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开郁健脾法对脾虚大鼠血清胃泌素、尿D-木糖影响的实验研究

来源:中医儿科杂志 作者:呼延和,张君 2011-6-30
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摘要: 【摘要】 目的 观察具有开郁健脾功效中药复方对脾虚大鼠体质量、血清胃泌素、尿D-木糖排泄率的影响。方法 以破气苦降加饥饱失常的方法建立脾虚证大鼠模型,随机分组,实验组中药复方煎剂灌胃,以ELISA法测定大鼠血清胃泌素,间苯三酚法测定D-木糖排泄率。结果 (1)与模型组比较,中药复方低、中、高剂量组体质量明显增......


【摘要】  目的 观察具有开郁健脾功效中药复方对脾虚大鼠体质量、血清胃泌素、尿D-木糖排泄率的影响。方法 以破气苦降加饥饱失常的方法建立脾虚证大鼠模型,随机分组,实验组中药复方煎剂灌胃,以ELISA法测定大鼠血清胃泌素,间苯三酚法测定D-木糖排泄率。结果 (1)与模型组比较,中药复方低、中、高剂量组体质量明显增长(P<0.01)。(2)与模型组比较,中药复方低、高剂量组、中剂量组尿D-木糖排泄率显著增高(P<0.05、P<0.01)。结论 开郁健脾中药复方有促进胃肠吸收的作用。

【关键词】  小儿厌食;血清胃泌素;尿D-木糖排泄率;开郁健脾;中药复方

小儿厌食是指小儿较长时期见食不贪、食欲不振、厌恶进食的病症,是儿科门诊常见病之一,城市儿童发病率较高,各年龄儿童均可发病,尤以1~6岁小儿多见 [1]。笔者长期跟随导师出诊,导师擅长运用开郁健脾之法治疗小儿厌食,每获良效。为探讨开郁健脾法组成中药复方的疗效机理,参照曾益宏等人的方法建立大鼠脾虚模型[2],以开郁健脾中药复方为施加因素,探讨其疗效机理。

  1 材料与方法

  1.1 动物与分组

  选用SD大鼠40只[雌雄各半,(180±20)g,由辽宁中医药大学实验动物中心提供,实验动物使用许可证:SCXK(辽)2009-2005],将大鼠随机分为5组,分别为正常组,模型组,中药复方低、中、高剂量组,每组8只,分笼饲养,自由饮水。饲料采用标准颗粒饲料(由辽宁中医药大学动物实验室提供)。

  1.2 主要试剂和仪器

  大鼠胃泌素试剂盒(RD公司生产,批号09-04),D-木糖试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号20090722),紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司,T6新世纪),全自动酶标仪(奥地利安图公司,2010)。

  1.3 药物制备

  (1)造模药物制备。小承气汤: 大黄∶厚朴∶枳实=4∶5∶3。常规煎法,然后浓缩至500 %。(2)实验药物制备。中药复方:党参12 g、白术9 g、半夏6 g、鸡内金9 g、炒麦芽9 g、山楂9 g、厚朴7 g、郁金9 g。常规煎法,然后浓缩至低剂量浓度116.7 %、中剂量浓度350 %、高剂量浓度525 %,冷冻保存。

  1.4 造模方法

  采用破气苦降法加饥饱失常复制脾虚动物模型[3-4],本模型是继大黄致脾虚模型之后比较广泛的脾虚模型[3]。各组大鼠除了正常组外每日灌饲小承气汤50 g/kg,隔日半量进食,自由饮水,造模15 d结束,测量大鼠的体质量,以大鼠体质量下降10 %~15 %)为造模成功(与对照组比较)。

  1.5 给药方法

  正常对照组与模型组自由饮水,不限制饮食,分笼饲养。中药复方低剂量组、中剂量组按1 mL/100 g、每日1次灌胃,高剂量组按1 mL/100 g、每日2次灌胃,连续给药4周。

  1.6 血清胃泌素测定

  中药复方低、中、高剂量组在最后1次给药后禁食24 h,正常组与模型组禁食24 h,各组均不限制饮水,术前给予各组大鼠10 %水合氯醛腹腔注射1 mL/100 g,大鼠麻醉后仰卧手术台上,用手术剪剪开腹腔,找到腹主动脉,用注射器从腹主动脉采血2 mL,快速离心分离血清,按说明书由辽宁中医药大学免疫室测定。

  1.7 尿D-木糖排泄率测定

  采用间苯三酚法[6],最后1次给药后,各组大鼠禁食不禁水12 h,3 % D-木糖溶液灌胃,每只1 mL/100 g,然后收集5 h尿液(期间禁食不禁水),记录尿量。取尿液5 μL,测试前将尿液用蒸馏水9倍稀释至50 μL检测,加入间苯三酚试剂3 mL, 分别加入蒸馏水0.05 mL( 试剂空白管),收集未服D-木糖尿液(测定空白管)0.05 mL,1.33 mmol/L D-木糖标准应用液0.05 mL(标准管),测定血清0.05 mL(测定管),各管同时放入100 ℃沸水中煮沸4 min,取出立即放冰水中冷却,混匀后,554 nm波长,水调零比色,测各管吸收光度OD值。

