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纳米中药对脾虚型溃疡性结肠炎动物模型的影响

来源:中国热带医学 作者:曲颖,胡大康 2010-1-13
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摘要: 【摘要】 目的 研究纳米中药对大鼠急性脾虚型溃疡性结肠炎模型的影响。 方法 利用苦寒泻下中药番泻叶,灌服大鼠,使其产生脾虚症状,再用冰乙酸化学刺激法复制溃疡性结肠炎病理模型。 结果 与正常对照组相比,发生溃疡性结肠炎时动物的体重、肠道内优势菌群双歧杆菌(BS)和乳酸杆菌(LBS)均发生显著性降低(......


【摘要】  目的 研究纳米中药对大鼠急性脾虚型溃疡性结肠炎模型的影响。 方法 利用苦寒泻下中药番泻叶,灌服大鼠,使其产生脾虚症状,再用冰乙酸化学刺激法复制溃疡性结肠炎病理模型。用肉眼观察整段结肠的黏膜改变情况;梯度稀释法行粪便菌群分析,了解几种代表性的菌群的改变;一般病理切片,行染色,观察镜下病理变化。 结果 与正常对照组相比,发生溃疡性结肠炎时动物的体重、肠道内优势菌群双歧杆菌(BS)和乳酸杆菌(LBS)均发生显著性降低(P<0.05),且伴随相关体征。结肠肉眼观察及病理切片检查的恶性改变。中药通过扶植肠道优势菌群缓解了溃疡性结肠炎的症状,常态中药组与模型对照组比较有明显的差异(P<0.05);纳米中药小剂量即可达到满意的治疗效果,纳米中药治疗组与常态中药治疗组比较有明显的差异(P<0.05)。 结论 纳米中药可以作为一种微生态调节剂,即从调整肠道微生态失衡角度来治疗溃疡性结肠炎,取得了较好的疗效。

【关键词】  溃疡性结肠炎; 大鼠; 纳米中药; 治疗

Observation on the effect of nano traditional Chinese medicine on experimental rat with ulcerative colitis model.

  QU Ying, HU Da-kang.

  (Laboratory Department of Taizhou Municipal Hospital, Taizhou 318000, Zhejiang, P. R. China)

  Abstract:Objective  To investigate the effects of nano traditional Chinese medicine on experimental hypofunction of spleen ulcerative colitis rat model.  Methods  The rats with the symptom ofwith hypofunction of spleen were preared after given bitter humble and Fanxieye, and hypofunction of spleen ulcerative colitis rat model was established after stimulated by ice anetic acid chemistry. After the sacrificing of the mice, the histology of the whole colon was observed under anatomic microscopy. The bacterial flora in the feces of rats were analyzed by quantitative diluted bacterial culture assay.  Results  The body weight and the quantities of BS ad LBS were significantly reduced in ulcerative colitis model rats than that of the normal ones(P<0.05). Traditional Chinese medicine can relieve symptoms of ulcerative colitis by regulating the intestinal flora and showing a significant differences between the traditional medicine group and normal group (P<0.05). The effect of nano traditional medicine was spuperior to that of commen traditional medicine (P<0.05).  Conclusion  Nano-traditional medicine can be used as a microecological preparation and it is effective in reatment of ulcerative colitis by regulating the dysbiosis of intestinal flora.

  Key words:Ulcerative colitis; Rat; Nano-traditional medicine; Treatment

  溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC.以下简称溃结)是消化系统难治性病之一,因之病因复杂,发病机理不明,目前西医尚无理想治疗方法,我国应用中医中药治疗取得了可喜的成绩。许多学者用多种方法建立UC的动物模型,探讨其病因、发病机理及中药药理。同时,纳米技术在生物医学领域的研究进展为我们对中药的研究和开发带来了新的希望。本文通过给脾虚型溃结大鼠模型应用纳米中药,诣在探讨纳米中药对溃结的影响,以期为能更好治疗溃结提供证据。

  1  材料与方法

  1.1  材料

  1.1.1  常态中药配制  健脾益肠汤由黄芪、党参、白术等十二味中药组成,符合药典标准,水煎3次,浓缩至每毫升含生药量1克的水溶液备用,4℃冰箱保存[1]。

  1.1.2  纳米中药配制  应用纳米球磨机(由温州医学院提供)将健脾益肠汤进行纳米微粒的加工,再用水提法提取纳米中药混悬液,浓缩着每毫升含0.1g生药量的水溶液备用,4℃冰箱保存。番泻叶用开水浸泡24h,制成20%浸剂。动物:Wister大白鼠,由温州医学院实验动物中心提供,体重(180±20)g。试剂:冰乙酸,用蒸馏水配成5%浓度。

  1.2  方法  选取健康大鼠40只,禁食不禁水12h,按体重随机分为4组,每组10只,雌雄各半,分别为正常对照组、模型对照组、常态中药组和纳米中药组。正常对照组不做任何处理,其他用药组 按每100g体重1.5ml灌服番泻叶浸剂,每天1次,灌服3d后,禁食不禁水35h,用20%氨基甲酸乙酯0.5g*kg-1腹腔注射轻度麻醉,肥皂水2ml灌肠冲洗。20min后自肛门注入冰乙酸1ml。动物苏醒后正常饲养,次日开始继续灌服番泻叶2d。自造模第3d开始,分别给予不同用药组相应的药物治疗,每只每天3ml,模型对照组灌同容积的蒸馏水,连续灌服7d[2]。

