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肾上腺髓质素对大鼠肝星状细胞凋亡的影响

来源:《齐鲁医学杂志》 作者:刘涛,邓存良,陈枫 2008-5-29
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摘要: 【摘要】 目的 初步探讨在肝纤维化形成过程中肾上腺髓质素(ADM)对肝星状细胞(HSC)凋亡的作用及其意义,以期为临床治疗和(或)预防肝纤维化提供理论依据。方法 采用不同浓度ADM对体外培养的HSC进行干预,应用流式细胞术对HSC的凋亡进行检测。结果 ADM 10-8 mol/L组、10-7 mol/L组、10-6 mol/L组HSC凋亡率分别......


【摘要】  目的 初步探讨在肝纤维化形成过程中肾上腺髓质素(ADM)对肝星状细胞(HSC)凋亡的作用及其意义,以期为临床治疗和(或)预防肝纤维化提供理论依据。方法 采用不同浓度ADM对体外培养的HSC进行干预,应用流式细胞术对HSC的凋亡进行检测。结果 ADM 10-8 mol/L组、10-7 mol/L组、10-6 mol/L组HSC凋亡率分别为(8.81±0.27)%、(7.99±0.36)%、(5.61±0.33)%,对照组为(10.82±0.38)%,ADM不同浓度组HSC凋亡率均低于对照组,差异有显著性(F=121.87,q=5.61~8.81,P<0.05)。结论 活化的大鼠HSC存在凋亡,ADM可降低活化大鼠HSC的凋亡率,且呈剂量依赖性。这为更加全面地研究HSC的凋亡提供了进一步的理论依据。

【关键词】  肾上腺髓质素;肝星状细胞;细胞凋亡;大鼠

  EFFECT OF ADRENOMEDULLIN ON APOPTOSIS OF HEPATIC STELLATE CELLS IN RAT

  LIU TAO, DENG CUNLIANG, CHEN FENG

  (Qingdao Infectious Disease Hospital, Qingdao 266033, China);

  [ABSTRACT] Objective To study the effect of adrenomedullin (ADM) on the apoptosis of activated hepatic stellate cells (HSC) of rats in vitro. Methods ADM in different concentrations were added to the activated HSC of rats in vitro, apoptosis of HSC was observed by flow cytometry.  Results The apoptosis rates of HSC were (8.81±0.27)%, (7.99±0.36)% and (5.61±0.33)%, in groups with ADM, respectively, and (10.82±0.38)% in group without ADM. The apoptosis rates of HSC in ADM groups were all significantly lower than that in control Group (F=121.87;q=5.61,7.99,8.81;P<0.05). ConclusionThe apoptosis of HSC exists in activated rats, ADM decreases the apoptosis of HSC on  dosedependent effect, which provides a theoretical basis for further study of this topic.
   
  [KEY WORDS] Adrenomedullin; Hepatic stellate cells; Apoptosis; Rats
   
  肾上腺髓质素(ADM)是日本学者KITAMURA等[1]1993年从嗜铬细胞瘤中分离出的一种活性多肽。自ADM被发现以来,人们对其进行了大量研究,但主要集中在其作为血管活性物质方面[2,3],而对其与细胞凋亡之间关系的研究较少。目前对于ADM与肝星状细胞(HSC)凋亡的研究还未见报道。本实验应用ADM对体外培养的大鼠HSC进行干预,通过流式细胞术对HSC的凋亡进行检测,初步探讨ADM在肝纤维化发病中的作用及其临床意义。

  1  材料和方法

  1.1  主要试剂和仪器
   
  肾上腺髓质素(150,Rat)购自美国Phoenix公司;膜联蛋白异硫氰酸荧光素细胞凋亡检测试剂盒(Annexin VFITC Kit)购自美国Beckman Coulter公司;小牛血清购自第三军医大学;流式细胞仪(EPICSXL型)为美国Beckman Coulter公司产品。

  1.2  实验细胞
   
  大鼠HSC株(HSCT6)购于上海中医药大学肝病研究所徐列明教授处,其表型为活化的肝星状细胞[4],由美国加利福尼亚旧金山总医院肝病中心实验室FRIEDMAN教授建立。

  1.3  实验分组
   
  取生长良好的HSC,经2.5 g/L胰酶消化后,以5×108/L的HSC细胞接种于24孔培养板,每孔1.5 mL,常规培养24 h后进行分组,即空白对照组, ADM浓度分别为10-8mol/L组、10-7mol/L组、10-6mol/L组。每组均设3个复孔。加入试剂后继续培养24 h。
 
  1.4  细胞凋亡检测
   
  应用流式细胞术,按膜联蛋白异硫氰酸荧光素凋亡检测试剂盒说明进行操作,分别检测各组细胞凋亡率。

  1.5  统计分析
   
  采用SPSS 10.0软件包分析数据,数据以±s表示,组间比较采用方差分析。

  2  结果
   
  空白对照组、ADM浓度 10-8mol/L组、ADM10-7 mol/L组、ADM浓度10-6mol/L组HSC的24 h凋亡率分别为(10.82±0.38)%、(8.81±0.27)%、(7.99±0.36)%、(5.61±0.33)%。各组与空白对照组细胞凋亡率比较差异均有显著意义(F=121.87,q=5.61~8.81,P<0.05)。ADM为10-7mol/L组与10-8mol/L组、10-6mol/L组细胞凋亡率比较,差异有显著意义(q=5.35、6.82,P<0.05)。

  3  讨论
   
  ADM是一种血管活性多肽,由52个氨基酸组成。在血管、心脏、肝脏、肾脏等器官广泛分布。国外学者研究表明,ADM对皮肤角化细胞、幼鼠胸腺细胞等具有抗凋亡作用[5,6]。本实验表明, ADM作用于大鼠HSC后,可剂量依赖性降低其凋亡率。ADM抗HSC凋亡机制不清,推测可能为ADM作用于HSC表面的降钙素受体样受体亚型,从而抑制细胞凋亡蛋白酶类(caspase3、8等),升高凋亡的启动调控蛋白bcl2水平和降低Bax水平等有关,具体机制还需进一步研究。
   
  不论ADM经过何种途径发挥抗HSC凋亡的作用,本研究表明ADM参与了活化的HSC的凋亡调控。进一步证明了ADM不仅可作为一种血管活性物质在心脏、肺脏、肾脏等组织器官中起到舒张血管、水盐平衡等作用,同时可参与体内某些细胞的凋亡过程。同时,也表明HSC凋亡过程中不仅受到Fas系统、P75、外周苯二氮类受体、细胞因子等的影响,还受到肽类,如ADM等其他物质等的影响。本文结果为更加全面的研究HSC的凋亡提供了进一步的理论依据。

【参考文献】
    [1]KITAMURA K, KANGAWA K, KAWAMOTO K, et al. Adrenomedullin:a novel hypotensive peptide isolated from human pheochromocytoma[J]. Biochem Biophys Res Commun, 1993,192:553560.

  [2]MARTIINEZ A, ARIAS J, BASSUK J A, et aL. Adrenomedullin is increased by pulsatile shear stress on the vascular endothelium via periodic acceleration (pGz) [J]. Peptides, 2008,29(1):7378.

  [3]邹宏丽,宋玉强. 急性缺血性心脑血管病病人血浆肾上腺髓质素与内皮素含量的测定[J]. 青岛大学医学院学报, 2003,39(4):436438.

  [4] 刘晓燕,吕志平,张续富,等. 保肝宁对HSC中NFkB影响的实验研究[J]. 陕西中医, 2004,25(6):569571.

  [5]ALBERTIN G, CARRARO G, PARNIGOTTO P P, et al. Human skin keratinocytes and fibroblasts express adrenomedullin and its receptors, and adrenomedullin enhances their growth in vitro by stimulating proliferation and inhibiting apoptosis[J]. Int J Mol Med, 2003,11(5):6359.
  
  [6]BELLONI A S, TREJTER M, MALENDOWICZ L K, et al. Adrenomedullin stimulates proliferation and inhibits apoptosis of immature rat thymocytes cultured in vitro[J]. Peptides, 2003,24(2):295300.


作者单位:青岛市传染病医院特需病房,山东 青岛 266033; 泸州医学院附属医院感染科


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