  计算公式:尿木糖(mmol/L)=(测定管OD值-测定空白管OD值)/(标准管OD值-试剂空白管OD值)×标准管浓度(1.33 mmol/L)×标本测定前稀释倍数(10倍)。

  5 h尿D-木糖排泄率=尿木糖(mmol/L)×150×5 h尿量(L)×1/1000/大鼠灌D-木糖mL×3 %。

  1.8 统计方法

  采用统计软件SPSS11.5进行统计分析,数据以±s表示,大鼠体质量、血清胃泌素、尿D-木糖排泄率以单因素方差分析进行统计分析。

  2 结果

  2.1 大鼠造模前后体质量下降率

  模型组、中药复方低、中、高剂量组与正常组比较,差异有高度统计意义(P<0.01),体质量下降率>10 %,造模成功。见表1。

  2.2 模型组与实验组治疗前后体质量增长率比较

  中药复方低、中、高剂量组与模型组比较,差异有高度统计意义(P<0.01),治疗后实验组体质量明显增长。见表2。

  2.3 模型组与实验组造模前后体质量增长率比较

  中药复方低、中、高剂量组与模型组比较,差异有高度统计意义(P<0.01),实验组比模型组体质量增加更明显。见表3。表1 各组大鼠体质量下降率比较表2 模型组与实验组治疗前后体质量增长率比较表3 模型组与实验组造模前后体质量增长率比较

  2.4 大鼠尿D-木糖排泄率测定结果

  中药复方低、高剂量组与模型组比较,差异有统计意义(P<0.05);中剂量组与模型组比较,差异有高度统计意义(P<0.01)。中药复方能促进D-木糖的吸收。见表4。

  表4 大鼠尿D-木糖排泄率测定结果 (±s)项目正常组模型组低剂量组中剂量组高剂量组n88888排泄率(%)26.2±5.9* 16.5±5.127.5±5.6* 32.5±6.2**29.4±5.8* 注:与模型组比较*P<0.05,**P<0.01

  2.5 大鼠血清胃泌素测定结果

  中药复方低、中、高剂量组与模型组比较,差异无统计意义(P>0.05),中药复方对血清胃泌素无影响,见表5。

  表5 大鼠血清胃泌素测定结果 (±s,pg/mL)项目正常组模型组低剂量组中剂量组高剂量组n88888胃泌素30.23±0.8030.33±0.7229.9±1.0428.9±1.3729.5±0.593 讨论

  3.1 厌食与健脾开郁法

  小儿厌食是由于小儿脏腑娇嫩,脾常不足,若饮食不当,饥饱不匀,饥则伤胃,饱则伤脾,致使脾胃功能紊乱。小儿脏腑娇嫩,易虚易实。如施用寒凉攻伐过度,或误用温燥,或攻下太过,耗伤津液,损伤脾胃,致使脾胃升降失调,纳化失常而厌食。小儿乳食不知自节,饥饱无度,故有“乳贵有食,食贵有节,饮食自倍,脾胃乃伤”之说 。儿童在生长发育过程中受到过分的溺爱,有的父母过于娇爱孩子,滋生了任性、耍娇等不良习惯,餐时不进,饭后零食,干扰了脾胃的正常规律。导师张君认为,小儿厌食发病究其原因部分是由于所欲不遂,而致肝郁,肝气郁结,反侮脾土,脾虚小儿每每伴有肝郁,小儿厌食以肝郁脾虚为多,运用开郁健脾,每获良效,因此以开郁健脾之法立方。党参甘平,入脾肺,补气健脾;郁金辛苦寒,入心、肝胆,活血行气解郁。两者共同为君,开郁健脾,补而不滞。白术甘苦平,入脾胃,健脾益气,燥湿利水;鸡内金甘平,入脾胃、小肠、膀胱,运脾和胃,消食健脾;炒麦芽甘平,入脾胃、肝,消食疏肝;山楂酸甘温,入脾胃、肝,消食化积,行气散瘀。四者共同为臣,运脾和胃消食。半夏辛温,入肺、脾胃,降逆止呕,散结消痞为佐。厚朴辛、苦、温,入脾胃、大肠、肺,燥湿化痰,下气除满为使。全方开郁健脾,消食化积,使脾司运化,胃司受纳,脾胃调和,肝气得疏,脾胃调和,方能知饥纳食,食而得化。

  3.2 模型建立与选择

  查阅近几年小儿厌食动物模型,对此研究的比较少,主要是运用高脂、高蛋白饮食喂食幼鼠[7],造成小儿厌食的动物模型。本实验选择破气苦降加饥饱失常的方法建立脾虚证大鼠模型,该模型是继大黄所致脾虚模型之后比较广泛的模型,也是比较公认的模型。虽然它不如大黄所建立的脾虚模型常见,但是临床上小儿厌食出现泄泻的比较少,出现肝郁脾虚的比较多,与所选择动物模型比较接近。