  1.3  动物的处理与评价

  1.3.1  肉眼观察与记录  实验前每组大鼠分别称重,末次灌胃后次日禁食不禁水12h,再次分别称重;实验期内每天观察动物的一般情况和脾虚症状的变化。

  1.3.2  组织学观察  取离肛门10cm肠段,于生理盐水中冲洗,置于白色滤纸上将肠壁展开,用肉眼观察肠黏膜的改变;而后置于10%甲醛液内固定、包埋、切片、HE染色,制作组织标本,光学显微镜下观察。

  1.3.3  菌群分析  按本实验室现行方法配制下述各种细菌的培养基[3]:肠杆菌EMB,肠球菌EC,双歧杆菌BS,乳酸杆菌LBS。采集一定量的大鼠回盲部内容物,称量后均质化,并进行10倍连续稀释,分别在培养基上用20μl加样器向高稀释度低稀释度滴种,枪头距培养基表面3cm,每个平板3个稀释度,每个稀释度2~3滴,稀释度的选择根据所选菌种的正常值。需氧培养基,置于37℃温箱24h后,厌氧培养基置于37℃厌氧罐72h后分别记菌落数,以CFU/g表示:CFU/g=菌落数*稀释浓度*50。

  1.4  统计方法  各组数据均采用软件处理,组间比较采用方差分析。

  2  结果

  2.1  大鼠脾虚症状观察  模型对照组与实验用药组的大鼠在灌服番泻叶3d陆续出现便溏、纳呆、消瘦、畏寒、拱背、懒动、毛失光泽、精神萎靡等脾虚症状,自肛门注入冰乙酸后2~3d出现黏液便,逐渐出现活动减少,精神倦怠,毛发无光泽且发黄,已无毛发自净习惯,饮食量下降,体重减轻,大便稀泻并带有脓液,有的带血性分泌物。实验组动物在给药3d后,即可见脾虚症状较对照组轻,在给药5d后脾虚症状进一步好转,黏液血便及体重减轻发生率减少,健脾益肠汤纳米组效果更明显。

  表1  健脾益肠汤对造模动物体重的影响(略)

  注:*P<0.05

  2.2  结肠肉眼  正常大鼠结肠黏膜上皮完整,腺体排列整齐,黏膜下血管正常;溃结大鼠结肠可见局部组织水肿、脓肿和糜烂、黏膜断裂,血管纹理不清。

  2.3  结肠病理学观察  模型大鼠镜下观察结肠呈不同程度水肿,黏膜上皮脱落,可见明显溃疡形成,腺体中杯状细胞减少,病变部位有大量淋巴细胞、单核细胞和嗜中性细胞等炎性细胞浸润。
  
  2.4  菌群分析  结果显示常态中药组与模型制造组比较有显著性差异(P<0.05),纳米中药组与常态中药组比较有显著性差异(P<0.05)。见表2。

  表2  健脾益肠汤对造模动物肠道菌群的影响(略)

  注:*P<0.05

  3  讨论

  溃结的确切病因一直不明,感染只是其病因之一。目前有关细菌感染与溃结的关系研究主要集中在以下三个方面1)细菌是否为溃结的促发因素;2)正常肠道菌群在溃结发病中起的作用,是否为导致肠病慢性化的因素;3)细菌是否为溃结的特异性致病菌[4]。Fabia等对溃结动物模型和临床研究也发现:在乙酸性鼠肠炎和人类溃结中,厌氧菌和乳酸菌数量的减少是活动性肠炎的普遍特征[5]。本实验也证实,在溃结制模过程中,鼠的肠道菌群发生明显改变,尤其是以致病性肠球菌与肠杆菌的增加和益生菌双歧杆菌的减少为特征,这说明菌群失调是引起模型动物溃结的病因之一。同时,有研究表明肠道常驻菌在溃结的形成过程中也起“扳机”作用,无菌无炎症,这已在转基因和基因敲除IBD动物模型得到证实[6]。本实验研究采用国内脾虚动物模型的造型方法,利用翻泻叶灌服大鼠使起产生脾虚症状,再用冰乙酸化学刺激法复制溃结动物病理模型,其症状和病理改变均与临床脾虚型溃结相符。在溃结的治疗过程中,大多数的常规药物都是抑制或调节宿主的免疫反应,而忽略了内环境中微菌群导致疾病的因素[7]。其治疗机制为杀死溃疡区的所有微生物,促使溃疡面在自身修复机制的作用下达到治愈目的,但也存在着药效丧失后,致病微生物易于再次定植及一些致病微生物会逐渐产生耐药性的缺陷,故常规药物治疗发不能达到根除的目的。近年来,许多研究都从中医学方面探讨其发病机理,并欲从中筛选出疗效更为显著的治疗方法。依据溃结在中医角度来看,其主要病机是脾胃虚弱,故选用有健脾益气之功效的健脾益肠汤。同时,经过动物实验及临床观察证明,部分补益类中药具有扶植正常菌群生长,调节菌群失调,提高定植抗力(CR)功能,起到益生元[8]作用。而健脾益肠汤中的黄芪、党参等几味君药均是补益类中药,临床治疗效果较好。本实验将其制成纳米级微粒的大小,再次应用于治疗溃结当中,是一次新的尝试,并且它以较小的用药剂量就取得了较好的治疗效果:改善大鼠脾虚型溃结动物模型的脾虚症状;促进模型动物的体重恢复,有明显的扶植肠道正常菌群生长,调节肠道微生态失调作用,也为研究纳米中药治疗脾虚型溃结提供了实验依据。

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作者单位:台州市立医院检验科,浙江 台州 318000.


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