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紫草汤治疗过敏性紫癜疗效机制的实验研究

来源:《中医儿科杂志》 作者:张少卿 张君 2008-12-28
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摘要: 【摘要】 目的探讨紫草汤治疗过敏性紫癜的作用机制。方法通过小鼠网状内皮系统吞噬功能实验及被动皮肤过敏反应观察紫草汤对小鼠免疫功能的影响。 结果 (1)紫草汤低、中、高剂量组吞噬指数K和吞噬系数α明显低于生理盐水组,且呈量效关系。(2)紫草汤能使小鼠的胸腺指数降低,且高剂量组与生理盐水组比较有统计意......


【摘要】  目的探讨紫草汤治疗过敏性紫癜的作用机制。方法通过小鼠网状内皮系统吞噬功能实验及被动皮肤过敏反应观察紫草汤对小鼠免疫功能的影响。 结果 (1)紫草汤低、中、高剂量组吞噬指数K和吞噬系数α明显低于生理盐水组,且呈量效关系;(2)紫草汤能使小鼠的胸腺指数降低,且高剂量组与生理盐水组比较有统计意义(P<0.05);但脾脏指数各组间无统计意义;(3)紫草汤各给药组在抑制百分率上也高于生理盐水组,且呈量效关系,但无统计意义。结论紫草汤可能是一个具有抑制免疫功能的方剂,通过抑制免疫、抗过敏、抗变态反应来治疗过敏性紫癜。

【关键词】  紫草汤 过敏性紫癜 疗效机制 实验研究


    过敏性紫癜(HSP)是小儿常见的出血性疾病之一,以血液溢于皮肤、黏膜之下,出现淤点淤斑,压之不褪色为其临床特征,常伴鼻衄、齿衄,甚则呕血、便血、尿血。本病属于中医学“血证”范畴,中医古籍中所记载的“葡萄疫”“肌衄”“紫癜风”等病证,与本病有相似之处。HSP近几年发病率呈上升趋势,因感染等原因而易反复发作,但大多预后良好,因有45 %~65 %的患儿并发肾脏受累而影响预后。其确切的发病原因及发病机制虽未完全明确,但越来越多的证据显示HSP是一种由免疫复合物介导的自身变态反应。本实验旨在通过小鼠网状内皮系统吞噬功能实验及被动皮肤过敏反应,探讨紫草汤治疗过敏性紫癜的作用机制。

    1  实验材料

    1.1  实验动物

    昆明种小白鼠,体质量18~22 g,雌雄兼用,由中国医科大学实验动物中心提供,许可证号SCXK(辽)2003-0009。

    1.2  紫草汤制备

    紫草15 g、黄芪15 g、白鲜皮10 g、旱莲草10 g、牡丹皮10 g,用清水浸泡草药30 min,煎煮2次后混合药液,浓缩至24 mL,置冰箱备用。

    1.3  抗天花粉血清制备

    健康小鼠10只,于两后足掌部分别注射质量浓度为1.2 mg/mL天花粉蛋白注射液0.1 mL,同时皮下注射氢氧化铝凝胶0.1 mL/只。12 d后断头取血,低速离心10 min(3000 r/min),混合抗天花粉血清置冰箱冷冻保存备用。

    1.4  试剂与药品

    印度墨汁(国药集团化学试剂沈阳有限公司生产,用1 %明胶液稀释4倍供用)、天花粉蛋白注射液(上海市金山制药有限公司生产)、氢氧化铝凝胶(天津市博迪化工有限公司生产)、依文思蓝(国药集团化学试剂沈阳有限公司生产)、丙酮、1 %明胶液、0.1 %Na2CO3。

    1.5  实验仪器

    UV-1100分光光度计(上海美谱达仪器有限公司生产)、80-2型离心沉淀机(上海手术器械厂提供)、TA100S型电子分析天平(沈阳中特天平仪器有限公司生产)、微量加样器。

    2  实验方法

    2.1  紫草汤对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响

    80只小鼠随机分为4组,即生理盐水组、紫草汤低剂量组、紫草汤中剂量组、紫草汤高剂量组,每组20只。生理盐水组按0.02 mL/g灌服生理盐水,2次/d;紫草汤低、中、高剂量组分别按10 g/(kg·d)、30 g/(kg·d)、100 g/(kg·d)剂量给药,配制成质量浓度为25 %、75 %、250 %的药液,以0.02 mL/g灌服,2次/d。每组连续灌服7 d。第8 d早晨给药后1 h,小鼠尾静脉注入稀释印度墨汁0.01 mL/g,2 min及10 min后,用特制的取血吸管(加样器)从小鼠眼眶后静脉丛取血0.025 mL,分别加入0.1 % Na2CO3溶液2 mL中。以生理盐水组小鼠血0.025 mL溶于2 mL的0.1 % Na2CO3溶液校零,于分光光度计675 nm处比色。称量小鼠体质量,处死后摘除胸腺、脾脏,分别称重,计算吞噬指数K、吞噬系数α及胸腺和脾脏指数。

    2.2  紫草汤对小鼠被动皮肤过敏反应的影响

    64只小鼠随机分为4组,即生理盐水组、紫草汤低剂量组、紫草汤中剂量组、紫草汤高剂量组,每组16只。给药剂量与方法同2.1。给药第5 d,每只小鼠腹壁两处皮下一次性注射抗天花粉血清稀释液。(抗天花粉血清∶生理盐水=1∶5,每处0.03 mL)。致敏后48 h,各组小鼠按20 mL/kg尾静脉注射天花粉—伊文思蓝蛋白注射液,30 min后脱颈处死小鼠,将腹部皮肤蓝斑皮片剪下,剪碎,加入丙酮—生理盐水(7∶3)混合溶液5 mL中,浸泡,次日离心(3000 r/min),以丙酮—生理盐水为参照,在比色测定仪610 nm处测光密度,取两组的光密度平均值,计算出抑制百分率。

    2.3  统计学处理

    所有数据采用(±s)表示,组间比较采用t检验

    3  结果

    3.1  紫草汤对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响

    3.1.1  紫草汤对各组吞噬指数K及吞噬系数α的影响

    结果见表1。实验结果显示:紫草汤低、中、高剂量组的吞噬指数K和吞噬系数α明显低于生理盐水组,且随剂量增加有量效关系,但无统计意义。

    3.1.2  紫草汤对各组胸腺指数和脾脏指数的影响

    结果见表2。实验结果显示:紫草汤低、中、高剂量能使小鼠的胸腺指数降低,并且有量效关系,高剂量组与生理盐水组比较有统计意义(P<0.05);紫草汤低、中、高剂量组的脾脏指数与生理盐水组比较无统计意义(P>0.05)。 表1紫草汤对各组吞噬指数K及吞噬系数α的影响   注:因取材不成功、实验过程中动物死亡原因,表中的动物数均为有效动物数,下同。表2紫草汤对各组胸腺指数和脾脏指数的影响  注:与生理盐水组比较*P<0.05

    3.2紫草汤对小鼠被动皮肤过敏反应的影响

    结果见表3。实验结果显示:从抑制百分率上分析,各个剂量组同生理盐水组比较,紫草汤高剂量组作用最强,其次为紫草汤中剂量组,各组间有量效关系,但无统计意义(P>0.05)。表3紫草汤对小鼠被动皮肤过敏反应实验的影响

    4  讨论

    紫草汤是导师张君教授结合自己20多年治疗过敏性紫癜的临床经验总结出的常用药,由紫草、黄芪、白鲜皮、旱莲草、牡丹皮5味中药组成。综观全方,主要功效为清热、凉血、活血、止血。方中紫草性味甘、苦、寒,归肝、心经,具有清热解毒、凉血活血、透疹的功效,《本草纲目》言其“治斑疹,痘毒,凉血活血,利大肠”。黄芪性味甘、微温,归脾、肺经,具有补气升阳、益气固表、托疮生肌、利水消肿的功效,《本草求真》言其“入肺补气,入表实卫,为补气诸药之最,是以有耆之称”。白鲜皮性味苦、寒,归脾、胃经,清热燥湿、祛风解毒。旱莲草性味甘、酸、凉,归肝、肾经,滋养肝肾、凉血止血、清热解毒,《本草正义》言其“为凉血止血之品,又消热病痈肿”。牡丹皮性味苦、辛、微寒,入心肝经血分,清热凉血、活血化瘀,清营分、血分之热,《本草汇言》言其“气香,香可以调气而行血;其味苦,苦可以下气而止血;其性凉,凉可以和血而生血;其味又辛,辛可以推陈血而致新血也”。

    现代免疫药理研究显示,紫草有抗炎作用[1],口服或腹腔注射或局部运用紫草的水或乙醚或乙醇提取物(主要含紫草素)、紫草素、乙酰紫草素和β-二甲基丙烯酰紫草素等,均能抑制毛细血管的通透性,对迟发型超敏反应有抑制作用。黄芪既有抗炎、抗细菌、抗病毒、抗血小板聚集、增强体液免疫功能,亦能抑制总补体活性,溶解免疫复合物,降低循环免疫复合物水平并减少其沉积的作用。白鲜皮水提物对半抗原所致的接触性皮炎有明显的抑制作用,还能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳壳及鸡蛋清所致的小鼠足趾炎症反应。旱莲草煎剂喂饲小鼠,能增加二硝基氯苯所致的小鼠耳廓肿胀和绵羊红细胞所致的迟发型超敏反应[2]。对牡丹皮的免疫药理研究显示,丹皮酚及牡丹皮水煎剂对兔抗血清诱发大鼠的皮肤过敏反应,羊红细胞、牛血清白蛋白诱导的迟发型超敏反应均有抑制作用[3]。

    通过本次实验,发现紫草汤可以抑制正常小鼠网状内皮系统的吞噬功能,并且抑制正常小鼠的免疫器官(胸腺)的发育,对小鼠的被动皮肤过敏反应有一定的抑制作用。说明紫草汤可能是一个具有免疫抑制作用的方剂。

    过敏性紫癜是一种出血性的自身变态反应,目前多数学者认为过敏性紫癜属速发型变态反应(I型变态反应)和抗原—抗体复合物反应(Ⅲ型变态反应)。介于实验得出的结论分析,紫草汤可能能改善患者机体免疫功能的紊乱,抗过敏、抗变态反应,改善体液免疫亢进,减少抗体产生和免疫复合物的形成,减轻组织、器官的损伤,使相应的临床症状得到缓解,从而治疗过敏性紫癜。对于过敏性紫癜的治疗,西医主要应用一些免疫抑制剂、肾上腺糖皮质激素等,但这类药物长期使用会产生诸多副作用,而且停用后易反复发病。紫草汤的这种抑制作用是否等同于西医的免疫抑制剂及糖皮质激素,还有待于进一步的研究。

【参考文献】
  [1]骆和生.中药与免疫[M].广州:广东科技出版社,1987:90.

[2]胡慧娟,杭秉茜,刘勇,等.旱莲草对免疫系统的影响[J].中国药科大学学报,1992,23(1):55.

[3]巫冠中.丹皮酚的抗炎作用及其机制[J].中国药科大学学报,1990,21(2):103.


作者单位:1.辽宁中医药大学,辽宁沈阳110032;2.辽宁中医药大学附属医院,辽宁沈阳110032


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