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HPLC法测定安神温胆丸中五味子醇甲的含量

来源:中华现代临床医学杂志 作者:王应斌,穆仙丽 2011-6-29
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摘要: 【摘要】 目的 建立安神温胆丸中五味子醇甲的含量测定方法。结果 五味子醇甲在0。结论 该方法简便、快捷、重复性好、能够有效地控制安神温胆丸的内在质量。安神温胆丸。...


【摘要】  目的 建立安神温胆丸中五味子醇甲的含量测定方法。方法 反相高效液相色谱法,Alltima C-18柱,流动相为甲醇-水(60∶40),检测波长为250 nm。结果 五味子醇甲在0.01589~0.38140 μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为102.05%,RSD为1.80%(n=6)。结论 该方法简便、快捷、重复性好、能够有效地控制安神温胆丸的内在质量。

【关键词】  反相高效液相色谱法;安神温胆丸;五味子;五味子醇甲;含量测定

安神温胆丸收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第四册[1],由制半夏、陈皮、竹茹、酸枣仁(炒)、枳实、远志(制)、五味子、人参、熟地黄、茯苓、朱砂、甘草、大枣等十三味药材组成的中成药复方制剂,具有和胃化痰,安神定志之功效,临床上用于治疗心胆虚怯、触事易惊、心悸不安、虚烦不寐。

  据文献报道[2],五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Balii.的干燥成熟果实。其主要有效活性成分为挥发油、木质素、有机酸等。其中木质素中的五味子醇甲(五味子素)schizandrin、α-,β-,δ-,ε-五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素为本品的有效成分。

  原质量标准无含量测定监控指标,参照《中国药典》2005年版一部“五味子”项下[含量测定]方法[3],采用高效液相色谱法建立含量测定方法。经方法学考察和对三批样品的含量测定结果表明,本法操作简便,重复性好,检测方法具有灵敏度高、分离效能好、准确等优点,结果满意。

  1 仪器与试剂

  1.1 仪器 日本岛津LC-2010A高效液相色谱仪、日本岛津UV-2450紫外-可见分光光度仪。

  1.2 试剂 甲醇为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。

  1.3 对照品 五味子醇甲对照品由中国药品生物制品检定所提供,批号:110857-200507(供含量测定用)。

  1.4 样品 由吉林金泉山药业集团股份有限公司提供:1批小蜜丸(批号:20070301);2批大蜜丸(批号:20070101、20070103)。

  2 耐用性考察

  2.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;Alltima C-18,250×4. 6 mm,5 μl,以甲醇-水(60∶40)为流动相;检测波长为250 nm;流速0.8 ml/min;进样量10 μl;柱温35 ℃。吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl,进样,测定。结果供试品色谱在与对照品色谱相应的保留时间处有相同的色谱峰,样品中五味子醇甲峰完全基线分离,保留时间17 min左右,五味子醇甲的理论板数为12 000。

  2.2 检测波长的选择 取五味子醇甲对照品溶液,在200~400 nm波长范围内进行光谱扫描。结果五味子醇甲在250.8 nm波长处有最大吸收,参照《中国药典》2005版一部相关种项下规定确定250 nm为本方法的测定波长,见图1。

  2.3 流动相的选择 参照《中国药典》2005版一部“五味子”[含量测定]项下,以甲醇-水为流动相,分别对(65∶35)、(62∶38)、(60∶40)不同比例进行试验,试验结果表明,以甲醇-水(60∶40)为流动相,出峰时间恰当,峰形理想,分离度较好。

  2.4 流速的选择 分别对流速1.0 ml/min、0.9 ml/min、0.8 ml/min进行比对试验,试验结果表明调低流速至0.8 ml/min时,峰形理想,理论塔板数高。

  2.5 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

  3 溶液的制备

  3.1 对照品溶液的制备 取五味子醇甲对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 ml含15 μg的溶液,即得。

  3.2 供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品适量,剪碎,取大蜜丸约2.4 g或小蜜丸2.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 ml,称定重量,超声处理(功率250 W,频率40 kHz)30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

