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新配方无菌试验用干燥培养基的研究

来源:INTERNET 作者:代淑艳 王殿军 赵婧 2005-7-25
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摘要: 【摘要】 目的 研制适合多种细菌生长的、高灵敏度的混合蛋白胨(植物蛋白胨加动物蛋白胨)硫乙醇酸盐干燥培养基。方法 按照2000版《中国生物制品规程》中灵敏度试验方法,检测新配方培养基的灵敏度。结果 新配方培养基营养齐全,各种成份搭配合理,并有营养互补性,适合多种细菌生长需要。结论 不论是菌丝体、菌落计数、......


   【摘要】 目的 研制适合多种细菌生长的、高灵敏度的混合蛋白胨(植物蛋白胨加动物蛋白胨)硫乙醇酸盐干燥培养基。方法 按照2000版《中国生物制品规程》中灵敏度试验方法,检测新配方培养基的灵敏度。结果 新配方培养基营养齐全,各种成份搭配合理,并有营养互补性,适合多种细菌生长需要。结论 不论是菌丝体、菌落计数、溶血环、色素生成都优于单纯蛋白胨培养基。

  关键词 混合蛋白胨 菌丝体 菌落计数 灵敏度

  经国务院批准,被评为科技界“三峡工程”的我国国家科技基础条件平台建设全面启动,微生物培养基作为其中之一,越来越受到国家乃至工业、农业、食品卫生业、医药行业的重视 [1]  ,同时也给我们提出越来越高的质量标准和严格要求。本文报道的是无菌试验用混合蛋白胨干燥培养基和混合蛋白胨营养琼脂培养基的研制。

  1 材料与方法

    1.1 质控菌株 短棒杆菌(7316株)、乙型溶血型链球菌(32210株)、生孢子梭状芽孢杆菌(64941株)、大肠杆菌(44113株)、绿脓杆菌(10110株),均由中国药品生物制品检定所提供。

  1.2 培养基

    1.2.1 混合蛋白胨硫乙醇酸盐干燥培养基/单纯胰酪胨硫乙醇酸盐干燥培养基/酪素胰酶消化液硫乙醇酸盐液体培养基的制备 称(量)取0.3%的大豆蛋白胨、0.5%的胰酪胨、0.5%的肉骨胨、/15%胰酪胨/TN2000mg/L的酪素胰酶消化液等成份,将其分别混合于适当容器内,加纯化水至1000ml,加热至完全溶解,滤过至透明,分装于中试管内9ml/支,115.6℃30min灭
菌备用。

    1.2.2 混合蛋白胨营养琼脂培养基/单纯肉骨胨营养琼脂培养基的制备 称(量)取0.3%的大豆蛋白胨、0.2%的胰酪胨、0.3%的肉骨胨/1%肉骨胨等成份,将其分别混合于适当容器内,加纯化水至1000ml,加热至完全溶解,滤过至透明,无菌环境下倒入平皿内15~20ml/皿备用。

    1.2.3 血营养琼脂斜面与血营养琼脂平皿的制备 将上述两种营养琼脂培养基冷却至56℃以下时迅速加入10%羊血,混均后立即倒入平皿内15~20ml/皿,分装大试管内的需要立即摆成斜面,自然冷却至凝备用。

    1.3 菌悬液的制备 按2000版《中国生物制品规程》中灵敏度要求,启开冻存的菌种7316株、32210株、64941株、44113株、10110株分别接种于适宜培养基内培养,取第3代或第4代适时的新鲜培养物,将其用0.1%蛋白胨水稀释,7316、64941稀释至10 -6  ~10 -8  ,32210稀释至10 -7  ~10 -9  ,44113、10110稀释至10 -6  备用。

    1.4 灵敏度、活菌落计数、色素生成及溶血环试验

    1.4.1 灵敏度测定 将制备的不同稀释度的7316、32210、64941株菌悬液分别取1ml接种于装有9ml/支的上述3种培养基的试管中,置适宜温度进行适时培养,同时取3支不接种菌悬液的同种培养基作阴性对照。

  1.4.2 活菌落计数、色素生成和溶血环的测定 分别将10110株、44113株和32210株菌悬液0.1ml接种于上述两种营养琼脂平皿内,用玻璃刮刀涂匀,置适宜温度进行适时培养。同时各取3个平皿不接种菌悬液作阴性对照。

  2 结果

    2.1 灵敏度测定 7316、32210、64941在3种培养基中均生长旺盛,灵敏度都在合格水平。其中7316菌株生长情况比较典型,在混合蛋白胨培养基远比单纯胰酪胨培养基和酪素胰酶消化液培养基生长旺盛,菌体密度大,见表1。

  表1 7316菌株在3种培养基中细菌生长管数(略)

     2.2 活菌计数比较 以44113株菌悬液接种于混合蛋白胨和单纯胰酪胨两种营养琼脂培养基中,菌落总数无明显差异。但在混合蛋白胨营养琼脂培养基上生长旺盛且速度快,菌落大且厚。相比之下,在单纯肉骨胨营养琼脂培养基上生长速度慢,菌落小且薄,从形态上看,表现营养不高。见图1、图2。图1 44113株在混合蛋白胨营养琼脂培养基上生长情况图2 44113株在单纯肉骨胨营养琼脂培养基上生长情况

    2.3 色素生成试验 将10110株菌悬液接种于上述两种营养琼脂培养基上,经适时适温培养后,在混合蛋白胨营养琼脂培养基平皿中色素生成非常明显,在菌体周围生成绿色圆环,色深而均匀,菌落浓密且大,生长旺盛。而单纯肉骨胨营养琼脂培养基色素生成不明显且不均匀,菌落小而稀疏,见图3、图4。

  图3 10110株在混合蛋白胨营养琼脂培养基上生长情况

    2.4 溶血环试验 将32210株菌悬液接种上述两种营养琼脂培养基,在混合蛋白胨营养琼脂培养基与单纯肉骨胨营养琼脂培养基平皿上,溶血环都非常典型,形成中空边缘整齐的圆孔,溶血环的差异不明显。

  图4 10110株在单纯胰酪胨营养琼脂培养基上生长情况

    3 讨论

  从上述几个试验不难看出,混合蛋白胨营养琼脂培养基无论是灵敏度、菌落计数、色素生成都优于单纯肉骨胨,尤其是菌丝体形态、大小及生长速度,都直接的反映出混合蛋白胨培养基营养度高,具有细菌生长代谢所需各种营养成分。不同微生物对营养要求不同,各种培养基成分与配比也并不完全相同。因此在配制培养基时,应考虑到各种营养成分既要齐全,又要合理搭配 [2]  。植物胨和动物胨各有优点,配制培养基常将两者按一定比例混合使用,以提高培养基的营养价值 [3]  。满足多种细菌生长繁殖的需要。

    随着科学的发展,国家科技部、国家食品药品监督管理局都非常重视微生物培养基的质量,而且要求越来越高,因此我们不能局限于现有的灵敏度合格标准,要立足于生产出营养度更高的微生物培养基,以满足生产和高科技的需要。本试验选用植物胨和动物胨混合作为主要的氮源,充分证实了混合蛋白胨营养齐全且具互补性。能满足多种细菌生长繁殖,为快速、准确检测微生物奠定了基础。

  参考文献

     1 高尚先.我国微生物培养基规范化、法制化管理现状(提纲).中国微生物学会培养基学组,第九次学术研讨会论文集,2003,10,1.

    2 武汉大学,复旦大学生物系微生物教研室.配制培养基的原则.微生物学.北京:高等教育出版社,1987,10,168-169.

    3 王钦升,周正明,高屹.培养基主要原材料的质量控制.实用培养基手册,北京:人民军医出版社,1999,3,51.

  (收稿日期:2004-08-28)

  作者单位:130062吉林省长春生物制品研究所

  (编辑秋 实)


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