当前位置:首页 > 医源资料库 > 在线期刊 > 中国热带医学杂志 > 2007年第7卷第6期 > 槐耳浸膏对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

槐耳浸膏对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

来源:中国热带医学 作者:钱红兰,胡倩,胡旭东,陈怡,孙岚,梁彬,叶海格 2010-1-13
336*280 ads

摘要: 【摘要】 目的 探讨槐耳浸膏对骨髓瘤细胞株PRMI8226细胞增殖和凋亡的影响。 方法 取PRMI8226细胞与1。5mg/ml、3mg/ml、5mg/ml的不同浓度槐耳浸膏在体外孵育, 分别在24h、36h、和48h时用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,并用流式细胞术(FCM )检测早期细胞凋亡情况。 结果 槐耳浸膏可抑制PRMI8226细胞增殖, 不同浓度的......


【摘要】    目的 探讨槐耳浸膏对骨髓瘤细胞株PRMI8226细胞增殖和凋亡的影响。 方法 取PRMI8226细胞与1.5mg/ml、3mg/ml、5mg/ml的不同浓度槐耳浸膏在体外孵育, 分别在24h、36h、和48h时用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,并用流式细胞术(FCM )检测早期细胞凋亡情况。 结果 槐耳浸膏可抑制PRMI8226细胞增殖, 不同浓度的槐耳浸膏对多发性骨髓瘤细胞增殖的抑制效果不同,以5mg/ml抑制增殖效果最好。且浓度为5.0mg/ml的金克诱导多发性骨髓瘤细胞48h抑制率达到高峰84%。FCM检测表明槐耳浸膏可诱导PRMI8226细胞早期凋亡,用5.0mg/ml槐耳浸膏处理48h后,可引起25.9%的PRMI8226细胞凋亡。这两种作用均随槐耳浸膏浓度和作用时间的延长而增强。 结论 槐耳浸膏可在体外抑制PRMI8226细胞增殖, 并促进其凋亡。

【关键词】  多发性骨髓瘤 槐耳浸膏 细胞增殖 细胞凋亡

  Impact of Huaierjingao on the proliferation and apoptosis of myoloma cell induced by PS-T.

  QIAN Hong-lan, HU Qian, HU Xu-dong, et al.

  (The First Affiliatd Hospital of Wenzhou Meidcal College, Hangzhou 325000, Zhejiang, P. R. China)
   
  Abstract:Objective  To investigate the effects of Huaierjingao (PS-T) on proliferation and apoptosis of myeloma cell line PRMI8226 in vitro.  Methods  PRMI8226 cells were cultured with different concentrations of  PS-T (1.5, 3.0 and 5.0mg/ml). The inhibition of proliferation was measured by CCK-8 assay 24, 36 and 48 hours after culture and cell apoptosis was evaluated by flow cytometry.  Results  PS-T inhibited the growth of PRMI8226 cells in concentration and time-dependent manner. Flow cytometry analysis showed that PS-T induced apoptosis of PRMI8226 cells, and the percentage of apoptotic cells increased as the concentration increased and time elongated.  Conclusion  PS-T can inhibit proliferation of PRMI8226 cells and promote its apoptosis.
   
  Key words:: Myeloma; PS-T; Proliferation;  Apoptosis

  槐耳是一种入药1 500余年但已湮没300余年的重要药用真菌,它和其原料药材槐耳菌质近年来已被批准为国家一类新药。其成品(金克R-槐耳颗粒国家一类新药) 目前已用于临床,对肝癌肺癌、食管癌、胃癌、淋巴瘤等均有独特疗效[1~5]。为进一步探讨其抗癌机制,本实验以多发性骨髓瘤细胞株PRMI8226细胞为研究对象,观察槐耳浸膏对PRMI8226细胞株增殖及凋亡的影响, 为临床应用槐耳颗粒治疗多发性骨髓瘤提供理论依据。

  1  材料与方法

  1.1  药物与试剂  槐耳浸膏由江苏盖天力药业有限公司提供, CellCountingKit-8试剂(日本同仁化学研究所),FITC-Annexin-V试剂(Bender Medsystems公司),PRMI-1640培养基(美国GIBCO公司,胎牛血清(天津市正江高科技有限公司)。