  3.3 阴性对照溶液的制备 取除五味子外的各味药材,按处方量的1/10量,同样品同工艺制备阴性样品,取阴性样品同供试品溶液的制备,即得。

  4 方法学考察

  4.1 提取溶剂的选择 以甲醇、石油醚为提取溶剂,按拟定方法分别制备供试品溶液,进样,测定。试验结果表明,采用甲醇作提取溶剂,超声处理提取率较高。

  4.2 提取时间的选择 取供试品,分别超声处理0.5 h、1 h、2 h、3 h制备供试品溶液,进样,测定。试验结果表明,超声提取0.5 h与1 h,含量基本无大的变化,超声提取2 h、3 h后,提取率降低。

  4.3 专属性考察 取阴性空白样品,同供试品溶液的制备阴性供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl,注入液相色谱仪。试验结果表明,阴性供试品溶液在与对照品色谱相同保留时间处无对应峰,表明该方法其他组分对五味子醇甲无干扰,见图2~4。

  图1 五味子醇甲的光谱图图2 供试品的HPLC图谱图3 对照品的HPLC图谱图4 阴性样品的HPLC图谱

  4.4 线性范围的考察 精密称取五味子醇甲对照品3.179 mg,置200 ml量瓶中,加甲醇至刻度(制成每1 ml含15.895 μg的溶液),分别精密吸取1、2、4、8、16、24 μl注入液相色谱仪,测定,以进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。试验结果表明五味子醇甲在0.01589~0.38140 μg范围内,呈良好线性关系,回归方程为:Y=2E+06X-1539.7,r=0.9999。进样量及相对应峰面积积分值0.01589、0.03179、0.06358、0.12716、0.25432和0.38140;27531、71421、131159、261125、530941、795889。

  4.5 精密度试验 取样品(大蜜丸,批号20070101),按拟定方法制备供试品溶液,重复注入液相色谱仪6次,试验结果表明精密度良好。

  4.6 稳定性试验 取样品(大蜜丸,批号:20070101),按拟定方法制备供试品溶液,分别于不同时间注入液相色谱仪,试验结果表明样品中五味子醇甲在48 h内基本稳定。

  4.7 重复性试验 取同一批号样品(小蜜丸,批号:20070301),平行制备6份供试品溶液,按拟定色谱条件,测定。结果见表1,表明本法重复性尚可。

  4.8 准确度试验 精密称取已知含量的供试品(小蜜丸,批号:20070301,含量为0.194 mg/g)6份,每份约1.0 g,置具塞锥形瓶中,分别精密加入对照品溶液(2.221 mg/100 ml)10 ml,再精密加入甲醇15 ml,称定重量,超声处理(功率250 W,频率40 kHz)30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。按拟定色谱条件测定,计算回收率(%)。结果见表2。表1 重复性试验表2 加样回收试验结果试验结果表明该方法准确度较高,测定结果真实、可靠。

  4.9 样品含量测定 对吉林金泉山药业集团股份有限公司生产的三批样品,按拟定的方法进行含量测定。结果见表3。表3 样品中五味子醇甲含量测定结果

  4.10 检测限的确定 中国药典2005年版(一部)五味子项下规定五味子中含五味子醇甲的最低限度为0.4%,根据处方量及制法,按规定的药材含量最低限度百分之百提取率计算,考虑到生产中各种因素的影响,可将最低限量的80%定为检测限。以直观法对本试验进行分析应暂定为本品含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)计,小蜜丸含量不得少于0.15 mg/g,大蜜丸每丸不得少于1.50 mg/g。

【参考文献】
   1 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准:中药成方制剂(四册),1978,76.

  2 吕武清.中成药中中药材的薄层色谱鉴别.北京:人民卫生出版社,1978,128.

  3 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:化学工业出版社,2005,44.

  4 肖望书.HPLC测定刺五加脑灵液中异嗪皮和五味子醇甲的含量.中成药,2009,31(5):737.

  


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