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巨淀粉酶1例的实验观察

来源:中华实用医药杂志 作者:王宁皎 △ 陈晓虎 * 董苏荣赵春汪晓蓉姚莉陈洪军陈皓赵惠 * 2005-9-21
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摘要: 最近,在普查中发现巨淀粉酶(Macroamylase,M-AMS)1例。对其血清用不同浓度的PEG-6000处理后,发现与急性胰腺炎阳性对照和正常人阴性对照比较有明显不同,现报告如下。以前未发现淀粉酶(AMS)升高。 实验室常规检查:血AMS579。...


  最近,在普查中发现巨淀粉酶(Macroamylase,M-AMS)1例。对其血清用不同浓度的PEG-6000处理后,发现与急性胰腺炎阳性对照和正常人阴性对照比较有明显不同,现报告如下。

  1 临床资料
    
  患者,女,63岁,因眩晕、颈椎病入院。近3年来经常便秘,3~4天1次,无其他腹部不适。无特殊嗜好,正常饮食,不嗜烟酒,不嗜辛辣,否认高血压病、糖尿病冠心病等病史,否认肝炎、伤寒、结核等传染病史,否认重大创伤及手术史,否认食物及药物过敏史,否认有疫水接触史,否认有家族遗传病史。以前未发现淀粉酶(AMS)升高。
   
  入院查体:一般情况尚好,身高150cm,体重56kg,T36.2℃,R16次/min,BP115/70mmHg,发育良好,全身未触及肿大淋巴结,咽部略红,扁桃体不大,腮腺管口不红肿,心、肺(-),无腹部阳性体征,肝胆脾胰双肾B超未见异常。
   
  实验室常规检查:血AMS579.0u/L,住院2周内血AMS持续在579.0~709.0u/L之间,尿AMS46.0~57.0u/L,唾液AMS314~350.0u/L,血胰脂肪酶31.0u/L(正常23~300u/L),尿胰蛋白酶原Ⅱ阴性,淀粉酶清除率/肌酐清除率 [1] 为0.13%(正常参考值约为1.4%~4.0%)。PEG-6000鉴别检查 [2,3] 淀粉酶抑制率阳性(24%PEG-6000沉淀血AMS抑制率为88%,正常分子量淀粉酶抑制率在50%以下),血白细胞正常(白细胞总数7.34×10 9 /L,中性粒细胞48.9%,淋巴细胞28.4%,单核细胞7.10%,酸性粒细胞14.0%,嗜碱性粒细胞1.6%),免疫球蛋白均正常(IgG11.1g/L,IgA1.88g/L,IgM2.14g/L),EB病毒检测提示曾经感染(抗EB壳抗原阳性,抗EB核抗原阳性,抗EB早期抗原阴性,P22阳性)。
    
  2 实验室检查
    
  用不用浓度的PEG-6000处理血清,观察与淀粉酶有关的蛋白质。以pH7.0PBS做空白对照;以急性胰腺炎血AMS1923u/L做阳性对照;以正常人血AMS39u/L做阴性对照,处理后的血清做生化AMS检测和SDS-AGE电泳及碘—淀粉显色。
   
  2.1 生化检测AMS 用不同浓度的PEG-6000处理后生化检测AMS活性(底物为麦芽糖七苷)与PBS对照的差值算出被抑制率,见表1。
    
  表1 不同PEG-6000浓度处理后AMS活性的被抑制率 (略)
    
  2.2 SDS-AGE电泳 用不同浓度PEG-6000处理,沉淀蛋白后上清液电泳,pH7.0,60Vh,15min,取出加0.1%可溶性淀粉溶液覆盖,37℃,30min,1.0%碘液覆盖5min显色,有AMS活性为无色区域,无活性区为淡紫色背景。M-AMS血清经3%PEG-6000处理的上清液电泳,在相当于球蛋白的区域失去无色区,25%PEG-6000处理沉淀的M-AMS血清,相当于白蛋白的区域失去无色区,而在原点阴极端产生一大块特清的无色区,同样处理沉淀的PBS对照血清,从原点至相当于球蛋白和白蛋白的整个区域,有一连续的无色区。阴性对照和阳性对照与空白对照相似,只是3%PEG-6000处理的阴性对照血清和25%PEG-6000处理的阳性对照血清在原点阴极端另有一特清无色区。M-AMS在原点处的特清无色区,置4℃24h后消失。
    
