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酶法测定CO2CP中一点终点法和二点终点法的比较

来源:中华实用医药杂志 作者:杨 梅 2005-9-22
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摘要: 【摘要】目的 比较在单试剂酶法中一点终点法和二点终点法测定二氧化碳结合力(CO2CP)的优劣。方法 选择患者标本15例(含脂血标本、溶血标本、黄疸标本)用2种不同方法检测,比较检测有干扰标本时2种方法的优劣,再选择用已知浓度标准血清用2种方法检测10次,比较检测无干扰标本时2种方法的优劣。结果 检测有干扰标本时,......


  【摘要

  目的  比较在单试剂酶法中一点终点法和二点终点法测定二氧化碳结合力(CO2CP)的优劣。

  方法  选择患者标本15例(含脂血标本、溶血标本、黄疸标本)用2种不同方法检测,比较检测有干扰标本时2种方法的优劣,再选择用已知浓度标准血清用2种方法检测10次,比较检测无干扰标本时2种方法的优劣。

  结果  检测有干扰标本时,二点终点法明显优于一点终点法;检测无干扰标本时,一点终点法较好,但2种方法测得结果差异无显著性(P>0.05)。

  结论  在单试剂酶法条件下使用二点终点法能消除部分样品空白,检测结果更灵敏、准确。

  【关键词】  二氧化碳结合力;单试剂酶法;一点终点法;二点终点法

  我科新近采用单试剂酶法测定二氧化碳结合力(CO2CP),由于单试剂酶法无法自动消除样品空白,而样本质量(溶血、脂血、黄疸血清、血清中含有药物等干扰物)对CO2CP的测定有很大影响。因此,选择一个良好的定标测定方法尤为重要。本文尝试用一点终点法和二点终点法对CO2CP测定作比较,筛选出使用单试剂酶法试剂时比较适用的校标、测定方法,现报告如下。

  1  材料与方法

  1.1  材料  日本岛津CL-8000全自动生化分析仪;浙江东欧(单试剂酶法,批号20050121);标准液1(试剂盒自带,浓度25mmol/L);标准液2(迈克公司,批号0604091,浓度25mmol/L);

  1.2  方法

  1.2.1  测定原理

  磷酸烯醇式丙酮酸+HCO-3—草酰乙酸+H2PO-4草酰乙酸+NADH+H+—苹果酸+NAD+NADH吸光度在380nm有最大吸收峰,NADH的减少与样品中CO2含量成正比。

  1.2.2  一点终点法(方法1,为试剂厂家提供方法)  在反应过程中,读取第16点吸光度(1点=17.9s)作为待测物(试剂空白、标准、样品)最终吸光度,以标准液1校标,反应曲线见图1。

  计算公式:

  CO2CP(mmol/L)=[(A空白-A样品)/(A空白-A标准)]×25=(A空白-A样品)×K1

  K1=-0.0491,A空白=1890.2mAbs(以下所有吸光度单位均为mAbs)

  1.2.3  二点终点法(方法2)  在反应过程中,读取第2点作为A1,第16点作为A2,以标准液1校标,反应曲线见图2。

  图1  一点终点法反应曲线

  图2  二点终点法反应曲线

  计算公式:

  CO2CP(mmol/L)=[(ΔA空白-ΔA样品)/(ΔA空白-ΔA标准)]×25=(ΔA空白-ΔA样品 )×K2

  其中,ΔA=ΔA1-ΔA2,K2=-0.0697,ΔA空白=1387.5-1275.8=111.7

  1.2.4  两种检测方法的应用及结果  取患者新鲜血清标本15例(含脂血、溶血、黄疸标本),同时用2种方法定标、检测,结果见表1。用2种方法同时检测标准液2共10次,求SD、CV、均值,并统计学方法采用t检验。结果见表2。

  表1  患者新鲜血清15例检测结果

  注:其中*表示6号标本重度脂血,ABS表示吸光度过高,仪器无法检测;**表示8号标本轻度脂血;△表示9号标本中度溶血;△△表示11号标本重度溶血;#表示12号标本黄疸血清;##因科室尚未购买质控血清,暂以此标准液代之

  表2  标准液2测定10次检测结果

  注:P>0.05

  2  结果分析

  表1中,6号标本为重度脂血,2种方法仪器都报警,说明该试剂该方法抗脂血干扰能力较差。值得注意的是9号标本用方法1测结果为0,检查其曲线,曲线很好,有反应过程,吸光度从2306.6下降到1916.2,按常理判断不应为0,可仔细分析,就能知道为什么会有这样的结果。

  可以看出,9号的样品空白非常高,它反应后吸光度虽然也大大下降,但仍然大于A空白(1890.2),根据公式CO2CP=(A空白-A样品)×(-0.0569),其值当然为0。如果用方法2的计算公式CO2CP=(ΔA空白-ΔA样品)×(-0.0659)计算此结果,CO2CP=111.7-(2306.6-1916.2)×(-00659)=18.0,这与方法2测得结果(16)基本一致。从表1中也可看出,脂血、溶血等含干扰因素的其他标本用方法2测定时,结果也相对要好一些,因为在反应过程中测的第二点吸光度实际上就是反应初期吸光度,它包括了样品的基础吸光度,可以看成是样品空白。利用ΔA来计算CO2CP含量,实际上扣除了样品空白,基本能够消除干扰物对吸光度的影响。

  为什么9号标本会有如此高的样品空白,估计与溶血有关,溶血从两方面影响CO2CP的测定,一是溶血后RBC内HCO3-释放出来,这会导致CO2CP升高,二是HB能使300~500nm的吸光度大大增加,这会导致CO2CP下降,而后者的影响效果远远大于前者,而且血液中的CO2CP也随时会扩散到空气中,这可与一的影响相抵消。但溶血的影响会这么大以至于结果为0吗?从11号重度溶血标本结果可以看出,对9号标本的干扰还不仅仅是溶血,肯定还有其他不可知的因素,比如药物的影响等。这同时也说明了干扰CO2CP测定的因素很多,在有条件的情况下,宜选择双试剂、双波长检测的试剂盒。

  从表2可以看出,测定没有干扰物的样品时,方法1较佳,因为测的都是第16点的吸光度,此时反应也接近尾声,曲线也趋于平稳,吸光度比较稳定,因此结果也比较稳定。而方法2中测的第二点吸光度反应刚开始,反应比较复杂,吸光度相对而言不太稳定,随机误差较大。这也导致结果的稳定性稍差,但两者差异无显著性(P>0.05)。

  3  结论

  综上所述,对溶血、脂血、黄疸、有药物等干扰的异常标本,方法2明显优于方法1,对无干扰的常规标本,方法1比方法2的稳定性较好,但差异无显著性(P>0.05)。因此综合以上因素考虑,使用单试剂酶法试剂检测CO2CP时,使用方法2不失为一种较佳的能消除样品空白的方法。

  作者单位: 443000 四川都江堰,都江堰市中国水利水电第十工程局医院

  (编辑:小  南)


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