当前位置:首页 > 医源资料库 > 在线期刊 > 中国热带医学杂志 > 2007年第7卷第9期 > 海南地区汉黎族正常人群ACE基因多态性的分布

海南地区汉黎族正常人群ACE基因多态性的分布

来源:中国热带医学 作者:金水晶,云美玲,张勇,王镇,钟江华,周代锋,王红霞 2010-1-13
336*280 ads

摘要: 【摘要】 目的 了解海南地区汉族、黎族正常人群ACE基因多态性插入/缺失(I/D)频率的分布情况。 方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测97例海南地区汉族正常人与146例黎族正常人血中ACE基因16内含子I/D多态标记,得到三种基因型: 缺失纯合子(DD型)、插入纯合子(Ⅱ型)及插入缺失杂合子(DI型)。统计各基因型频率,......


【摘要】  目的 了解海南地区汉族、黎族正常人群ACE基因多态性插入/缺失(I/D)频率的分布情况。 方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测97例海南地区汉族正常人与146例黎族正常人血中ACE基因16内含子I/D多态标记,得到三种基因型: 缺失纯合子(DD型)、插入纯合子(Ⅱ型)及插入缺失杂合子(DI型)。并对所有普通PCR定为DD型的样本进行插入特异性PCR检测,以减少误分型率。统计各基因型频率,计算等位基因频率。 结果 海南地区汉族正常人DD、DI、Ⅱ基因型频率分别为15.5%、44.3%、40.2%,D及I等位基因频率分别为37.6%、62.4%;黎族正常人DD、DI、Ⅱ基因型频率分别为13.0%、43.8%、43.2%,D及I等位基因频率分别为34.9%、65.1%。两组之间DD、DI、Ⅱ基因型频率及D、I等位基因频率均无显著性差异。 结论 海南地区汉族、黎族正常人群ACE基因多态性(I/D)的频率分布相接近,与中国内地汉族人群ACE基因多态性(I/D)的频率分布相接近。

【关键词】  血管紧张素转换酶基因; 多态性;聚合酶链反应(PCR);黎族;汉族

Distribution of polymorphism of ACE gene in healthy people of Han and Li nationalities in Hainan Province.

  JIN Shui-jing, YUN Mei-ling, ZHANG Yong, et al.

  (Gerontology Hospital, Haikou 571100, Hainan, P. R. China)

  Abstract:Objective  To understand the distribution of frequencies of insertion/deletion (I/D) polymorphisms of ACE gene in healthy Han and Li nationalities in Hainan Province.  Methods  The I/D polymorphic markers of intron 16 of ACE gene were detected in 97 Han individuals and 146 Li individuals by using polymerase chain reaction (PCR). Three genotypes were found: deletion homozygote (DD), insertion homozygote (II) and deletion/insertion heterozygote (DI). Furthermore, insertion-specific detection by PCR was performed for individuals that have been determined as DD by normal PCR to reduce misclassification rate. Frequencies of genotype and allele were statistically calculated.  Results  The frequencies of DD, DI and Ⅱ were 15.5%, 44.3% and 40.2% respectively, and frequencies of D and I alleles were 37.6% and 62.4% respectively in healthy Han nationality. The frequencies of DD, DI and Ⅱ in healthy Li nationalithy were 13.0%、43.8%、43.2%,respectively, and frequencies of D and I alleles were 34.9% and 65.1% respectively. There no significant differences in the frequencies of both genotypes of DD, DI and II and alleles of D and I between these two groups were observed.  Conclusion  The distribution of frequency of ACE gene polymorphisms (I/D) is similar between Han and Li nationalities in Hainan and it is similar to that of Han nationality on the mainland China.

  Key words:ACE Gene; Polymorphisms; Polymerase Chain Reaction(PCR); Li Nationality; Han Nationality

  国内外研究表明ACE 基因多态性频率分布有明显的种族和地区差异。英国白人DD 型为32%,非洲籍为30.9%,南亚人群为18.3%[1]。国内研究显示ACE 基因多态性在达斡尔族中分布为ID型占58%、DD 型占30%、Ⅱ型占12%,I、D 等位基因频率分别为41%与59%[2],ACE 基因多态性在鄂温克族中分别为ID 型占66.67%,DD 型占25%, Ⅱ型占8.33%、I、D 等位基因频率分别为41.66%与58.33%[3]。因此,我们对海南地区汉族、黎族正常人群ACE基因多态性的频率分布情况进行统计分析。

  1  材料与方法

  1.1  研究对象及DNA样品  97例汉族正常人来自海南省干部疗养院的体检者,146例黎族正常人分别来自海南陵水县及昌江县的义诊者。排除继发性高血压。并抽取每位研究对象静脉血3ml,用EDTA抗凝, 按Lahiri等方法[4]提取DNA。

