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微柱凝胶法在检测孕妇IgG抗体中的应用研究

来源:成都医学院学报 作者:刘智勇,董玉红,何凤娥作者单位:(攀枝花市中心医院输 2013-2-27
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摘要: 【摘要】 目的 比较分析抗人球蛋白微柱凝胶法与传统试管法测定O型孕妇血清中IgG抗A(B)效价的差异。方法 采用微柱凝胶抗人球方法和经典抗人球蛋白试验平行检测364例与丈夫ABO血型不合的O型孕妇血清IgG抗A(B)水平,并作方法学评价。结果 微柱凝胶IgG抗A(B)效价几何均数明显高于经典抗人球蛋白法,差异有显著性(t=18。......


【摘要】  目的 比较分析抗人球蛋白微柱凝胶法与传统试管法测定O型孕妇血清中IgG抗A(B)效价的差异。方法 采用微柱凝胶抗人球方法和经典抗人球蛋白试验平行检测364例与丈夫ABO血型不合的O型孕妇血清IgG抗A(B)水平,并作方法学评价。结果 微柱凝胶IgG抗A(B)效价几何均数明显高于经典抗人球蛋白法,差异有显著性(t=18.15,t=15.81;P<0.001)。 微柱凝胶法阳性率明显高于经典法(χ2=21.5688,χ2=13.7898;P<0.01)。微柱凝胶法和经典抗人球蛋白法高度相关,相关系数r分别为0.8485、0.8499.结论 微柱凝胶法的灵敏度明显高于经典法,需重新设定临床意义决定值。

【关键词】  IgG抗体;微柱凝胶法;经典抗人球蛋白法;孕妇

 【Abstract】 Objective To compare the gel microcolumn assay and the conventional tube test for IgG antiA(B) titration .Methods A total of 364 blood samples of O group pregnant women with non O group husbands were detected simultaneously by the conventional tube test and the gel microcolumn assay. Results The geometric mean of antiA(B) IgG titers with the gel microcolumn assay was significantly higher than that of conventional one. The differences were significant (t=18.15,t=15.81; P<0.001). The positive rate of antiA(B) IgG titers with the gel microcolumn was significantly higher than that of conventional one (χ2=21.5688,χ2=13.7898; P<0.001). The correlation coefficient was 0.8485 and 0.8499,respectively. Conclusion The gel microcolumn assay is more sensitive than classic method,and it is necessary to rebuild reference values of clinical significance.

  【Key words】 IgG antibody; Gel microcolumn assay; Coombs’ test; Pregnant women

  新生儿溶血病(HDN)是由母体内存在的与其胎儿红细胞不合的IgG血型抗体而引起的同种被动免疫疾病[1]。准确测定孕妇血清中IgG抗A(B)的效价是预测和判断新生儿溶血病发生的重要依据。近年来,微柱凝胶法因快速、简便、结果直观等优点得到了广泛应用,但其在检测灵敏度等方面与传统方法的差异尚有待评价。我们运用微柱凝胶法(卡式法)测定孕妇IgG抗A(B)效价的结果,与经典抗球蛋白法比较,现将结果报道如下。

  1 资料与方法

  1.1 研究对象

  2008年1月至2009年3月期间,在我院行产前检查O型Rh(D)阳性孕妇324名,丈夫均为非O型Rh(D)阳性,孕20周以上,年龄为22至34岁。其中妇夫血型为OA 166例,OB 158例。

  1.2 试剂与仪器

  微柱凝胶检测卡(长春博迅)、抗人球蛋白试剂、标准红细胞、0.2 mol/L巯基乙醇(2ME)、37℃水浴箱、血型血清学多用离心机和免疫微柱孵育器(长春博迅)。

  1.3 方法

  标本预处理:取孕妇3 ml外周静脉血EDTA抗凝,分离血清后,取400 μl血清标本和400 μl 0.2 mol/L 2ME,混匀后封口置37℃水浴30 min.取8只干净试管,做好标记;第1管中加入处理后的血清100 μl和300 μl生理盐水,混匀(为1∶8稀释);第2~8管中依次加200 μl的生理盐水和前一管中的血清200 μl,做倍比稀释。稀释度分别为1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024.

  1.3.1 微柱凝胶检测

  取试剂卡在孔内各加入50 μl与孕妇丈夫同型的0.8%标准红细胞悬液,再依次加入上述处理的各稀释度的血清50 μl,置专用孵育器内37℃孵育15 min,再放入专用离心机内离心5 min(900 r/min 2 min,1500 r/min 3 min),结果以出现1+凝集的最高稀释度的倒数为抗体效价。

  1.3.2 经典抗人球蛋白法

  取上述处理的1∶8~1∶1024 8个稀释度血清标本参照文献[2]进行实验。结果以显微镜下观察到“+”凝集的最高稀释度为抗体效价。

  1.4 统计学方法

  采用Excel统计软件进行数据处理分析,抗体效价先做对数转换,微柱凝胶与经典抗人球蛋白法效价比较采用配对t检验,并进行直线相关性分析,阳性检出率比较采用四格表配对资料χ2检验验证。

  2 结果

  2.1 IgG抗

  A效价几何均数微柱凝胶为198.36,经典抗人球蛋白法为104.82;IgG抗B效价几何均数:微柱凝胶为123.75、经典抗人球蛋白法为75.82,两组前者均明显高于后者,差异有显著性意义(t=18.15,t=15.81;P<0.001)。

  2.2 按照经典法检测结果,IgG抗

  A(B)效价≤32为阴性,≥64为阳性[3],则经典法和微柱凝胶法检测IgG抗A效价的阳性率为50.0%和74.7%;IgG抗B效价的阳性率为40.51%和61.4%.两组的微柱凝胶法阳性率明显高于经典法(χ2=21.5688,χ2=13.7898;P<0.001),见表1、表2.

