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HPLC法测定维他参颗粒中维生素B2的含量

来源:《中华现代中西医杂志》 作者:卜文奎,杜 娟,段广珍,张晓宇,张 男 2008-6-30
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摘要: Vitamin B2 维他参颗粒由人参、山楂及多种维生素组成,维生素B2为该方的有效成分之一,维生素B2是人体中许多重要辅酶的组分。测定维生素B2 含量的方法有荧光分光光度法等,笔者采用HPLC法测定其含量,经方法学考察,其精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求,为维他参颗粒的质量控制提供了实验依据,从而有效......


【关键词】  HPLC;Weitashen Granules;Vitamin B2


    维他参颗粒由人参、山楂及多种维生素组成,维生素B2为该方的有效成分之一,维生素B2是人体中许多重要辅酶的组分。测定维生素B2 含量的方法有荧光分光光度法等,笔者采用HPLC法测定其含量,经方法学考察,其精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求,为维他参颗粒的质量控制提供了实验依据,从而有效控制其质量。

    1  仪器与试药维生素B2对照品(100369-200301,供含量测定用)购于中国药品生物制品检定所,纯度大于98.5%。维他参颗粒自制,Agilent 1100 series高效液相色谱仪(G1311A Quat Pump,G1314A VWD,G1379A DEGASSER);Agilent 1100工作站;CP225D(sartorius)十万分之一天平;AS3120A超声波清洗器;U-3010紫外可见双光束扫描分光光度计。乙腈为色谱纯,水为重蒸馏水;其他试剂均为分析纯。

    2  实验条件

    2.1  色谱条件的选择  色谱柱:Agilent XDB-C18(5 μm,150 mm×4.6 mm)流动相:乙腈-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸(12∶87∶0.25∶0.75)。检测波长:246 nm;柱温:30 ℃;流量:1 ml/min;理论塔板数按维生素B2对照品峰计算不少于5000。

    2.2  测定波长的选择  取少量维生素B2的标准品溶液,稀释,置U-3010紫外可见双光束扫描分光光度计下于200~400 nm波长下扫描,在225 nm、267 nm处均有最大吸收,选择267 nm作为HPLC的测定波长。

    2.3  流动相的选择  经参阅文献[1~4],分别对甲醇-0.05 mol/L,KH2PO4磷酸溶液(14∶86,pH 3.0)、甲醇-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸(107∶500∶0.12∶4.6)、乙腈-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸(12∶87∶0.25∶0.75)、乙腈-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸(5∶93.92∶0.21∶0.87)四种流动相系统进行筛选,结果维生素B2在乙腈-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸(12∶87∶0.25∶0.75)流动相条件下达到基线分离,峰形对称,维生素B2的阴性对照液无干扰,保留时间适宜。故确定维生素B2流动相为乙腈-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸(12∶87∶0.25∶0.75)。色谱图见图1、2。

    2.4  对照品溶液制备  精密称取维生素B2对照品15.76 mg,置100 ml量瓶中,以乙腈-水-冰醋酸(5∶94∶1)的混合溶液温热溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取5 ml,置100 ml量瓶中,以乙腈-水-冰醋酸(5∶94∶1)的混合溶液稀释至刻度,摇匀,制成每1 ml含维生素B2 0.00788 mg的溶液。

    2.5  线性关系考察  精密吸取维生素B2对照品溶液3、6、9、12、15、18 μl进样,按上述色谱条件测定峰面积,以对照品进样量x为横坐标、峰面积值y为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为:y=4038.2x-4.9208,r=0.9995,结果表明,维生素B2进样量在0.0473~0.2837 μg范围内线性关系良好。

    2.6  供试品溶液制备  取本品装量差异项下的内容物,研细,取0.3 g,精密称定,置50 ml具塞锥形瓶中,精密加入乙腈-水-冰醋酸(5∶94∶1)的混合溶液25 ml,密塞,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用乙腈-水-冰醋酸(5∶94∶1)的混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

    3  方法学考察

    3.1  精密度试验  精密吸取供试品溶液10 μl,重复进样5次,测得峰面积,维生素B2积分值的相对标准偏差0.8%,表明仪器精密度良好。

    3.2  稳定性试验  精密吸取供试品溶液10 μl,在0、2、4、6、8 h各进样10 μl,测其峰面积,维生素B2积分值的相对标准偏差为3.0%,说明样品在8 h内稳定。

    3.3  重复性试验  精密称取供试品5份,每份约0.3 g,照供试品溶液制备方法制备,每次进样 10 μl,测维生素B2含量,结果维生素B2含量相对标准偏差为2.3%,表明方法重复性较好。

    3.4  加样回收率  取已知维生素B2含量的样品(0.60 mg/g),研细,取5份样品,每份0.15 g,精密称定,置50 ml具塞锥形瓶中,精密加入维生素B2对照品溶液5 ml(浓度为0.0169 mg/ml),再精密加入乙腈-水-冰醋酸(5∶94∶1)的混合溶液20 ml,按供试品溶液制备方法操作并进行含量测定,求得平均回收率分别为97.9%;相对标准偏差RSD为1.7%,见表1。 表1  维生素B2加样回收率考察结果(略)注:平均回收率为97.9%,RSD为1.7%

    4  样品的测定分别取10批样品,按上述色谱条件进行测定,结果见表2。表2  10批样品中维生素B2含量测定结果(略)

    5  小结维生素B2对光极为敏感,用棕色瓶避光处理样品,维生素B2在水中不溶而溶于稀碱溶液,但在稀碱溶液中不稳定,参考文献,笔者选择乙腈-水-冰醋酸(5∶94∶1)的混合溶液作为维他参颗粒样品及对照品的溶剂。本法简便准确,可作为维他参颗粒的质量控制方法。在水相中加入离子对试剂己烷磺酸钠和扫尾剂三乙胺之后,峰形得到改善,柱效较高,分离度好,检测限低,专属性强,可用作检测维他参颗粒及同类制品中维生素B2含量变化。

【参考文献】
  1 李艳.小儿康糖浆中的四种维生素的含量测定.中国药品标准,2004,5(6):26-28.

2 申烨华,张萍.高效液相色谱法同时测定扁桃仁中的水溶性维生素C,B1,B2和B6.色谱,2005,23(5):538-541.

3 刘海静,李淑丽,郭欢迎.HPLC法测定含有多种维生素类制剂中四种维生素含量.中国药品标准,2004,5(3):54-56.

4 吴晓宁,黄春洪,掌效舟,等.HPLC测定易善复注射液中维生素B2的含量.华北医学杂志,2007,22(2):222-223.


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