  1.2  方法

  1.2.1  引物设计与合成  参照王谷亮[5]、江程澄[6]等报道稍有改动设计引物并委托合成引物。引物序列如下:ACE-1:5’-CTg gAg AgC CAC TCC AAT CCT TTCT-3’ACE-2:5’-Tgg gAC CAC AgC gCC CgC CAT AC-3’ACE-3:5’-TCg CCA gCC CTC CCA TgC CCA TAA -3’ACE-1和ACE-3引物对扩增ACE基因中包括Alu插入片段的DNA区域,当样本是插入纯合子(Ⅱ型)时,PCR扩增将只出现一条533bp的DNA扩增片段,当样本是缺失纯合子(DD型)时,PCR扩增将只出现一条233bp的DNA扩增片段,当样本是插入缺失杂合子(DI型)时,PCR扩增将同时出现533bp和233bp两条DNA扩增片段;ACE-2引物是针对ACE基因中Alu插入片段设计的特异性扩增引物,当ACE-2和ACE-3引物对进行PCR扩增时,将可检验Alu插入片段存在与否,可进一步检验ACE-1和ACE-3引物对的PCR扩增基因分型结果的准确性,即当样本是插入纯合子(Ⅱ型)或插入缺失杂合子(DI型)时,将出现一条335bp的PCR扩增片段,当样本是缺失纯合子(DD型)时,将无PCR扩增片段(见图1)。

  1.2.2  PCR扩增  PCR反应体积为25μl,在PCR缓冲液(10mmol/L Tris-HCl,pH8.3,50mmol/L KCl,2.0mol/L MgCl2,0.01% Gelatin)中含模板DNA 0.2μg,引物0.2~0.5μmol/L,dNTP为200μmol/L,1U Taq DNA聚合酶(宝生物(大连)工程有限公司产品),置Tgradient 96 梯度PCR仪中扩增,94℃ 2min,94℃ 50Sec,65℃ 50Sec,72℃ 1min。重复循环32次,将扩增产物在2%的琼脂糖凝胶中电泳,经EB染色在紫外光灯下观察结果。

  1.2.3  统计学分析  应用SPSS13.0统计分析软件包进行资料分析。计算各组基因频率及等位基因频率,组间比较用卡方检验。P<0.05为有显著统计学差异。

  2  结果

  2.1  PCR扩增结果  经ACE-1和ACE-3引物对PCR反应,得到三种基因型: DD型(缺失纯合子,只出现233bp PCR扩增片段),DI型(缺失/插入杂合子,同时出现233bp和533bp两种PCR扩增片段),Ⅱ型(插入纯合子,只出现533bp PCR扩增片段)。用ACE-2和ACE-3引物对对插入序列Alu片段进行特异性扩增时,Ⅱ型和DI型可以扩增出一条335bp的DNA片段,而DD型则无出现(见图1)。结果本实验所有DD型经用ACE-2和ACE-3引物对对插入序列Alu片段进行特异性扩增时,均无PCR扩增片段出现。

  图1  ACE基因PCR扩增基因分型结果(略)

  M为100bp DNA Ladder(北京天为时代科技有限公司产品);1~6为ACE-2和ACE-3引物对的PCR扩增结果,其中1,2为Ⅱ型;3,4为DI型;5,6为DD型;7~12为ACE-1和ACE-3引物对的PCR扩增结果,其中7,8为II型;9,10为DI型;11,12为DD型。

  2.2  基因型频率及等位基因频率  海南地区汉族正常人DD、DI、Ⅱ基因型频率分别为15.5%、44.3%、40.2%;D及I等位基因频率分别为37.6%、62.4%。黎族正常人DD、DI、Ⅱ基因型频率分别为13.0%、43.8%、43.2%;D及I等位基因频率分别为34.9%、65.1%。两组之间DD、DI、Ⅱ基因型频率及D、I等位基因频率均差异无显著性(P>0.05)。见表1。

  表1  汉族和黎族人群ACE基因型分布和等位基因频率(略)

