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不同浓度的苯甲酸钠对微生物限度检查的影响

来源:中国热带医学 作者:王妤 2010-1-13
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摘要: 【摘要】 目的 以微生物限度检查常规法评价不同浓度的苯甲酸钠对微生物生长的影响。 方法 采用常规法对不同浓度的苯甲酸钠人工污染5种代表菌株,测定回收率,分析苯甲酸钠的最低抑菌浓度。3%的苯甲酸钠对菌落的回收率均高于70% ,符合验证的要求。并通过测定含有苯甲酸钠防腐剂的罗汉果止咳糖浆证实,0。...


【摘要】  目的 以微生物限度检查常规法评价不同浓度的苯甲酸钠对微生物生长的影响。 方法 采用常规法对不同浓度的苯甲酸钠人工污染5种代表菌株,测定回收率,分析苯甲酸钠的最低抑菌浓度。 结果 确定0.3%的苯甲酸钠对菌落的回收率均高于70% ,符合验证的要求;并通过测定含有苯甲酸钠防腐剂的罗汉果止咳糖浆证实,0.3%的苯甲酸钠无抑菌作用。 结论 以常规法能测苯甲酸钠的最低抑菌浓度。

【关键词】  微生物限度检查法;苯甲酸钠;罗汉果止咳糖浆;方法学验证。

Effect of Sodium benzoate of different concentrations  on the detection of microorganisms.

  WANG Yu.

  (Hainan Provincial Institute for Drug Control, Haikou 570216, Hainan, P. R. China)
苯甲酸钠通常用作口服液体制剂中的防腐剂,浓度一般为3%左右,本实验通过人工污染菌测定不同浓度的苯甲酸钠对菌的回收率测定,以确定苯甲酸钠的最低抑菌浓度;并通过对含有苯甲酸钠防腐剂的罗汉果止咳糖浆的人工染菌回收率测定,进一步确定苯甲酸钠的最低抑菌浓度,从而为评价含有苯甲酸钠防腐剂的药品微生物限度检查方法的可靠性、准确性提供科学依据。

  1  材料与方法

  1.1  材料  苯甲酸钠 (批号:991201-2), 广州化学试剂厂;罗汉果止咳糖浆a( 批号060103  ),广西半宙制药股有限公司;罗汉果止咳糖浆b(批号050901、060101、060202),广西梧州制药(集团)股份有限公司;罗汉果止咳糖浆c(批号20060102、20060104、20051103),桂林中族中药股份有限公司;规格均为100ml/ 瓶;验证用菌种大肠埃希菌CMCC(B) 44102、枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、白色念珠菌CMCC(F)98001、黑曲霉CMCC(F)98003均由中国生物检定所提供; 玫瑰红钠琼脂 (批号:040929)、营养琼脂(批号:060214)、 营养肉汤(批号:060117)均由北京三药科技开发公司提供。

  1.2  方法

  1.2.1  菌液制备  取经37℃培养18~24h,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的肉汤培养物1ml加入9ml盐水,10倍稀释至10-5 ~10-7,细菌数约为50~100cfu/ml,做活菌计数备用;取经25 ℃培养18~24h的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml加入9ml盐水10倍稀释至10-5 ~10-7,细菌数约为50~100cfu/ml,做活菌计数备用;取经25 ℃培养1wk的黑曲霉斜面培养物,加3~5ml盐水洗下霉菌孢子,吸取出菌液1ml加入9ml盐水,逐管10倍稀释为10-3,细菌数约为50~100cfu/ml,做活菌计数备用。

  1.2.2  供试液制备  取苯甲酸钠10g 至100ml 的无菌生理盐水中(10.0%),依法稀释成浓度为5.0%、3.0%、1.0%、0.5%、0.3%、0.2%的供试液备用;吸取罗汉果止咳糖浆10ml,加至pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液90ml中,制成1:10的溶液作为验证供试液。

  1.2.3  试验组  分别取已灭菌不同浓度的苯甲酸钠(10.0%、5.0%、3.0%、1.0%、0.5%、0.3%)和1:10的验证供试液1 ml和50~100个/ ml 试验菌株同时加入平皿中,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌试验菌倾注营养琼脂,待凝固后,于30~35℃培养,白色念珠菌霉、黑曲霉菌倾注玫瑰红钠琼脂,待凝固后,于24~28℃培养,每天观察结果.

  1.2.4  活菌组  测定每一菌株的试验菌数,采用平板菌落计数法。

  1.2.5  供试品组  不加菌液,其它操作同试验组,测量样品本底菌数。

  2  结果

  2.1  常规法对几种试验菌株的分离培养情况  见表1。

  表1  常规法对几种试验菌株的分离培养活菌落计数(略)

  2.2  不同浓度苯甲酸钠对几种试验菌株回收率测定结果的影响  见表2。

  表2  不同浓度苯甲酸钠菌落回收率测定结果(略)

  2.3  0.3%的苯甲酸钠对不同厂家罗汉果止咳糖浆回收率的影响  见表3。

  表3  3个厂家7个批次菌落回收率测定结果(略)

  注:供试品组测量的本底菌数均为0。

  3  讨论

  3.1  从表2中的数据可知,通过人工污染菌测定不同浓度的苯甲酸钠对菌的回收率测定结果, 苯甲酸钠浓度为10.0%、5.0%、3.0%、1.0%、0.5%时,随着苯甲酸钠浓度的降低,其抑菌作用也随之降低,当苯甲酸钠浓度为0.3%和0.2%时,苯甲酸钠对人工污染菌落的回收率均为100%,说明了苯甲酸钠浓度为0.3%或小于0.3%时,苯甲酸钠无抑菌作用,按照中国药典2005年版微生物限度验证原则,当回收率高于70%时,说明该方法符合验证的要求。

  3.2  从表3结果可知  采用常规法检验罗汉果止咳糖浆供试品,人工污染5种代表菌株,该供试品对大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色珠念菌、黑曲霉的回收率均大于70%,符合规定中国药典微生物限度验证方法的要求(即3次独立试验的回收率应大于70%,该方法才可行),故罗汉果止咳糖浆均可采用常规方法进行检验。

  3.3  从三个厂家罗汉果止咳糖浆的处方可知,处方中苯甲酸钠的用量一般在2g~3g/100ml,采用常规法测定罗汉果止咳糖浆时,供试液制成1:10的溶液,即样品稀释后苯甲酸钠的浓度为0.2%~0.3%,从表3中的数据再次验证了,当防腐剂苯甲酸钠的浓度为0.3%时,已几乎无抑菌作用。

  3.4  从表2中可知,当苯甲酸钠浓度为0.3%或0.2%,回收率均为100%,但从表3中数据可知,苯甲酸钠浓度为0.2%或0.3%时,回收率均在80%和100%之间;从表3的数据也说明了,中药口服制剂的中药成份含有一定的抑菌成分,建议生产厂家在今后的检验标准中注明微生限度详细的操作。

【参考文献】
  [1] 中华人民共和国国药编辑委员会.中国药典一部[M].北京:化学工业出版社,2005,附录:71.

  [2] 林昌,朱广平.3种酊剂的微生物限度检查法[J].中国药业,2006,20(15):28.


作者单位:海南省药品检验所,海南 海口 570216


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