  3.3 健脾开郁中药复方对体质量的影响

  小承气汤与隔日半量饮食相结合对大鼠进行造模,比较第1 d与第15 d的大鼠体质量变化,模型组与正常组比较体质量下降率大于10 %,模型组,中药复方低、中、高剂量组与正常组比较差异有高度统计意义(P<0.01),说明造模成功。经过开郁健脾中药复方治疗4周后,比较第43 d与第1 d大鼠体质量增长率,结果表明,中药复方低、中、高剂量组与模型组比较差异有高度统计意义(P<0.01)。说明经过具有开郁健脾作用的中药复方治疗后,大鼠体质量与造模前大鼠体质量比较明显增长,模型组增长缓慢,中药复方能促进大鼠体质量增长。尤其以最后1周治疗组大鼠体质量增长最快,治疗第1周治疗组大鼠体质量增加不明显,因此脾虚大鼠需要经过一段时间的治疗才能达到满意的效果,短时间疗效不令人满意。模型组与实验组造模前后体质量增长率比较,结果表明,中药复方低、中、高剂量组与模型组比较差异有高度统计意义(P<0.01),说明中药复方能够促进脾虚大鼠体质量增长,治疗脾虚大鼠。低、中、高剂量组组间比较P>0.05,说明中药复方各剂量组大鼠体质量增长无明显的差异。

  3.4 健脾开郁中药复方对大鼠尿D-木糖排泄率、血清胃泌素影响

  造模大鼠脾气虚弱,脾失健运,脾不能运化水谷精微,物质代谢障碍表现在糖代谢方面,则会出现D-木糖吸收低下。口服D-木糖后一定时间内血和尿中D-木糖含量基本上可反映小肠吸收功能状况[8]。D-木糖口服吸收易化扩散,需消耗能量,与细胞膜表面的Na+|K+|ATP酶有关。有研究显示[9],脾虚的时候Na+|K+|ATP酶活性降低,小肠黏膜具有吸收功能的绒毛寿命、长度变短,数量减少,从而导致D-木糖吸收降低。尿D-木糖排泄率作为脾虚证诊断及疗效评价的客观指标[10],本实验与这样的观点相符。结果表明,中药复方低、高剂量组大鼠与模型组大鼠比较差异有统计意义(P<0.05),中剂量组与模型组比较差异有高度统计意义(P<0.01),中药复方能够促进D-木糖吸收,提高尿D-木糖排泄率,促进小肠的吸收功能。治疗后,各治疗组与正常组比较尿D-木糖排泄率无明显差异(P>0.05),提示治疗后尿D-木糖排泄率已恢复正常水平。中药复方低、中、高剂量组之间组间比较差异也无统计意义(P>0.05),说明无明显的量效关系。

  血清胃泌素是胃肠道主要的激素之一[11],由G细胞分泌,以胃窦部最多,其次是胃底、十二指肠、空肠等处,促进胃黏膜和壁细胞的增长以及胃肠道的蠕动。结果显示,中药复方低、中、高剂量组大鼠与模型组大鼠比较差异无统计意义(P>0.05),说明中药复方对脾虚大鼠血清胃泌素影响很小,具有开郁健脾中药复方治疗脾虚不是通过血清胃泌素实现的。

【参考文献】
   [1]汪受传.中医儿科学[M].北京:人民卫生出版社,2004:668.

  [2]曾益宏,刘友章,徐升.益气健脾法对脾虚证模型大鼠血清胃泌素含量的影响[J]. 广州中医药大学学报,2008,25(3):239.

  [3]陈小野.大鼠长期造模的实验研究[J].中国中医基础学杂志,1995,2(2):37.

  [4]易崇勤,叶百宽,金敬善,等.四君子汤对脾虚大鼠胃黏膜细胞酶组织化学及血浆胃肠激素的影响[J].北京中医药大学学报,1997,20(6):30.

  [5]金敬善.脾虚证动物模型的实验研究进展[J].中国中西医结合脾胃杂志,1999,10(2):65.

  [6]薛丽莉,薛金,杜晨光. 益脾止泻汤对脾虚泄泻大鼠血清D-木糖含量及血浆胃动素的影响[J].中国中医急症,2009,18(6):951-952.

  [7]隆红艳,蒋雅萍.小儿厌食症动物模型的客观标准研究[J].成都中医药大学学报,2005,28(2):41.

  [8]余华,黄迪君,王再谟.灸法对脾虚大鼠血清D-木糖含量及红细胞免疫功能的影响[J].上海针灸杂志,1999,18(2):35.

  [9]李晓霞.脾气虚与Na+|K+|ATP酶活性观察[J].中国医学报,1996,11(2):83.

  [10]周建伟,张凡,肖鸣.药条灸对脾虚证患者血清胃泌素D-木糖排泄率及T细胞亚群的影响[J].中国针灸,1998,(1):15-16.

  [11]马建伟.脾虚证与胃肠激素关系研究概况[J].空军总医院学报,1994,10(2):98.


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