当前位置:首页 > 合作平台 > 在线期刊 > 中华现代中西医杂志 > 2004年第2卷第11期 > 论著 > 葡萄籽原花青素降低动脉粥样硬化兔内皮粘附分子水平

葡萄籽原花青素降低动脉粥样硬化兔内皮粘附分子水平

来源:中华实用医药杂志 作者:马亚兵 高海青 伊永亮 毕轶 刘相菊 2005-9-21
336*280 ads

摘要: 【摘要】 目的 探讨葡萄籽原花青素(GSPE)对动脉粥样硬化(AS)兔内皮粘附分子水平的影响。23kg,随机分为正常对照(A)组、高脂模型(B)组、GSPE预防干预(C)组,分别饲喂标准、标准+1%胆固醇、标准+1%胆固醇+1%GSPE的颗粒饲料,每只每天100~120g,自由饮水。于实验前1天和实验第1、2、4、8、12周末取空腹血,检测血......


    【摘要】 目的 探讨葡萄籽原花青素(GSPE)对动脉粥样硬化(AS)兔内皮粘附分子水平的影响。方法 30只雄性新西兰大白兔,平均体重2.65±0.23kg,随机分为正常对照(A)组、高脂模型(B)组、GSPE预防干预(C)组,分别饲喂标准、标准+1%胆固醇、标准+1%胆固醇+1%GSPE的颗粒饲料,每只每天100~120g,自由饮水。于实验前1天和实验第1、2、4、8、12周末取空腹血,检测血清ICAM-1、VCAM-1和E-选择素水平。所有数据用SAS8.2进行混合模型方差分析。12周末取血后处死,取主动脉做病理形态学观察。结果 与B组比较,C组ICAM-1在第12周时明显降低(P<0.05),VCAM-1在第1周时即明显降低(P<0.01),第4周后降低非常显著(P<0.0001),E-选择素差异无显著性(P>0.05),病理分析显示,B组兔主动脉有明显脂质斑块形成,而C组斑块显著缩小。结论 GSPE具有降低内皮粘附分子的作用。

    关键词 葡萄籽原花青素 动脉粥样硬化 细胞间粘附分子 血管细胞粘附分子 E-选择素

    Grape seed proanthocyanidin extract can reduce the endothelial  adhesion level in atherosclerosis rabbits  

    Ma Yabing,Gao Haiqing,Yi Yongliang,et al.

    Qilu Hospital of Shandong University,Jinan250012.

    【Abstract】 Objective To observe the effect of grape seed proanthocyanidin extract(GSPE)on the endothelial adhesion in atherosclerosis rabbits.Methods 30male New Zealand rabbits were randomized into three groups:the control(A)group,the cholesterol(B)group and GSPE(C)group,respectively10rabbits in each group.They were indiˉvidually housed in metal cages in an air-conditioned room.Throughout the experimental period,they were given reˉstricted amounts of food(100-120g/head per day)of each diet,with no limit of drinking.Group Awas fed with stanˉdard diet.Group B was fed with standard diet containing1%cholesterol.Group C was fed with standard diet containˉing1%cholesterol and plus1%GSPE.All the rabbits were fed for12weeks.Blood samples were drawn from ear middle arteries of rabbits just before the experiment and at the1 st  ,the2 nd  ,the 4th  ,the8 th  and the 12th  weekend of the exˉperiment.All the rabbits were fasted for at least8hours before the blood was drawn.Serum intercellular adhesion molecule(ICAM-1)、vascular cell adhesion molecule(VCAM-1)and E-selectin were determined using commerˉcially available ELISA kits.Results were expressed as means±SD.The Mixed Procedure of AS8.2software was used to evaluate the differences between group B and group C.All the rabbits were sacrificed at the 12th  weekend and aortas of the rabbits were excised for the morphological observation.Results Compared with group B,the serum ICAM-1level were lowed markedly by dietary GSPE at the 12 th  weekend(P<0.05).The serumVCAM-1contents were lowered markedly by dietar
y GSPE(P<0.01)at the1 st  weekend and lasted to the end of the experiment.The serum E-selectin doesn’t change markedly by dietary GSPE.The extent and severity of atherosclerosis in group C were less than those in group B.Conclusion GSPE can reduce endothelial adhesion level in atherosclerosis rabbits.

