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流式细胞术对1例白血病病例的免疫表型分析

来源:中华现代临床医学杂志 作者:许艳丽杜庆华 2005-9-23
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摘要: 【摘要】 目的 探讨白血病免疫分型在临床诊断、治疗中的作用。方法 采用免疫荧光标记的方法,用流式细胞仪分析患者血细胞表面各种抗原标记物的表达情况。结果 形态学最初诊断为再生障碍性贫血(AA)的这例病例,经流式细胞术检测出有异常幼稚细胞群体的存在,两次的免疫表型分析显示异常细胞群体由最初的两群细胞克隆演变......


    【摘要】  目的  探讨白血病免疫分型在临床诊断、治疗中的作用。方法  采用免疫荧光标记的方法,用流式细胞仪分析患者血细胞表面各种抗原标记物的表达情况。结果  形态学最初诊断为再生障碍性贫血(AA)的这例病例,经流式细胞术检测出有异常幼稚细胞群体的存在,两次的免疫表型分析显示异常细胞群体由最初的两群细胞克隆演变为一个克隆群体,并带有B细胞系列的抗原标记,临床最终诊断为急性淋巴细胞白血病。目前采用针对B系的化疗方案,疗效较显著。结论  流式细胞术的免疫表型分析对临床的诊断、治疗方案具有重要的参考价值。

  【关键词】  免疫表型;流式细胞术

  【Abstract】  Objective   To evaluate the effect of flow cytometric immunophenotyping in clinic diagnosis and therapy.Methods  Treated with fluorescein-conjugate antibody, expression of antigen from bone marrow cells was analysed by flow cytometry. Results  This case originally diagnosed as AA by morphologic method was discovered to have lots of blasts by flow cytometry. Through two times immunophenotyping analysis, two abnormal colonies developed a colony with B cell antigen. The case was finally diagnosed as ALL and treated with chemotherapy and having a good curative effect. Conclusion Immunophenotyping of flow cytometry have important reference effect on clinic diagnosis and therapy.

  【Key words】  immunophenotyping;flow cytometry
   
  流式细胞术的免疫表型分析在血液系统疾病领域越来越受到人们的重视,流式所提供的信息对临床的诊疗具有重要的参考价值,现将此病例的免疫表型分析报告如下。

  1  临床资料

  1.1  一般资料  患者,男,57岁,面色苍白,呈贫血貌,形态学最初诊断为再生障碍性贫血(AA)。

  1.2  抗体  CD45PC5、CD3FITC/CD16+56PE、CD2FITC、CD4PE、CD5FITC、CD7PE、CD19FITC、CD10PE、CD20FITC、CD22PE、HLA-DR FITC、CD33PE、CD11bFITC、CD14FITC,为Coulter-Immunotech公司产品; CD34FITC、CD13PE、CD11cPE、CD15PE,为PHARMINGEN公司产品。

  1.3  仪器  FACS Vantage流式细胞仪(BD公司)。

  1.4  样品的制备  100μl全血加20μl抗体,室温避光孵育20min,加2ml溶血素,孵育10min,PBS洗二次,置4℃冰箱待检。

  1.5  流式分析  FACS Vantage流式细胞仪氩离子激光器,激发波长488nm。在CD45 PC5对侧向散射光(SSC)散点图中,用门(gate)圈出各个细胞群体,分析各个细胞群体的抗原标记物的表达量,收集测定细胞20000个。

  2  结果与讨论

  利用流式细胞仪进行免疫分型,最重要的一个标记物就是CD45,众所周知,CD45是人类共同的白细胞抗原标记,它的表达与否、强弱高低与细胞的成熟度有关,原始细胞和幼稚细胞在向成熟细胞分化过程中,CD45表达的荧光强度递增,因此利用流式细胞仪特有的SSC(侧向散射信号)和CD45两个参数就可在流式图谱中鉴别至少4个细胞群体:淋巴细胞群体、单核细胞群体、粒细胞群体、原始或幼稚细胞群体[1,2]。由于流式细胞仪可以任意圈出一个细胞群体进行细胞的免疫表型分析,因此用门(gate)圈出各个细胞群体,结合T系、B系、髓系各个抗原标记物,即可鉴别群体所在系列及其分化阶段。

  本文这例形态学最初诊断为AA的病例,曾进行两次免疫表型分析。第一次免疫分型时,就已发现有异常细胞群体的存在,见图1,两群异常细胞群体(Blast1和Blast2) 约占有核细胞群体60%,粒系群体明显增生受抑,只占有核细胞群体5%,其中较幼稚一群Blast2(CD45荧光强度较弱一群)HLA-DR阳性,CD19、CD10双阳性,CD20、CD22双阳性,另一群Blast1 群体除表达上述抗原外,CD33也为阳性,推测此时骨髓内幼稚群体过度增长,在进一步分化的过程中出现部分淋系与粒系标记双表达的细胞群体。相比之下成熟淋系群体(Lymph)在数量和抗原标记表达上表现基本正常,T系表达CD3、CD5、CD7、CD2、CD4,B系表达CD19、CD20、CD22,CD10不表达;而粒系群体(Myeloid)虽然所占比例较低,但也表达其正常的抗原标记CD13、CD15、CD11b、CD11c。

  图1  流式细胞术免疫表型分析Ⅰ略 

    相隔9天进行第二次免疫分型检测,各细胞群体分布有了变化,见图2,带有B系与髓系双抗原标记的幼稚群体消失,异常群体(Blast)仅见一群,为带有B系抗原标记, HLA-DR阳性,CD19、CD10双阳性、CD20、CD22双阳性, B细胞系显著异常[3];成熟淋系群体(Lymph)免疫表型基本正常,但粒系群体(Myeloid)免疫表型发现,尽管有抗原标记物CD13、CD15、CD11b、CD11c的正常表达,但HLA-DR表达过高(成熟粒系群体不应有此表达),成熟粒系分化有异常。可见,此病例由最初的两群细胞克隆演变为一个克隆群体,并表达显著的B细胞系列的标记,流式诊断为急性B淋巴细胞白血病,临床最终也支持这一结论,现采用倾向于B系的化疗方案,疗效较显著,达完全缓解。

  图2  流式细胞术免疫表型分析Ⅱ 略

    流式细胞术的免疫表型分析为临床提供了一个不同于FAB分类的亚型诊断,它为临床的诊断、治疗方案的选择甚至预后都提供了极为重要的信息参考,有关方面的资料正在积累之中,相信其在临床的应用将具有更广阔的前景。

  【参考文献】

  1  Michael J, K Lynn Guenther, Keith E, et al. Immunophenotyping of Acute Leukemia by Flow Cytometric Analysis. Am J Clin Pathol,1993,100:534-540.

  2  Denise A  Wells, George E  Sale, Howard M Shulman, et al. Multidimensional flow cytometry of marrow can differentiate leukemic from normal lymphoblasts and myeloblasts after chemotherapy and bone marrow transplantation. Am J clin Pathol,1998,110:84-94.

  3  左连富.流式细胞术与生物医学.沈阳:辽宁科学技术出版社,1996,20.

  作者单位: 510180 广东广州,广州市第一人民医院

  (编辑:乔  晓)

 


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