  1.2  细胞  多发性骨髓瘤细胞株PRMI8226,由浙医大惠赠。

  1.3  仪器  FACSC calibur流式细胞仪(美国B. D公司),酶标仪(Bio-tek Instruments ELX800)。

  1.4  实验方法

  1.4.1  药品制备  精确称取槐耳浸膏1 000mg(由江苏盖天力药业有限公司提供) ,将其溶解于100mlPRMI-1640培养基,以0.22μm超滤除菌器过滤除菌,制备成10mg/ml的PRMI-1640浓缩含药培养液,实验时稀释成不同浓度备用。

  1.4.2  细胞培养  多发性骨髓瘤细胞株PRMI8226用常规方法培养。培养条件为加1%青霉素、1%链霉素、10%小牛血清的PRMI - 1640培养液,相对湿度94%,5%CO2 ,37℃。细胞每隔48~72h换液1次, 细胞浓度2×105/ ml常规传代培养。

  1.4.3  CCK-8法检测细胞增殖活性  实验按CCK-8试剂盒说明书操作,主要包括取对数生长期细胞,将每孔6×103个PRMI8226细胞接种于96孔培养板中,24h后于96孔培养板分别加入0、1.5、3.0、5.0mg/ml的槐耳浸膏,每组6复孔,继续培养24h、36h、48h后,每孔加入CCK-8溶液10μl,微振荡后37℃继续孵育1~2h,酶标仪测OD 450nm值。生长抑制率计算公式:生长抑制率(%)=(1-实验组平均吸光度/细胞对照组平均吸光度)×100%。

  1.4.4  流式细胞术检测细胞凋亡  用AnnexinV/PI方法检测细胞凋亡,检测方法参照试剂盒说明书进行。设立1个对照组和3个药物浓度组,每组浓度分别为0、1.5、3.0和5.0mg/ml。不同浓度药物与PRMI8226细胞共同培养48h,每组收集1×106个细胞;将细胞悬于1:4稀释(50ml buffer +150ml蒸馏水)的binding buffer液中,重悬细胞,并调整细胞流式细胞仪检测细胞敏感浓度 2-×105/ml,取195μl细胞悬液加入5μl BTV-HbC3上机检测在24h、36h、48h时的凋亡百分率。

  1.5  统计学方法  采用SPSS11.0软件。所有数据以x±s表示。组内比较采用单因素方差分析和t检验。组间比较采用双因素可重复数据方差分析。

  2  结果

  2.1  PRMI8226细胞增殖抑制情况  图1所示槐耳浸膏对PRMI8226细胞的增殖具有明显的抑制作用。5.0、3.0、1.5mg/ml槐耳浸膏对PRMI8226细胞作用48h时生长的抑制率分别为84.3%、67.9%、25.8%,并且随着槐耳浸膏浓度的增加和作用时间的延长, 其对PRMI8226细胞的增殖抑制率逐渐增高,除24h外,同一时间不同浓度各组比较(P<0.01),除1.5mg/ml外,同一浓度不同作用时间各组比较(P<0.01)。见图1和图2。

  图1  槐耳对PRMI8226细胞的增殖抑制率(略)

  图2  槐耳对PRMI8226细胞凋亡率影响(略)

  2.2  PRMI8226细胞凋亡情况  AnnexinV-FITC/ PI双染色后经流式细胞仪行细胞凋亡计数, PRMI8226细胞经1.5~5.0mg/ml槐耳浸膏作用24~48h后,细胞凋亡结果显示1.5~5.0mg/ml槐耳浸膏在一定时间范围内, 诱导PRMI8226细胞的作用随药物浓度及作用时间的增加而增强, 呈明显的时间和浓度依赖性, 除24h外,同一浓度不同作用时间各组比较(P<0.001),同一时间不同浓度各组比较(P<0.01),见图2。

  3  讨论
   
  多发性骨髓瘤是影响人类健康的恶性肿瘤之一,由于对化疗药物易产生耐药性,故临床治疗效果并不理想,因此,需要探寻新的治疗药物及治疗手段。多发性骨髓瘤既与细胞增殖过度有关,又与细胞的凋亡不足有关。本实验就是从细胞增殖和凋亡的角度着手,研究槐耳对骨髓瘤细胞株PRMI8226细胞增殖和凋亡的影响,旨在阐明其可能的作用机制。
   
  槐耳浸膏是一种新型真菌类抗肿瘤新药,由槐耳菌质经热水提取所得,含有多种有机成分和18种以上矿物质,其主要抗癌活性成分为蛋白多糖(PS-T)[6,7]。不仅能抑制肿瘤细胞的生长,促进肿瘤细胞凋亡,还可增强机体免疫力,是一种较理想的免疫增强及肿瘤抑制剂。同时,其对血管的内皮细胞构建新生血管具有抑制作用,从而可抑制肿瘤血管的生成[8,9]。因此它是一类不可多得的抗肿瘤新药。本实验探讨槐耳对骨髓瘤细胞株增殖抑制和诱导凋亡,为其应用于多发性骨髓瘤的临床治疗提供实验依据。
   
  从细胞增殖的角度着手,本研究采用CCK-8法观察了槐耳浸膏抑制PRMI8226细胞增殖的作用, 发现5.0mg/ml的槐耳浸膏能抑制细胞的增殖,48h的抑制率高达84%。且槐耳浓度越高作用时间越长,抑制增殖效果越明显,提示槐耳浸膏对骨髓瘤细胞株PRMI8226细胞的抑制作用存在明显的时间和剂量效应关系。本实验中发现不同浓度药物在短时间内(24h)时,该药不仅没有抑制作用,反而呈现促进增殖的异常作用,因此我们仍需进一步研究药物在短时间的作用机制。且低浓度时(1.5mg/ml)该药抑制细胞增殖作用随时间的延长不增强,可能与药物浓度过低有关。流式细胞术检测还发现槐耳浸膏具有诱导RMI8226细胞凋亡的能力, 并且随着槐耳浸膏浓度的升高和时间的延长, 槐耳浸膏细胞发生凋亡的比率也随之增加, 浓度为5.0mg/ml槐耳浸膏对PRMI8226细胞处理48h引起22.59%的凋亡率。
   
  综上所述, 槐耳浸膏可以抑制骨髓瘤细胞株PRMI8226细胞的体外增殖并诱导其凋亡, 因此有希望成为治疗骨髓瘤的新药物。

【参考文献】
    [1] 张玉宝,张国强,王劲松,等. 槐耳颗粒在乳腺癌综合治疗中的作用及其机制[J].中国肿瘤临床与康复,2004,11(6):512~513.

  [2] 孔庆志,卢宏达,戴观书.槐耳清膏对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549DDP逆转的实验研究[J].中国药师,2002,5(9):517~519.

  [3] 黄涛, 孔庆志, 卢宏达, 等. 槐耳清膏诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的实验研究[J]. 中华结核和呼吸杂志, 2001, 24(8):503~505.

  [4] 程若川,汤礼贵,兰丽琴.槐耳清膏诱导人直肠癌HR8348细胞凋亡的实验研究[J].中国肿瘤,2003,12(2):122~124.

  [5] 陆鹏,陈莉,陆正鑫.实验性肝癌中比较槐耳与IL-2对PTEN和IL-2R阳性细胞的影响[J].现代中西医结合杂志,2004,13(15):1982~1985.

  [6] 陈慎宝,丁如宁.槐耳菌质成分对小鼠免疫功能的影响[J].食用菌学报,1995,2(1):21.

  [7] 丁如宁,郑泉,蒋哑平,等. 槐耳清膏及其多糖对小鼠免疫功能的影响[J]. 南京中医药大学学报,1996,12:32~33.

  [8] 张芷旋,范羽,周清华,等. 槐耳清膏对人高转移大细胞肺癌细胞L9981血管生成相关基因表达的影响[J]. 中国肺癌杂志, 2006, 9(02):139~142.

  [9] 许戈良,荚卫东,马金良,等.槐耳清膏体外抑制血管生成的实验研究[J]. 中国药理学通报,2003,19(12):1410~1412.


作者单位:温州医学院附属第一医院血液科,浙江 温州 325000.


医学百科App—医学基础知识学习工具


页:
返回顶部】【打印本文】【放入收藏夹】【收藏到新浪】【发布评论



察看关于《槐耳浸膏对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响》的讨论


关闭

网站地图 | RSS订阅 | 图文 | 版权说明 | 友情链接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 医源世界 版权所有
医源世界所刊载之内容一般仅用于教育目的。您从医源世界获取的信息不得直接用于诊断、治疗疾病或应对您的健康问题。如果您怀疑自己有健康问题,请直接咨询您的保健医生。医源世界、作者、编辑都将不负任何责任和义务。
本站内容来源于网络,转载仅为传播信息促进医药行业发展,如果我们的行为侵犯了您的权益,请及时与我们联系我们将在收到通知后妥善处理该部分内容
联系Email: