当前位置:首页 > 医源资料库 > 在线期刊 > 中国热带医学杂志 > 2007年第7卷第6期 > 中药对常见革兰阴性杆菌耐药菌株体外抑菌试验观察

中药对常见革兰阴性杆菌耐药菌株体外抑菌试验观察

来源:中国热带医学 作者:王治伟,庞雪云,冼中任,田碧文 2010-1-13

摘要: 【摘要】 目的 探讨中药对常见多重耐药革兰阴性杆菌治疗的可行途径。 方法 用自制中药液对多重耐药的铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼复合醋酸钙不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌采取试管内药液稀释法和纸片法进行药物敏感试验。 结果 中药液对全铜绿假单胞菌以及多重耐药的嗜麦芽窄食单胞菌作用较大,......


【摘要】    目的 探讨中药对常见多重耐药革兰阴性杆菌治疗的可行途径。 方法 用自制中药液对多重耐药的铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼复合醋酸钙不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌采取试管内药液稀释法和纸片法进行药物敏感试验。 结果 中药液对全铜绿假单胞菌以及多重耐药的嗜麦芽窄食单胞菌作用较大,对多重耐药菌鲍曼复合醋酸钙不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌作用较弱。 结论 由于中草药的多作用机制,一般在临床不易形成耐药,但中草药目前的炮制和使用情况下难以达到如此高的体内浓度,难以替代抗生素,应在中草药和抗生素联合使用上进一步研究,以减少耐药性和抗生素残留。

【关键词】  中药 革兰阴性杆菌 多重耐药

  Observation on the effect of traditional Chinese medicine on multi-drug resistant strains of gram-negative rods.

  WANG Zhi-wei, PANG Xue-yun, XIAN Zhong-ren, et al.

  (Laboratory Department of  Gangwan Hospital of Guangzhou Medical College, Guangzhou 510700, Guangdong, P. R. China)
   
  Abstract:Objective  To observe the effect of traditional Chinese medicine in dealing with multi-drug resistant strains of gram negative bacillus.  Methods  The susceptibility of organisms identified by automatic microbial system(Vitek) was tested by Kirby-Bauer(K-B) method as described in NCCLS to ensure their multi-drug resistance. The methods of dilution test in tubes and testing sensibility in the agar plate with drug paper were selected to determine the effect of extract of traditional Chinese medicine against the multi-drug resistant strains of Pseudomonas aeruginosa, Stenotrophomonas maltophilia, Acinetobacter baumannii, Escherichia coli, and Klebsiella pneumoniae.  Results  Both methods showed that the traditional Chinese medicine was more effective on the strains of Pseudomonas aeruginosa and Stenotrophomonas maltophilia, and less effect for the strains of Acinetobacter baumannii, Escherichia coli, and Klebsiella pneumoniae.  Conclusion  The multiple acting mechanhisms of traditional Chinese medicine on bacteria is less likely to lead to the occurrence of drug resistance in microoganisms. But to date traditional  Chinese medicine is not easy to reach a high concentration in vivo, thus it can not replace antibiotics. Therefore combined use of traditional Chinese medicine and antibiotics is recommended.
   
  Key words:Traditional Chinese medicine;  Gram negative bacillus;  Multi-drug resistant strains

  随着临床治疗手段快速发展,抗生素药物广泛及不合理的使用,带来的负面效应是医院感染率上升和耐药菌株的增加。多重耐药菌株的出现,导致临床治疗失败,感染复发,死亡率增高等。目前,多重耐药的假单胞菌、不动杆菌以及产超广谱β-内酰酶(ESBLs)肠杆菌科细菌已成为一些大型综合医院常见的医院感染菌,如何应对这些耐药细菌,已成为医院各级医护人员必须面对的严峻问题。本试验采用部分中药提取液对临床分离的常见多重耐药革兰阴性杆菌进行中药抑菌试验。借此了解中草药制剂抑菌作用以及探索对多重耐药革兰阴性杆菌的中药治疗途径。

  1  材料与方法

  1.1  材料

  1.1.1  菌种  质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853、大肠埃希菌ATCC25922,多重耐药菌株为铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼复合醋酸钙不动杆菌,由广东省中医院检验科从临床标本分离,并经VITEK32细菌全自动系统和手工鉴定为多重耐药菌株。多重耐药菌株常用抗生素敏感试验见表1。

