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带绦虫妊娠节片孔雀绿染色标本制作

来源:中国热带医学 作者:奚琳琳,杨毅梅作者单位:大理学院基础医学院寄生虫学 2013-9-26

摘要: 【关键词】 带绦虫。孔雀绿染色 孔雀绿是一种弱碱性胞核染料,也是一种很好的指示剂[1]。纪伟华等曾用孔雀绿水溶液对带绦虫妊娠节片(孕节)标本进行染色,使孕节的内部结构清晰,便于观察[2]。但染色时间较长,且病人带来的标本多固定于75%乙醇中,更为形态上鉴别虫种的工作带来了负担,鉴于此,为更好采用该染......


【关键词】  带绦虫;妊娠节片;孔雀绿染色

  孔雀绿是一种弱碱性胞核染料,也是一种很好的指示剂[1]。纪伟华等曾用孔雀绿水溶液对带绦虫妊娠节片(孕节)标本进行染色,使孕节的内部结构清晰,便于观察[2]。但染色时间较长,且病人带来的标本多固定于75%乙醇中,更为形态上鉴别虫种的工作带来了负担,鉴于此,为更好采用该染色方法,本实验采用4%孔雀绿水溶液对固定于75%乙醇中的带绦虫孕节进行染色。

  1  材料和方法

  1.1  标本 

  来自云南兰坪地区带绦虫病人,固定于75%乙醇半年,取其孕节,压片固定并分节。

  1.2  方法

  1.2.1  去乙醇 

  50%乙醇,30%乙醇和蒸馏水,时间各为30min。

  1.2.2  染色方法

  将去乙醇的孕节节片放入染色皿中染色,2%和4%孔雀绿水溶液分别染色,室温(18~19℃),染色时间分别为30min,1h,2h,4h。取出染好的节片,蒸馏水洗去虫体表面的浮色,0.5%-30%盐酸乙醇进行分色,2min;不同浓度梯度的乙醇:30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%,95%,100%逐级脱色脱水,每级20min;用1/2二甲苯+1/2无水乙醇和纯二甲苯透明,每级20min;最后用加拿大树胶封片,镜下观察染色结果。

  2  结果

  2.1  2%孔雀绿水溶液染色效果 

  染色时间30min,虫体着色浅,内部结构不着色;染色时间1h,虫体标本绿色,分色及脱水后无色;染色时间2h,孕节深绿色,经分色和脱水后,子宫部分为淡绿色;染色时间4h,虫体墨绿色,分 色和脱色后,孕节边缘为白色,子宫侧枝为深绿色。

  2.2  4%孔雀绿水溶液染色效果 

  经30min染色后,标本为绿色,分色,脱水后,孕节中央子宫部分着色较浅;经1h染色,孕节颜色为深绿色,中央子宫侧枝为绿色,周围组织无色;经2h染色,孕节颜色是墨绿色,经分色和脱色后,子宫侧枝为深绿色,周围组织无色;经4h染色,孕节颜色为深墨绿色,分色及经较久脱色后,虫体边缘才为白色,子宫侧枝为深绿色,周围组织无色。经对照,以4%孔雀绿水溶液染色1~2h为更佳染色方法,节省时间,且标本内部结构清晰,易于观察。

  3 讨论
        
  众所周知,猪带绦虫可引起囊虫病,远比牛带绦虫的危害大;目前新出现虫种亚洲带绦虫是否引起囊虫病尚无定论,其形态特征介于传统猪带绦虫和牛带绦虫之间。在寄生虫病学研究和临床诊断工作中,常需观察带绦虫成虫节片的形态,特别是孕节子宫侧枝分枝数及其排列,是带绦虫的鉴别要点之一,因此制备带绦虫孕节染色标本尤为重要。以往用盐酸卡红染色的标本,整个节片均是暗红色,内部结构不清晰,子宫部分和周围组织分界也不明显,难于观察和进行鉴别;墨汁注射法所使用的桃胶也难于购买,而不方便继续使用。相反,孔雀绿是一种具有光泽的绿色结晶,是弱碱性胞核染料,易溶于水、乙醇和甲醇等,对虫卵有很好的着色力,而其它组织部分对其缺乏吸附力,经分色,水洗,脱色等处理,被染成深绿色的子宫部分和无色的周围组织有明显的区别,且立体感强,内部结构清晰,方便观察和永久保存;孔雀绿染液化学性质稳定,可以长期在室温下放置和重复利用;孔雀绿染色方法操作简便又容易掌握,因此更适于临床诊断、科研以及教学,值得推广。

【参考文献】
    [1]陈佩惠.人体寄生虫学实验技术[M].北京:科学出版社,1988.89.

  [2]纪伟华,郭冀玲.带绦虫妊娠节片标本制作方法的研究[J].中国人兽共患病杂志,2001,17(4):73~74.


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