  χ2=0.83,P>0.05   χ=0.544,P>0.05

  3  讨论

  ACE 基因位于17 号染色体长臂2 区3 带(17q23)上,为单拷贝基因,全长21kb,含26个外显子及25个内含子,目前已发现多种ACE 基因多态标志, 例如T5941C、A240T、T93C、T1237C、D/I和4656(CT)2/3等,其中对16内含子中存在的287bp 的Alu 插入片(Insertion I) 和缺失片段(Deletion ,D) 的多态性研究较多,这一多态性可利用多聚合酶链反应技术(PCR)检测。但Rigat1992年创建的方法(Rigat法)[7]会将部分DI型错定为DD型,据报道误判率约10%[5],故近来国内外改用三条引物法作为ACE基因分型分析法,来开展ACE基因多态性与其它疾病的相关性研究。我们在参照王谷亮、江程澄[5,6]等报道的基础上稍有改动设计了三条引物,经ACE-1和ACE-3引物对PCR反应,得到三种基因型: DD型(缺失纯合子,只出现233bp PCR扩增片段),DI型(缺失/插入杂合子,同时出现233bp和533bp两种PCR扩增片段),Ⅱ型(插入纯合子,只出现533bp PCR扩增片段)。再把所有DD型经用ACE-2和ACE-3引物对对插入序列Alu片段进行特异性扩增,如出现PCR扩增片断为含I等位基因,结果本实验对所有被判为DD型的样本经该方法扩增后均无PCR扩增片段出现。说明只要引物设计及PCR扩增条件设置合理,两引物法即可准确地进行ACE基因多态性的分型,从而使研究方法更简便,有效节约了研究成本及资源。血管紧张素转换酶(ACE) 是肾素- 血管紧张素系统(RAS) 的限速酶之一,血清活性测定虽在同一个体中有较好的重复性,但个体间变异较大。遗传因素可能在这一变异中起一定的作用。由于ACE基因多态性在人群中的分布以及与各种疾病的关系受到广泛关注,因而它的基因在研究心血管遗传易感性疾病中作为主要候选基因之一一直是研究的焦点。由于在不同人群中的研究结果截然不同,甚至不同样本量的研究结果也不同[8],至今尚未见有肯定的结论。已有许多报道表明ACE基因型分布和等位基因的频率在不同种族和地区之间有差异[9]。白种人ACE的D等位基因频率为56.2%;黑种人为60.36%;亚洲人为39.0%[10];其中汉人ACE基因缺失基因和基因型频率分别为38.0%和14.9%,与韩国人、日本人报告结果相近(分别为41.66%、20%;39.9%、19.2%)[6]。本研究结果显示海南地区汉族正常人DD、DI、Ⅱ基因型频率分别为15.5%、44.3%、40.2%;D及I等位基因频率分别为37.6%、62.4%。黎族正常人DD、DI、Ⅱ基因型频率分别为13.0%、43.8%、43.2%;D及I等位基因频率分别为34.9%、65.1%。两组之间DD、DI、Ⅱ基因型频率及D、I等位基因频率均无显著性差异。提示海南地区汉族与黎族正常人群的ACE 基因DD 型与D等位基因相近,与国内大部分报道汉族正常人群中DD 型14.9%,38%相近,表明两个民族ACE基因在疾病的易感性方面有一致性。

【参考文献】
  [1] Sagnella GA,Rothwell NJ,Onipinla AK,et al. A population study of eth2nic variations in the angiotensin converting enzyme IPD polymorphism :relationship with gender, hypertension and impaired glucose metabolism[J]. Hypertension,1999,17:657~664.

  [2] 王宇一,张英民,陈阿梅,等. 血管紧张素转换酶基因多态性在达斡尔族中分布特点[J]. Progress of anatomical sciences,2000,6(1):85~88.

  [3] 张英民,王宇一,陈阿梅,等. 中国北方鄂温克族人群中血管紧张素转换酶多态性特点[J]. Progress of anatomical sciences,2000, 6(1):34~36.

  [4] Lahiri DK, Schuabel B. DNA isolation by a rapid method from human blood samples:Effects of MgCl2, EDTA, storage time, and temperature on DNA yield and quality[J]. Biochem Genet, 1993,31(718):321~328.

  [5] 王谷亮,韩战营,朱鼎良,等. 血管紧张素转化酶基因插入/缺失多态性检测方法的研究[J].中华心血管病杂志, 2001, 29(4):239~242.

  [6] 江程澄,张楠华,王健. 血管紧张素转化酶基因多态性与肺部疾病的关系[J]. 国外医学临床生物化学与检验学分册, 2002, 23(1):25~27.

  [7] Rigat B,Hubert C,Corvol P,et al.PCR detection of the insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene (DCPI)(dipeptidyl carboxypeptidase I)[J].Nucl Acids Res,1992,20:1433.

  [8] Birgit Agerholm-larsen, Borge G Nordestgaard. Anne tybjerg-hansen ACE gene polymorphism in cardiovascular disease meta - analyses of small and large studies in whites[J]. Atherosclerosis and Lipoproteins,2000,20:484.

  [9] Rigat B, Hubert CC,Alhenc GF, et al. An insertion/ deletion polymorphism in t he angiotensin I2coverting enzyme gene ac2 counting for half t he variance of serum enzyme levels[J]. J Clin Invest,1990,86:1~343.

  [10] Duru K,Farrow S,Wang JM,et al.Frequency of a deletion polymorphism in the gene for angiotensin converting enzyme is increased in African-Americans with hypertension[J].Am Hypertens,1994,7(8):759.


作者单位:2005年海南省教育厅重点科研资助项目 (HjKj200525) 老年病医院,海南 海口 571100;海南医学院附属医院心血管内科,海南 海口 570102; 海南医学院生化教研室,海南 海口 571101.


医学百科App—医学基础知识学习工具


页:
返回顶部】【打印本文】【放入收藏夹】【收藏到新浪】【发布评论



察看关于《海南地区汉黎族正常人群ACE基因多态性的分布》的讨论


关闭

网站地图 | RSS订阅 | 图文 | 版权说明 | 友情链接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 医源世界 版权所有
医源世界所刊载之内容一般仅用于教育目的。您从医源世界获取的信息不得直接用于诊断、治疗疾病或应对您的健康问题。如果您怀疑自己有健康问题,请直接咨询您的保健医生。医源世界、作者、编辑都将不负任何责任和义务。
本站内容来源于网络,转载仅为传播信息促进医药行业发展,如果我们的行为侵犯了您的权益,请及时与我们联系我们将在收到通知后妥善处理该部分内容
联系Email: