶液。

  2.2.2 供试品溶液

  取复方檗龙片20片,研细,取细粉约1片量,精密称定,置100ml容量瓶中,精密加入甲醇40ml,超声处理20min,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,静置30min,滤过,取续滤液作为供试品溶液。

  2.3 线性关系考察

  取“2.2.1”项下对照品溶液(21.2μg/ml)适量,分别用50%甲醇溶液稀释配成21.2、63.6、106.0、148.4、190.8、318.0ng/ml。按“2.1”色谱条件项下,取10μl进样分析,记录峰面积,并以峰面积(A)与样品浓度(X)用最小二乘法进行线性回归,回归方程为:A=3510000X+15900,相关系数r2=0.9998,线性范围为21.2~318.0ng/ml。表明在该浓度范围内与峰面积线性关系良好,以盐酸小檗碱峰计算理论板数为:4512,分离度为1.7。

  2.4 专属性试验

  取不含盐酸小檗碱的阴性片粉适量,按供试品溶液制备方法制备空白对照溶液,进样10μl,记录色谱图结果:在该色谱条件下,空白辅料、盐酸小檗碱在主峰保留时间处无色谱峰干扰,见图1。 A盐酸小檗碱对照品色谱图B空白溶液色谱图  C盐酸小檗碱含量测定色谱图图1 盐酸小檗碱HPLC图谱

  2.5 精密度试验

  按“2.3”线性关系考察项下,用流动相稀释配成低、中、高对照品溶液(63.6、148.4、318.0ng/ml),连续进样3次,记录色谱图和峰面积,计算RSD分别为:0.42%、0.29%、0.17%(n=3),结果表明精密度良好。

  2.6 稳定性实验

  取样品供试液于0、2、4、6、8h,进样10μl,峰面积结果稳定。实验结果表明,样品供试液在8h内稳定性良好。

  2.7 加样回收率实验

  取已知含量的样品细粉约1片量,精密称定,按“2.1.2”项下方法处理后,取续滤液10ml,分别加入对照品溶液(21.2μg/ml)15、20、24、30、36ml,按上述样品制备方法和色谱条件,制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪,记录色谱图,计算平均回收率为(98.59±0.33)%。回收率=(测得量-样品含量)/加入量×100%,结果表明,该方法加样回收良好,见表1。表1 加样回收率试验结果

  2.8 供试品测定

  取供试品4批,分别按“2.2.2”和“2.1”项下操作,色谱条件,10μl进样分析,记录色谱图,计算三批样品的含量,结果见表2。表2 样品中盐酸小檗碱的含量测定结果

  3 讨论

  盐酸小檗碱含量测定的方法文献报道较多,文献[4]采用三元络合物比色法测定,文献[5]采用紫外分光光度法测定,但这灵敏度较低;文献[6]采用反相高效液相色谱法测定含量,样品采用中性氧化铝吸附法制备,该方法操作繁琐,变异较大;由于中药成分较多较复杂,目标化合物能够有效分离,通常样本分析时间很长[7],而且药材因种间、产地以及收购时间等各方面的因素对其主要有效成分含量均有较大的影响。笔者用乙腈-水-0.6%磷酸二氢钾-0.3%十二烷基磺酸钠(100:100:1:1)为流动相,流速:1.0ml/min,柱温:40℃,检测波长为345nm,该方法快速、灵敏、特异性好,适合该制剂的含量测定和质量控制。

【参考文献】
   1 杨春生,杨风梅,欧阳彪.双波长薄层扫描法测定小檗皮中盐酸小檗碱的合量.青海医药杂志,2001,31(8):58-59.

  2 龙小华,厉辉,黄嵘.复方苦参洗剂中小檗碱的含量测定.中国药师,2004,7(12):233-234.

  3 奚燕,余敏英,杨铭,等.黄连素软膏中盐酸小檗碱的含量测定.上海中医药大学学报,2004,17(4):86-87.

  4 霍达,王英锋,刘锁兰.黄连中小檗碱的定性与定量分析.首都师范大学学报(自然科学版),2008,32(6):325-327.

  5 饶跃峰,谢先吉,赵青威,等.复方止血栓中盐酸小檗碱的含量测定.中国医院药学杂志,2008,27(3):102-103.

  6 付小六.反相高效液相色谱法测定复方黄柏酊中小檗碱含量.中国药业,2006,14(6):98-99.

  7 库尔班江,努尔买买提.高效液相色谱法测定红果小檗皮小檗碱的含量.新疆师范大学学报,2008,28(2):63-64.

  


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