  2.3 经典法和微柱凝胶法检测IgG抗

  A效价结果高度相关,r=0.8485,回归方程式为Y=0.41737+0.9353X.以经典法IgG抗A效价64为具有临床意义决定值,根据回归方程计算,微柱凝胶法具有临床意义决定值的效价为128(127.8792)。

  2.4 经典法和微柱凝胶法检测IgG抗

  B效价结果高度相关,r=0.8499,回归方程式为Y=0.3304+0.9683X.以经典法IgG抗B效价64为具有临床意义决定值,根据回归方程计算,微柱凝胶法具有临床意义决定值的效价为120(120.0881)。表1 IgG抗A效价分布表2 IgG抗B效价分布

  3 讨论

  ABO系统引起的HDN是由于母亲体内存在着与胎儿不相配合的IgG性质血型抗体引起的同种被动免疫性疾病。该抗体能通过胎盘进入胎儿体内,导致胎儿红细胞破坏产生溶血。同时可能干扰器官发生而导致胚胎停止发育、流产或畸形,对新生儿最大危害是引起胆红素脑病(核黄疸),可造成婴儿早期死亡或使存活者留下不可逆的神经系统后遗症[4]。因此,选择一种灵敏、准确、相对稳定且重复性好的IgG抗体效价测定方法很有必要。

  微柱凝胶技术是红细胞抗原与抗体在凝胶介质中的凝集反应,结果清晰明了,无须显微镜。方法简单、可标准化、自动化、重复性好,所需标本量少,无须洗涤,结果稳定。本研究中,微柱凝胶法IgG抗A(B)效价几何均数均明显高于经典抗人球蛋白法,差异有显著性意义(P<0.001)。微柱凝胶法阳性率明显高于经典法,差异有显著性意义(P<0.001)。这表明,对于孕妇IgG抗A(B)效价的检测,微柱凝胶法的灵敏度明显高于经典抗人球蛋白法。

  HDN的发病率随母体内抗A(B)或抗Rh(D)水平的升高而递增[5],因此测定孕妇IgG抗A(B)效价对预防新生儿溶血病有重要意义,现较公认的观点是夫妇血型不合的孕妇血清抗体效价与新生儿HDN发生率呈正相关[6]。当母亲血清中IgG抗A(B)效价≥64时,婴儿有受害的机会,当效价≥128时,新生儿很可能受害[7]。因此应用科学有效的方法检测孕产妇血清IgG抗A(B)效价是预防新生儿溶血病的重要措施。目前,临床上普遍以经典的抗球蛋白法结果IgG抗A(B)效价≥64作为临床意义决定值,即ABO系统IgG抗体效价≥64时,应随访观察并监测其效价升高的水平或采取干预措施。但从微柱凝胶法测定的效价看,由于其灵敏度高,若以经典法的诊断标准将会导致对病情的过高评估。因此以微柱凝胶技术检测IgG抗A、抗B效价时,应重新界定其具有临床意义的决定值,避免造成误诊。我们的结果显示:微柱凝胶法和经典抗人球蛋白法高度相关,相关系数分别为r=0.8485和r=0.8499.根据本研究回归方程计算,以经典法测得效价64作为有临床意义的决定值,微柱凝胶法测IgG抗A和抗B效价的决定值分别为128、120.

  综上所述,微柱凝胶法检测IgG抗A和抗B效价,其检测灵敏度显著高于平行进行的经典抗人球蛋白法,二者存在高度的相关性。为更好地辅助临床在HDN的产前预测与诊断上形成最接近实际情况的判断,需重新设定临床意义决定值。

【参考文献】
   [1] 张钦辉.临床输血学[M].上海:上海科学技术出版社,2000:97100.

  [2] 叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M].第2版.南京:东南大学出版社,1997:101.

  [3] 高峰.输血与输血技术[M].第1版.北京:人民卫生出版社,2004:98106.

  [4] 徐丹,李江,蒋莉.微柱凝胶法检测孕妇IgG抗体效价的意义[J].中国实验诊断学,2006,10(6):681682.

  [5] Bielsa O,Lloreta J,Gelabert Mas A.Cysti crenal cell carcinoma:pathological features,survival and implications for treatment[J].Br J Urol,1998,82:1620.

  [6] Achargui S,Benchemsi N.Etude quantitative des sousclasses d’IgG antiD par Elisa au cours de la maladie hemolytique neonatale.[A quantitative determination of IgG antiD subclasses by Elisa in hemolytic disease of the newborn][J].Transfus Clin Biol,2003,10(4):284291.

  [7] Aubert S,Zini L,Delomez J,et al.Cystic renal cell carcinoma in adults.Is properative recognition of multilocular cystic renal cell carcinoma possible[J].J Urol,2005,174:21152119.


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