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龙胆草与混淆品桃儿七的比较鉴别及急性毒性观察研究

来源:中华实用医药杂志 作者:段小燕 柴秋彦 2005-9-21
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摘要: 【摘要】 目的 建立一个快速鉴别、区分龙胆和混淆品桃儿七的方法。方法 以形状鉴别、粉末显微鉴别和理化鉴别进行描述,并测定比较了两者的急性毒性。结果 经上述多种方法考察结果表明,龙胆和混淆品桃儿七有明显不同,鉴别方法有较好重现性与复现性。龙胆水煎液未能测出LD 50 。...


  【摘要】 目的 建立一个快速鉴别、区分龙胆和混淆品桃儿七的方法。方法 以形状鉴别、粉末显微鉴别和理化鉴别进行描述,并测定比较了两者的急性毒性。结果 经上述多种方法考察结果表明,龙胆和混淆品桃儿七有明显不同,鉴别方法有较好重现性与复现性;龙胆水煎液未能测出LD 50  ;桃耳七的LD 50  为:11.5±2.1g/kg。结论 上述方法可简便快速地鉴别区分桃儿七、龙胆,动物毒性实验的方法鉴别二者也不失为一种快捷有效的方法,具有快速、方便、准确的优点。

  关键词 龙胆 桃儿七 鉴别 急性毒性

  龙胆(Radix Gentianae)为龙胆科(Gentianaceae)植物龙胆(Gentiana scabra Bunge)、三花龙胆(G.triflora Pall.)、条叶龙胆(G.manshurica Kitag.)或坚龙胆草的干燥根及根茎 [1]  。始载于《神农本草经》中,列为上品。性寒,味苦,有清肝火,泻湿热,健胃的功效,是临床上使用频率极高的常用中药。临床上经常遇到将小檗科植物桃儿七(Podophyllum emodi Wall.P.emodi wall var.chinense spragne) [2]  误当龙胆使用,造成患者中毒的事例。因二者在性状、外观上确有相似之处,极易混淆,已有文献对二者的比较鉴别进行了
研究 [3,4]  ,但两药口服的急性毒性比较笔者未见报道。故本文除将二者在性状、显微、薄层色谱方面进行了比较鉴别外,尚对两药口服的急性毒性进行了比较观察研究,以进一步了解二者在毒性上的差异,为临床安全使用提供参考。

  1 材料

  1.1 受试药品 龙胆及桃儿七原药材由榆次市药材公司提供,经山西省药品检验所袁伟盛主任药师鉴定为:龙胆科(Gentianaceae)植物龙胆(Gentiana scabra Bunge)及小檗科鬼臼亚科植物桃儿七(Podophyllum emodi Wall.P.emodi wall var.chinense spragne)的干燥根及根茎。

  1.2 受试动物 KM种小鼠,雌雄各半,体重18~22g,普通级,由中国辐射防护研究院动物房提供。引进后实验室常规饲养3日后使用。

  2 方法与结果

  2.1 性状鉴别

    2.1.1 龙胆草 龙胆草根茎呈不规则的块状,长1~3cm,直径0.3~1cm;表面暗灰棕色或深棕色,上端有茎痕或残留茎基,周围和下端着生多数细长的根,主根不明显。根呈圆柱形,略扭曲,长10~20cm,直径0.2~0.5cm;表面淡黄色或黄棕色,上部多有显著的横皱纹,下部较细,有纵皱纹及支根痕。质脆,易折断,断面略平坦,皮部黄白色或淡黄棕色,木质部色较淡,中心有数个筋脉点(维管束)呈环状排列。气微,味极苦。

    2.1.2 桃儿七 根茎呈横走结节状,长0.5~3cm,直径0.5~1cm;表面淡黄或暗灰棕色,上端有茎痕或残留茎基,质硬。根数十条密生于根茎上,根呈圆柱形,长10~30cm,直径2~3mm;表面棕褐色或黄棕色,有纵皱纹及须根痕。质脆,易折断,断面平坦,类白色或黄白色,粉性,木质部淡黄色。气微,味苦、微辛。

  2.2 显微鉴别

  2.2.1 龙胆草 龙胆根横切面表皮由外壁较厚的一层细胞组成,外皮层明显,由约4~6列扁长细胞构成。内皮层细胞较小,略带方形,排列整齐。韧皮部宽广,外侧多有裂隙,形成层不明显。髓部明显,薄壁细胞含细小草酸钙针状结晶。粉末呈淡黄棕色,导管为网纹及梯纹,直径约45μm,外皮层细胞表面观呈纺锤形,每一个细胞由横壁分隔成数个小细胞。内皮层细胞表面观类长方形,较大,每一个细胞由纵壁分隔成数个小细胞。薄壁细胞含细小草酸钙针状结晶。

  2.2.2 桃儿七 根(直径约2mm)的横切面:表皮细胞为一列类多角形细胞,壁增厚;下皮细胞一列,壁稍增厚。皮层宽广,均为薄壁细胞,内皮层明显。初生木质部5原型,于韧皮束相间排列。

  2.3 理化鉴别

    2.3.1 龙胆草 龙胆根含龙胆苦苷(Gentiopicrin)、龙胆碱(Gentianine)及龙胆三糖。(1)取龙胆2g,加甲醇10ml提取,过滤,滤液浓缩至4ml,取2ml加HCl酸化,加碘化铋钾试剂,产生橘黄色沉淀。(2)取以上甲醇提取液及龙胆苦苷标准品甲醇溶液,点于同一块GF薄层板上,用氯仿:甲醇:水(30:10:1)展开12cm,挥干后在紫外灯(254nm)下观察,龙胆苦苷标准呈红紫色斑点,Rf值约0.4,龙胆甲醇提取液在相应位置显示同样斑点。  

  2.3.2 桃儿七 取桃儿七粗粉1g,加乙醇50ml回流提取至无色,过滤,滤液回收乙醇至不足1ml,加乙醇定容至1ml,取10μl点样于硅胶G板(105℃活化30min)薄层板上,用氯仿:乙酸乙酯(60:40)展开12cm以上,挥干后喷浓硫酸-乙醇(1:1)液,120℃加热10min观察,呈红色斑点,以鬼臼毒素(Podophylltoxin)为对照,桃儿七乙醇提取液在相应位置显示同样斑点。

  2.4 毒性比较

    2.4.1 龙胆草 取龙胆粗粉20g,于200ml烧杯中,加蒸馏水200ml浸泡2h,加热煎煮30min,过滤,滤液90℃水浴浓缩至20ml(每ml相当于生药1g)。备用。经预试,在实验所用浓度下不能求得半数致死量(LD 50  ),故测定其最大耐受量(MTD)。然后取体重20g左右KM种小鼠40只,雌雄各半;随机分为用药组及对照组,每组20只。用药组ig给予龙胆提取液0.5ml/kg,相当于50.0g/kg;对照组给予等容量生理盐水,用药后连续观察7天,记录小鼠中毒反应及死亡情况。结果两组动物均无死亡。龙胆提取液的最大耐受量为:50.0g/kg。

    2.4.2 桃儿七 取桃儿七粗粉20g,按上述方法同样操作制备1:2的浓缩水煎液备用。然后取小鼠60只,雌雄各半;随机分为6组,每组10只。按1:0.8的组距设置剂量,一次灌胃给予桃儿七1:2的浓缩水煎液,给药容积为0.2ml/10g体重。用药后连续观察7天,记录小鼠中毒反应及死亡情况。结果:用药后小鼠即刻倦伏,活动减少,随后进入昏睡状态,并出现大量稀便、体温降低、衰竭而死亡。最后按文献方法求得桃儿七提取液的LD 50  (半数致死量)为:11.5±2.10g/kg。

  3 讨论与小结

    3.1 龙胆草与桃儿七外观形状极其相似,属不同科不同种属的植物。其所含化学成分有较大的差异。性味、归经、功效、主治以及临床应用均存在明显不同。尤其是毒性差异巨大,稍有疏忽,即可造成患者中毒 [5~8]  。因此,在临床应用过程中,尤其在中药材的采购供应、加工炮制及处方调配中要格外注意,以防桃儿七混入龙胆草中,给临床用药带来安全隐患。为了安全用药,有必要应用性状鉴别、显微鉴别,尤其是理化鉴别将它们加以区别。以保障临床用药的安全。

    3.2 过去已经有多篇文献报道龙胆草与桃儿七二者的鉴别,但均无二者的口服的急性毒性比较,我们的实验结果显 示,由于桃儿七中含有鬼臼毒素(Podophyllotoxin),口服后能刺激小肠,引起大量水泻,并出现血便,导致严重衰竭性虚脱而死亡,故以动物毒性实验的方法鉴别二者也不失为一种快捷有效的方法,其具有快速、方便、准确的优点。

  参考文献

  1 任仁安.中药鉴定学,上海:上海科学技术出版社,1991,10:51.

  2 江苏新医学院.中药大辞典,上海:上海人民出版社,1993,12:1003-1135.

    3 刘宝玲,张南平,王利生,等.龙胆与假龙胆的鉴别.中国药事,1998,12(2):103.

    4 粟晓黎.中药鬼臼成分HPLC/UV指纹图谱分析方法研究及威灵仙、龙胆HPLC图谱比较.中成药,2000,22(12):819.

    5 中华人民共和国药典编审委员会.中国药典(一部),2000,139.

  6 中国医学科学院药物研究所等.中药志(二册),1982,5:307.

  7 《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编,1985,5:375.

    8 中国医学科学院药物研究所等.中药志(一册),1982,10:246.

  (收稿日期:2004-04-15) (编辑罗 彬)


  作者单位:030031山西省生物应用职业技术学院
         030006山西省医药研究所


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