  3 讨论

  M-AMS,正常人中检出率为1%,高AMS血症中检出率可达10% [4] ,可能是其不引起明显的临床症状而被忽略,国内鲜有报道,本实验室检出率约为1/110000。M- AMS诊断并不困难,但其发生原因至今仍不能确定。通常认为M-AMS是淀粉酶(分子量4500)与免疫球蛋白主要是IgA和IgG结合形成的大分子,以至于不能通过肾小球使血AMS持续高值,而尿AMS正常。
   
  据文献报道 [5] ,用不同浓度的PEG-6000可以沉淀不同分子量的蛋白质,随PEG-6000浓度减少,沉淀的蛋白质分子量变大,反之亦然。>25%(W/V)PEG-6000可沉淀白蛋白,3%为IgM,8%为IgG,12%为IgA,通过实验观察,血清用25%PEG-6000处理,沉淀蛋白后,上清液生化检测AMS活性被抑制,M-AMS与阳、阴性对照相比,有明显不同,提示M-AMS主要是与白蛋白结合形成的大分子,且电泳后AMS的活性区域,用PEG-6000沉淀白蛋白后,而随之消失的一致性,也验证了上述观点。PEG-6000沉淀蛋白质后上清液电泳,出现在原点的大块特清区,显示AMS的强劲活力,其形成可能是与AMS结合的蛋白质被沉淀后,AMS相互聚合成更大的分子,以至于不能通过琼脂糖凝胶的分子筛而集合在原点部位。由此看来,正常阴性血AMS是以与球蛋白结合为主,急性胰腺炎和M-AMS是以与白蛋白结合为主,但结合的量有所不同。提示AMS的代谢途径可能是小分子AMS从肾脏排出,另有部分通过与蛋白质的结合而代谢。
   
  有文献报道了多种脏器组织的AMS活性 [6] ,由于本例血AMS持续在579.0~709.0u/L水平,而不像急性胰腺炎短期内可迅速升高至1000.0u/L以上,或正常人群参考值在49.0u/L以下,而且25%PEG-6000处理后,淀粉酶活性被抑制率在M-AMS和阳、阳性对照之间有明显的不同,可能为血中AMS来源不同。提示AMS活性持续升高且维持在某一个水平,预示了某个器官的活动情况。
    
  参考文献
    
  1 中华医学会糖尿病学会.淀粉酶清除率(Cam)/肌酐清除率(Cer)比值.www.cds.org.cn,2002.
   
  2 张秀明,李健斋,魏明竟,等.现代临床生化检验学.北京:人民军医出版社,2001,1324-1334.
   
  3 Gillett MG,Gunneberg A,Godie DJ.Determination of macroamylasemia by polyethglene glycol(PEG)precipiation requires correct PEG concen-tration.Clin Chem,1995,41(6):956-957.
   
  4 Hortin GL,Summerfield AL,Wilhite TR,et al.Detection of autoantibod-ies to amylase by ELISA:Comparison of detection of macroamylase and free autoantibody.Clin Chem,1994,40(12):2254-2259.
   
  5 武建国.实用临床免疫学检验.南京:江苏科学技术出版社,1989,7:218-219.
   
  6 于嘉屏,金家文,许绍辉,等.部分正常人体组织淀粉酶及其同工酶含量的测定.临床检验杂志,1999,17(4):105-107.
    
  (编辑建 伟)

  作者单位:210029江苏省中医院检验科(△ 通讯作者* 心内科)
   
          江苏大学医学技术学院检验系2000级检验班


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