    Key words grape seed proanthocyanidin extract(GSPE) atherosclerosis intercellular adhesion molecule(IˉCAM-1) ascular cell adhesion molecule(VCAM-1) E-selectin  

    葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)是从葡萄籽中提取的多酚类混合物,其原花青素含量超过95%。原花青素具有多种生物学活性,最新研究发现它具有抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)等作用 [1]  。为深入研究GSPE抗AS的作用机制,开发GSPE,以应用于防治AS新领域,笔者采用含1%的胆固醇颗粒饲料建立新西兰大白兔AS模型,在建立模淹的同时用含1%的GSPE颗粒饲料进行预防干预实验,首次观察了GSPE对兔血清细 ˇ 胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)、血管细胞粘附分子(vascular cell adhesion molecule,VCAM-1)和E-选择素的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 药品与试剂 GSPE,购于天津尖峰天然产物研究开发有限公司,批号20020525,原花青素含量96.08%。该GSPE质量标准为:外观呈红棕色粉末状,味道涩,多酚≥95%(GAE检测),在酸中溶解,水中不溶物≤5.0%(1%25℃检测),醇中不溶物≤5.0%(1%25℃检测),粒径100目,灰分≤0.5%(CHP2000检测),干燥失重≤5.0%(CHP2000检测),堆积密度0.25~0.35g/ml,拍后密度0.40~0.50g/ml,pH(4%溶于水)为2.5~4.5(CHP2000检测),重金属≤10ppm(CHP2000检测),铁盐≤10ppm(CHP2000检测),砷盐≤2ppm(CHP2000检测)。胆固醇,购于上海新兴化工试剂研究所,批号020628。兔ICAM-1、VCAM-1和E-选择素ELISA试剂盒均购于美国TPI Inc,批号分别为0813B1、0816B1、0817B2,灵敏度均为ng/ml。

    1.1.2 实验动物 雄性新西兰大白兔30只,购自山东齐鲁制药厂(合格证号:鲁动质字D20020613号),6月龄,平均体重2.65±0.23kg。

    1.1.3 饲料制备 根据动物日常食量,按每只每天120g饲料,实验时间为12周计算各组饲料总量,并根据组别计算各组饲料中胆固醇、GSPE的添加量,分别制备各组饲料。取所需添加量的胆固醇,用标准饲料倍比稀释,搅拌均匀,直至胆固醇在料中占1%,制粒,干燥,即得标准+1%胆固醇的颗粒饲料。同法制备标准+1%胆固醇+1%GSPE颗粒饲料备用。

    1.2 方法

    1.2.1 研究设计 实验采用重复测量的成组设计。上述    新西兰大白兔均在实验条件下分笼喂养,自由饮水,适应喂 养1周后,随机分为3组,正常对照(A)组、高脂模型(B)组、GSPE预防干预(C)组,每组10只,分别给予标准、标准+1%胆固醇、标准+1%胆固醇+1%GSPE的颗粒饲料,每只每天100~120g。各组均能按时吃完,即B组每只每天摄入胆固醇1~1.2g,C组每只每天除摄入与B组同量胆固醇外,再摄入1~1.2
gGSPE进行预防。各组兔均饲喂12周。1.2.2 标本获取 各组兔均于实验开始前1天实验第1、2、4、8、12周末获取血液标本。清晨空腹称量体重后,经耳中动脉采血,待自凝后,以4000r/min×10min离心,留取血清用于测定ICAM-1、VCAM-1和E-选择素。所有血样均保存于-20℃冰箱待测。12周末取血后处死,取主动脉作病理形态学观察。

    1.3 检测指标与方法 血清ICAM-1、VCAM-1和E-选择素含量按试剂盒说明书方法进行测定。

    1.4 数据处理与统计 所有实验数据采用SAS8.2软件进行统计分析,结果以均数±标准差(ˉx±s)表示,各组间均数比较用混合式模型的方差分析(Proc Mixed)。