  1.1.2  培养基及肉汤  M-H平板及肉汤管均购自迪景微生物科技有限公司。

  表1  常见革兰阴性杆菌抗生素药敏试验(略)

  注:AN:丁胺卡那霉素 AM:氨苄西林 AMS:氨苄西林/舒巴坦荡 CZ:头孢唑啉FEP:马斯平均CRO:头孢曲松 CIP:环丙沙星 GM:庆大霉素 IMP:亚胺培南 FD:呋喃妥因 TZP:派拉西林/他唑巴坦 TOB:妥布霉素 SXT:复方新诺明 LEV:左旋氧氟沙星 SCF:头孢哌酮/舒巴坦。

  1.1.3  药物及药液制备  复方由黄连、制黄芪、茵陈、诃子、甘草、肉桂等中药组成。茵陈及肉桂先以水蒸气蒸馏法制备得挥发油,药渣再以水提醇沉法制备。黄连、制黄芪、诃子、甘草水提醇沉法制备,上三种药液混合,文火半小时除去残留乙醇。兑以蒸馏水,即成含药物浓度为100%(1ml溶液含1g生药)的药液86ml,高压灭菌备用。 

  1.1.4  供药敏用纸片制备  将普通定性滤纸用打孔机打成若干圆形纸片,直径为6mm,置于干燥洁净的试管内,放入高压蒸气灭菌器中,经121.3℃ 15~20min高压灭菌后,取出,放入干燥箱内进行干燥备用。

  1. 2  方法

  1.2.1  试管内药液稀释法(二倍稀释法)测定抑菌效价  取带塞无菌试管7组,每组8支排列在管架上,于每组第1管加入无菌药液2.0ml,第2管起加入无菌肉汤培养基2.0ml,然后于每组第2管中加入灭菌的受试中药液2.0ml,混匀后取出2.0ml放入第3管中,依此类推,直到第6管取出2.0ml弃去,使成1、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32浓度。第7管不加药液作为对照,以便观察培养基是否适合细菌生长。第8管中加入受试中药液2.0ml,混匀取出2.0ml弃去,不加细菌,以便观察受试药液是否有污染。将用肉汤培养6~8h的 质控及多重耐药菌菌液,用无菌肉汤稀释成10-3浓度,分组加0.1ml至上述1~7管中。混匀后,放入37℃孵箱中培养16~24h后观察结果。将培养后清亮管转种到M-H平板上,仍无细菌生长,即表示该管药量是受试中药液的最低杀菌浓度,记录结果。

  1.2.2  菌株对中药液的敏感性试验—纸片法  将已高压蒸气灭菌的干燥备用纸片无菌操作放置已均匀涂布菌液的M-H平板中,每种菌贴三组纸片,每组分别加0.02ml、 0.04ml、 0.06ml药液于纸片上然后将平板置37℃温箱中培养24h后测量抑菌圈的大小,记录结果。

  2  结果

  2.1  试管内药液稀释法(二倍稀释法)测定结果  实验结果显示,药液原液对所试验菌株均有抑菌作用,未见细菌生长。鲍曼复合醋酸钙不动杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、肺炎克雷伯菌、质控大肠埃希菌、质控铜绿假单胞菌的MIC分别为1:4、1:2、1:4、1:8、1:2、1:2、和1:4。中药液对嗜麦芽窄食单胞菌作用较大,最低杀菌浓度达到1:8,对大肠埃希菌作用较弱,最低抑菌浓度为1:2,且与是否产超广谱β-内酰酶(ESBLs)无关。

  2.2  菌株对中药液的敏感性试验—纸片法  从实验结果可以看到,三个浓度的药液对多重耐药菌鲍曼复合醋酸钙不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌以及质控大肠埃希菌没作用,但对质控铜绿假单胞菌、全耐药的铜绿假单胞菌以及多重耐药的嗜麦芽窄食单胞菌均有作用,而且0.06ml浓度药液对后两者有强抑制作用。见表2

  表2  中药液对多重耐药菌及质控菌的抑菌圈直径(mm)及抑菌作用(略)

  注:凡抑菌圈直径大于10.0mm者为强抑菌,用“+++”表示;抑圈直径为8.0~10.0者为抑菌,用“++”表示;抑菌圈直径小于6.0~8.0mm者为弱抑菌,用“+”表示;没抑菌作用用“-”表示

  3  讨论
   
  近年来,随着抗生素的广泛应用,细菌的耐药率日趋上升和多重耐药性更加严重,给临床防治带来极大困难。中医药传统医学上常用作机体免疫调节,但作为一种新的抗菌药物逐渐受到重视,其作用机理是多方面的,既能干扰细胞壁合成、损伤胞浆膜,也有影响细胞蛋白合成、影响核酸合成干扰遗传密码复制的作用[1]。而且其剂型方便、毒副作用小逐渐应用到临床抗菌治疗中。许多中药具有抑菌或杀菌作用,其抑菌作用机理主要以下几方面:中药有效成分的作用;与其它药物的协同作用,药物的配伍影响等[2]。本实验采用黄连、制黄芪、茵陈、诃子、甘草、肉桂等中药配伍制得药液,从MIC实验结果可以看出,其药液原液对试验的几种多重耐药菌均有抑制作用,但纸片法中三种浓度对肠杆菌属三个菌均无抑菌作用。这可能与复方制剂含多个单味药,具有多种有效成分,其分子大小不同,在琼脂中的渗透性有差异,从而也影响了复方的抗菌效果有关[3]。所以体外测药物抗菌效力太小,连续稀释法较为常用。
   
  据报道虽然磺胺类、抗生素对许多菌种疗效逐年下降,但耐抗生素的细菌对植物中的抗菌物质仍多敏感,这可能与中药的多作用机制,一般在临床不易形成耐药有关。如三黄汤中黄连、黄柏、大黄、甘草分别作用于细菌代谢不同环节,可使其不易产生耐药[4]。本实验中药提取液对多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌、全耐药铜绿假单胞菌均有较强作用也证实这一点。但复方体外抗菌试验具有抑菌作用只是初步说明药物单纯的抗菌作用,不足以阐明药物对整个机体的影响,其抗菌作用还需进行体内的抗菌实验和最终的临床验证。而且中草药的抑菌浓度是抗生素的1 000倍级,这在中草药目前的炮制和使用情况下难以达到如此高的体内浓度,单味中草药难以替代抗生素,应在中草药和抗生素联合使用上进一步研究,以减少耐药性和抗生素残留[5]。

【参考文献】
    [1] 周小梅, 莫其农, 李忠新. 中草药抗金黄色葡萄球菌研究进展[J]. 深圳中西医结合杂志, 2004,14(2):114~117.

  [2] 张志清, 刘剑, 李娟. 中药抑菌作用研究进展[J]. 中药材, 2002,25(9): 688~690.

  [3] 李建农, 包定元. 中药复方抗菌作用的实验研究进展[J]. 四川生理科学杂志, 2000, 22(4): 27~31.

  [4] 王嵩. 中草药抗细菌感染的研究[J]. 北京中医杂志, 2002, 21(4): 249~251.

  [5] 路振香, 时维静, 杨用光. 中草药对大肠杆菌体外抑菌试验[J]. 中兽医医药杂志, 2004,(6): 14~16.


作者单位:广州医学院港湾医院检验科,广东 广州 510700; 广州中医药大学第二附属医院检验科,广东 广州 510700.


医学百科App—医学基础知识学习工具


页:
返回顶部】【打印本文】【放入收藏夹】【收藏到新浪】【发布评论



察看关于《中药对常见革兰阴性杆菌耐药菌株体外抑菌试验观察》的讨论


关闭

网站地图 | RSS订阅 | 图文 | 版权说明 | 友情链接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 医源世界 版权所有
医源世界所刊载之内容一般仅用于教育目的。您从医源世界获取的信息不得直接用于诊断、治疗疾病或应对您的健康问题。如果您怀疑自己有健康问题,请直接咨询您的保健医生。医源世界、作者、编辑都将不负任何责任和义务。
本站内容来源于网络,转载仅为传播信息促进医药行业发展,如果我们的行为侵犯了您的权益,请及时与我们联系我们将在收到通知后妥善处理该部分内容