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酵母样真菌的培养鉴定及其耐药性分析

来源:《齐鲁医学杂志》 作者:赵琪,王学波,李金海,王晓俭,强新 2008-5-29
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摘要: 【摘要】 目的 对引起感染的酵母样真菌类型及其耐药特性进行研究,以指导临床合理用药。方法 从2005年1月~2007年12月我院临床送检的血液、中段尿、粪便、痰、胸腹水、伤口分泌物、穿刺液等标本中,采用常规方法培养和分离酵母样真菌,用法国生物梅里埃ATBEXPRESS系统对酵母样真菌进行鉴定,用ATBFUNGUS药敏试......


【摘要】  目的 对引起感染的酵母样真菌类型及其耐药特性进行研究,以指导临床合理用药。方法 从2005年1月~2007年12月我院临床送检的血液、中段尿、粪便、痰、胸腹水、伤口分泌物、穿刺液等标本中,采用常规方法培养和分离酵母样真菌,用法国生物梅里埃ATBEXPRESS系统对酵母样真菌进行鉴定,用ATBFUNGUS药敏试条进行药敏试验。结果 共分离到484株酵母样真菌,其中白色假丝酵母菌占42.4%,热带假丝酵母菌占27.9%,光滑假丝酵母菌占10.5%,清酒假丝酵母菌占7.0%,近平滑假丝酵母菌占2.3%,克柔假丝酵母菌占2.7%,中间假丝酵母菌占4.1%,其他酵母菌占3.1%。酵母样真菌对两性霉素B敏感,对5氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑存在不同程度的耐药。结论 临床需要加强真菌送检培养,合理使用抗真菌药物,尽量避免单纯经验用药,以减少耐药菌株的出现。

【关键词】  真菌;微生物敏感性试验;药物耐受性

  ISOLATION AND IDENTIFICATION OF YEASTLIKEFUNGI AND ANALYSIS OF THEIR DRUG RESISTANCE

  ZHAO QI, WANG XUEBO, LI JINHAI, et al

  (The Affiliated Yantai Yuhuangding Hospital of Qingdao University Medical College, Yantai 264000, China);

  [ABSTRACT] Objective To investigate the species of pathogenic yeastlikefungi and their drug resistance in order to guide rational clincal administration. Methods Samples including blood, urine, feces, sputum, pleural effusion,ascites, wound secretion and puncture fluid sent for fungus detection in this hospital, from Jan. 2005 to Dec. 2007, were cultured by routine methods, and identified with France Biomerieux TBexpress system. A drug sensitivity test was done by ATBfungus strip. Results A total of 484 strains were isolated, in which, candida albicans  (42.4%), C.tropicalis (27.9%), C.glabrata (10.5%), C.sake (7.0%), C.parapsilosis (2.3%), C.krudei (2.7%), C. intermedia (4.1%) and others (3.1%) were noted. All these were sensitive to amphotericin B, and expressed resistance to 5fluorocytosine, fluconazole and itraconazole in different extent. ConclusionYeastlikefungi are required to be sent for  classification and drug resistance study so as to rationally use antifungal agent to reduce the development of drugresistant strains.
   
  [KEY WORDS] Fungi; Microbial sensitivity test; Drug tolerance
   
  随着高效广谱抗生素、免疫抑制剂的大量使用及器官移植和外科介入性治疗手段的广泛开展,由酵母样真菌引起的感染日益增多。而抗真菌药物的大量使用,导致真菌产生了耐药性,给临床治疗用药带来很大的困难。本文对比分析了2005、2006及2007年3年间烟台毓璜顶医院临床标本酵母样真菌的菌种分布及耐药性,以期为临床的合理用药提供指导。
 
  1  材料和方法

  1.1  标本来源
   
  酵母样真菌从2005年1月~2007年12月3年间烟台毓璜顶医院临床送检的血液、中段尿、粪便、痰、胸腹水、伤口分泌物、穿刺液等标本中分离得到。

  1.2  方法

  1.2.1  真菌培养、分离及鉴定  将标本用常规方法在血平皿、沙保罗平皿上进行接种,然后置30 ℃温箱培养24~48 h,挑选可疑菌落镜检见到真菌孢子后,用法国梅里埃ATBEXPRESS系统进行菌株的鉴定。

  1.2.2  药敏试验  采用法国梅里埃ATBFUNGUS药敏试条进行药敏试验。在试条上标记被测酵母菌的编号,将分离待测的菌落用8.5 g/L氯化钠制成浊度为2麦氏单位的悬浊液,转移20 μL此悬浊液到ATB F2培养基中;再用ATB电子移液管在试条的每个杯状凹中加入135 μL ATB F2培养基,加上盖子,在有氧条件下、(35±2)℃环境中培养24 h。严格按照ATBFUNGUS试剂盒说明书中的药敏判读标准肉眼判读结果。

  1.2.3  质量控制  用ATCC 28188质控菌株进行质量控制。

  2  结果

  2.1  标本分离、培养及鉴定
   
  从临床标本中共分离出酵母样真菌484株,其中2005年145株,2006年159株,2007年180株,逐年增加。其菌种分布和构成比见表1。2007年白假丝酵母菌分离率比2005、2006年有所降低,而热带假丝酵母菌分离率却增加,3年间菌种分布差异有显著性(χ2=24.74,P<0.05)。值得注意的是,2005年其他酵母菌中包括葡萄牙假丝酵母菌1株,无名假丝酵母菌4株; 而2006年分离出葡萄牙假丝酵母菌1株,季也蒙假丝酵母菌1株,无名假丝酵母菌2株;2007年其他酵母菌中出现了季也蒙假丝酵母菌1株,都柏林假丝酵母菌1株,高里假丝酵母菌4株。2.2  药敏试验
   
  2005、2006、2007年度间酵母样真菌耐药性差别无统计学意义(χ2=2.26,P>0.05)。酵母样真菌对两性霉素B敏感,对 5氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑存在不同程度耐药, 不同抗真菌药物之间耐药性差异有统计学意义(χ2=57.55,P<0.05)。见表2。

  表1  2005~2007年酵母样真菌菌种分布(略)

  表2  2005~2007 年3年间酵母样真菌药敏试验结果(略)

  其中R表示耐药,I表示中介,S表示敏感。

  3  讨论
   
  本文结果显示, 酵母样真菌的检出株数在逐年增加。酵母样真菌是条件致病菌,而白假丝酵母菌是酵母样真菌病最多见的病原菌[1,2]。近年来,尤其是2005~2007年,酵母样真菌在艾滋病、白血病、肿瘤、白细胞减少症、接受骨髓或脏器移植者、烧伤及早产儿等中引起的感染明显增加。这与大量应用广谱抗生素、抗癌化疗、放疗、糖皮质激素药物及其他免疫抑制剂和大静脉插管等侵入性诊疗操作有关。广谱抗生素的大剂量应用,能杀灭或抑制人体正常菌群,导致菌群失调,真菌二重感染。应用抗癌化疗、放疗、糖皮质激素类药物及其他免疫抑制剂能破坏或抑制人体的免疫功能,大静脉插管等侵入性诊疗操作则破坏了人体的天然免疫屏障,均容易诱发真菌感染。因此,预防酵母样真菌的感染已经倍受临床医师的重视。
   
  本文结果还显示,2005~2007年酵母样真菌的感染菌种构成发生了变化。2005、2006年白假丝酵母菌占有明显优势, 热带假丝酵母菌次之,是导致医院内获得性酵母样真菌感染前两位的病原菌,与文献[3,4]结果相似。2007年白假丝酵母菌检出率比前两年降低,而热带白假丝酵母菌的检出率增加,上升为第一位,感染酵母样真菌菌种分布有多样化的趋势,这可能与不同标本中感染菌种的分布不同[5]、抗真菌治疗的干预、生态学变化和人员流动等因素有关。2007年还分离出等了都柏林假丝酵母菌和高里假丝酵母菌等罕见的菌株。随着检验技术的进步和研究的深入,新的条件致病菌还会不断地被发现。
   
  众所周知,耐药性是在大量使用抗真菌药物后,在外部环境的诱导下,酵母样真菌的某些基因突变所致。近年来真菌耐药现象日益严重,文献报道真菌耐药率逐年增加[6]。本文4种药物药敏试验结果表明,2005~2007年间酵母样真菌对4种药物耐药性未有大变化,也就是说3年间酵母样真菌的耐药率并没有增加。但4种药物间耐药性差异明显,酵母样真菌对两性霉素B敏感, 而对5氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑存在不同程度耐药。多烯类抗真菌药物两性霉素B仍然是治疗真菌感染疗效最好的药物之一,在本研究中未发现有耐药菌株的出现,可能与其有严重的副作用如肾毒性而使临床应用受限有关。本文484株酵母样真菌对5氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑耐药率比文献报道低[7]。其中,伊曲康唑的耐药率比其他两种药物的要高,可能与其安全性高、副作用少而我院临床使用较多有关。
   
  临床为预防和避免真菌感染,合理使用抗真菌药物迫在眉睫。这就要求临床医生加强对临床标本的真菌送检培养,并进行药物敏感试验,尽量避免单纯经验用药,以减少耐药菌株的出现。

【参考文献】
    [1]喻华,黄湘宁,刘华,等. 临床酵母样真菌的感染特点及耐药性研究[J]. 中华微生态学杂志, 2006,18(2):120123.

  [2]邓乃梅,马晓鸥. 医院内真菌感染81例分析[J]. 齐鲁医学杂志, 2006,2(6):518521.

  [3]毛彩萍,张毅敏. 693株酵母样真菌的分离鉴定与药敏结果分析[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2001,12(21):9394.

  [4]周贵民,谢灵. 国内酵母菌感染和实验室诊断的现状和建议[J]. 中华医学检验杂志, 1996,19(5):301303.

  [5]杨继勇,张军民,周贵民. 深部酵母菌感染的病原学特征及其药物敏感性[J]. 检验医学, 2004,19(6):546549.

  [6]李从荣,彭少华,李栋,等. 深部真菌医院感染的临床调查与耐药性现状研究[J]. 中华医院感染学杂志, 2002,1(10):785786.

  [7]刘小平,马骥,李建武,等. 应用浓度梯度法则的念珠菌对抗真菌药物的敏感性[J]. 中华检验医学杂志, 2004,27(8):536537.


作者单位:青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院检验中心,山东 烟台 264000;青岛大学医学院微生物学教研室


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