    2 结果

    2.1 血清粘附分子水平变化 血清ICAM-1、VCAM-1、E-选择素水平变化分别见表1~3、图1~3。

    表1 各组新西兰大白兔血清ICAM-1(μg/L)水平 (ˉx±s)(略)

    注:与A组同时间点比较 △ P<0.05; △△ P<0.01;与B组同时间点比较 ˇ P<0.05

    表2 各组新西兰大白兔血清VCAM-1(μg/L)水平 (ˉx±s)(略)
   
    注:与A组同时间点比较 △ P<0.05, △△ P<0.01

    图1 各组兔血清ICAM-1水平变化 图2 各组兔血清VCAM-1水平变化
    图3 各组兔血清E-选择素水平变化

      从表1、图1可以看出,实验前,各组ICAM-1基线水平一致;实验后,与A组比较,B组在第1周即显著升高(P<0.05),并一直维持至实验结束,C组只在第8周时显著升高(P<0.05),其余时间与A组差异无显著性;与B组比较,C组在12周时显著降低(P<0.05)。以上结果表明,高胆固醇可使ICAM-1水平持续升高,而GSPE具有降低ICAM-1作用。

    从表2、图2可以看见,实验前,各组VCAM-1基线水平一致;实验后,与A组比较,B组在第1周即显著升高(P<0.0001),直至实验结束,C组在第2周时显著升高(P<0.01),直至实验结束;与B组相比,C组1周时显著降低(P<0.01),直到实验结束。以上结果表明,高胆固醇使VCAM-1水平持续升高,而GSPE具有降低VCAM-1作用。

    从表3、图3可以看出,实验前,各组E选择素基线水平一致;实验后,与A组比较,B组在第1周即显著升高(P<0.05),直至实验结束,C组直至12周时才比A组显著升高(P<0.05);与B组比较,C组无显著变化,具有可比性(P>0.05)。以上结果表明,高胆固醇使E-选择素水平持续升高,GSPE虽然具有降低其水平趋势,但未达到统计学差异。

    2.2 主动脉病理变化 见图4~6。由图4~6可见正常对照组兔主动脉内膜光滑,无脂质沉积;高脂模型组兔主动脉内膜面有大量白色斑块,大小不等,多分布于血管分叉周围,有的融合成片,其长轴多与主动脉长轴平行,以主动脉弓处病变最重,有的部位整个内膜弥漫性增厚,AS病变非常明显;GSPE干预组兔主动脉只在血管分叉周围发现了少数较小的白色脂质斑块,其它部位的内膜光滑,无脂质沉积,AS病变程度明显减轻。

    3 讨论

    从1865年His提出内皮(endothelium)的概念到1980年Furchgott等揭示内皮依赖性血管舒张的现象,内皮仅被认为是血液与血管壁之间的物理屏障。现已证明血管内皮是体内最大的内分泌及旁分泌器官,是位于血液与血管壁之间的一个多功能界面。内皮细胞兼有感觉与效应功能,其表面有感知机械力、炎性信号和多种活性因子的受体,也能够合成并分泌数十种因子如凝血/纤溶因子、血管活性因子、生长因子、细胞因子以及粘附分子等,对循环系统的稳态平衡有重要调节作用。评价血管内皮功能对于心血管疾病的早期诊断及预后和疗效判断均具有重要意义。内皮将成为治疗和预防心血管疾病的新靶点。

    AS是一种严重威胁人类生命和健康的重大疾病,是心脑血管疾病的重要病理基础,是发达国家人口死亡的主要原因,在发展中国家发病率和病死率也越来越高,因此AS发病机制和抗AS药物一直是研究的热点。AS长期以来都被认为是一种老年性、退行性疾病,但近年研究发现,AS实 质上是大、中动脉内膜的慢性炎症。炎症从AS斑块的形成,生长到破裂,构成了其全病程的基础[2]  。故随着近年来人们对AS本质认识的不断深化,逐渐提出了抗炎、保护内皮的新治疗策略。

    目前,内皮的保护策略主要有清除或拮抗损伤因素,应用细胞保护剂,激活内源性保护物质/机制等。抗损伤措施,包括纠正缺血缺氧、调血脂、降血压、纠正高同型半胱氨酸血症、抗粘附、抗炎症、应用钙拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)与AT1受体阻断剂等,其中抗粘附治疗是内皮保护的新途径之一,已进入临床试验。动物实验表明,以单克隆抗体、反义核酸或其它拮抗剂(例如NF-κB拮抗剂)阻断内皮细胞粘附分子的表达或功能,能够显著减轻心血管组织损伤[3]  。外源性细胞保护剂包括抗氧化剂,如SOD、过氧化氢酶、维生素E和C等,其内皮保护效应已在临床得到证实。由于SOD和过氧化氢酶半衰期短,因此,寻找新的外源性细胞保护剂是目前研究的热点之一。

    在AS斑块的形成过程中,单核细胞对血管内皮细胞的粘附是前者进入内皮下间隙进而转变为泡沫细胞的关键步骤。研究发现,AS患者的粘附分子表达增强。Sen CK等[4] 应用TNF-α处理的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)研究了GSPE对粘附分子表达的影响,发现低浓度(1~5mg/ml)的GSPE即可使经TNF-α处理的HUVEC的血管细胞粘附分子-1表达下调。在他们同时进行的一项细胞与细胞共同培养的研究中,发现GSPE可使内皮细胞与白细胞的相互作用减弱。提示粘附分子表达下调可能是GSPE抗AS的分子生物学机制之一。

    我们实验室一直进行GSPE抗AS的免疫学研究,发现GSPE具有抗LDL氧化修饰 [5]  、调节血脂 [6]  、降低血清C反应蛋白水平、降低内皮炎症水平等作用。本次观察了GSPE对血清粘附分子的影响,结果显示,高胆固醇使ICAM-1、VCAM-1和E-选择素水平持续升高,而GSPE能使其水平降低,而接近于正常水平,表明GSPE具有抗内皮粘附作用。我国是葡萄的主产地,资源丰富,品质优良,具有巨大的开发价值。从废弃的葡萄籽中提取的原花青素,具有调血脂、抗氧化、抗炎、抗粘附等内皮保护作用,因此,深入研究其作用机制,将GSPE应用于AS防治,对于增进人民健康,促进经济和社会发展,具有重大意义。

    参考文献

    1 马亚兵,高海青.葡萄籽原花青素抗动脉粥样硬化研究进展.山东医药,2002,42:82-83.

    2 马亚兵,高海青,孙汶生.炎症与动脉粥样硬化.国外医学·老年医学分册,2003,24:131-133.

    3 Harlan JM,Winn RK.Leukocyte-endothelial interactions:clinical trials of anti-adhesion therapy.Crit Care Med,2002,30(5):214-219.

    4 Sen CK,Bagchi D.Regulation of indudble adhesion molecule expression in human endothelial cells by grape seed proanthocyanidin extract.Mol Cell Biochem,2001,216(1-2):1-7.

    5 马亚兵,高海青,由倍安,等.葡萄籽原花青素抗LDL氧化修饰作用的研究.中华医药杂志,2003,3(11):961-963.

    6 马亚兵,高海青,由倍安,等.葡萄籽原花青素对动脉粥样硬化兔血脂的调节作用.中国药理学通报,2004,20(3):325-359. (收稿日期:2004-07-26)

    基金项目:山东省医药卫生科技发展计划资助项目(No.HW067)

    作者单位:250012山东济南山东大学齐鲁医院 


医学百科App—医学基础知识学习工具


页:
返回顶部】【打印本文】【放入收藏夹】【收藏到新浪】【发布评论



察看关于《葡萄籽原花青素降低动脉粥样硬化兔内皮粘附分子水平》的讨论


关闭

网站地图 | RSS订阅 | 图文 | 版权说明 | 友情链接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 医源世界 版权所有
医源世界所刊载之内容一般仅用于教育目的。您从医源世界获取的信息不得直接用于诊断、治疗疾病或应对您的健康问题。如果您怀疑自己有健康问题,请直接咨询您的保健医生。医源世界、作者、编辑都将不负任何责任和义务。
本站内容来源于网络,转载仅为传播信息促进医药行业发展,如果我们的行为侵犯了您的权益,请及时与我们联系我们将在收到通知后妥善处理该部分内容
联系Email: