具有保护肺功能的保健食品功能学检测方法的研究
摘要：摘要：目的 探讨增强肺部免疫功能和抗肺损伤的保健食品功能学检测方法, 为保健食品的监督、管理和有效开发提供科学依据。 方法 通过测定V-E、V-C和橘红浸膏等几种功能食品对肺泡灌洗液中的乳酸脱氢酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)的活性、唾液酸(SA)含量以及对肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响，判定受试物增强肺部免疫和抗肺损伤的......
摘要：目的 探讨增强肺部免疫功能和抗肺损伤的保健食品功能学检测方法, 为保健食品的监督、管理和有效开发提供科学依据。 方法 通过测定V-E、V-C和橘红浸膏等几种功能食品对肺泡灌洗液中的乳酸脱氢酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)的活性、唾液酸(SA)含量以及对肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响，判定受试物增强肺部免疫和抗肺损伤的功能。 结果 测定肺泡灌洗液中相关生化指标和肺泡巨噬细胞吞噬功能，显示V-E、V-C和橘红浸膏有抗肺损伤功能，V-E还有增强肺部免疫功能作用。 结论 测定肺泡灌洗液中生化指标和肺泡巨噬细胞吞噬功能来鉴定保健食品是否具有增强肺部免疫力和抗肺损伤功能，具有一定的可行性。
关键词：保健食品；肺损伤；肺泡灌洗液；肺泡巨噬细胞
中图分类号：R32235 文献标识码：A 文章编号：1009-9727（2005）02-200-03
Study on the techniques in determination of the functions of lungbeneflting health products ZHAO Yu-mei,HUANG Ye-yu,ZHEN Ding-xian,et al (Hainan Provincial Center for Disease Control and Prevention,Haikou 570203, Hainan,P R China)
Abstract：Objective To explore the methods for assessing the functions of that in improving the pulmonary immune function and protecting the pulmonary damage in order to promote the management,monitoring and efficient developing of the health foods Methods The levels of LDH,ACP and SA in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) as well as the phagocylic functions of alveolar macrophages (AMs) were measured to evaluate the capabilities of the health food candidates in increasing pulmonary immune function and resisting pulmonary injuries Results The action of antipulmonary injury was found in Vit-E,Vit-C and Chrysoidine extractives, as well as the effect of enhancing the pulmonary immune function in Vit E Conclusion It is possible to identify the functions of health foods in increasing pulmonary immune function and protecting pulmonary damage by measuring the biochemical indicators in BALF and the phagocylic functions of AMs
Key words：Health food; Lung damage;Alveolar macrophages
保健食品起源于我国的食疗，是中医的宝贵遗产之一，已为世界各国所公认。
我国开发的保健食品已有2000多种，多数为具有调节免疫、降脂减肥、抗疲劳、辅助抑制肿瘤等功效［1］。近些年随着工农业生产的迅速发展、交通运输业日益发达，大气环境受到额外污染物的影响，特别是大气颗粒物的污染使得呼吸系统疾病的发病率增高，儿童免疫力下降［2～3］。使在我国传统医学中许多中草药具有治疗肺热、宣肺利咽、润肺清心之功效［4］的保健食品研究开发甚为广泛。而对其功能学检测是加强监督管理、保证其质量的必要手段，目前国内对此类保健食品尚未有成熟的检测方法。为此我们对具有增强肺部免疫力、抵抗大气颗粒物对肺组织产生的损害作用的保健食品功能学检测方法进行探讨，
将对保健食品的监督管理和促进保健食品的有效开发有着重要意义。
1 材料与方法
11 受试物选择［5］ 根据资料查询选择了市售的维生素-C、维生素-E和药厂提供的橘红浸膏（化橘红、陈皮、法半夏、伏苓、桔梗、甘草等十四味中药提取液）。
12 大气颗粒物采集 委托山西医科大学环境卫生教研组完成对大气总悬浮颗粒物的采集及颗粒物冷冻干燥等置备过程。
13 实验动物 选择150g左右雄性SD大鼠，由上海必凯实验动物有限公司提供，合格证号：沪动合证字第152号。
14 剂量设计 维生素-C人体日推荐量300mg/60kg体重, 维生素-E为250mg/60kg体重, 橘红浸膏为1800mg/60kg体重。实验设低、中、高三
剂量组，相当于人体推荐量的5、10和30倍。即V-C为25mg、50mg、150mg/kg体重，V-E为21mg、42mg、125mg/kg体重;橘红浸膏为150mg、300mg、900mg/kg体重。
15 方法 每个样品设三个剂量组、同时设空白对照组和模型对照组，每组8只大鼠。受试物经口灌胃（灌胃容量为1ml/100g体重），连续给予30d，空白对照组和模型对照组仅以溶剂灌胃。
151 抗肺损伤作用 于第30d除空白对照组外，大鼠乙醚麻醉，经气管注入大气颗粒物混悬液（按75mg/kg体重，015ml/100g体重），24h后腹腔注射2％戊巴比妥钠25ml，待大鼠麻醉后腹主动脉放血处死，剥离心肺按Myrvik法以生理盐水对全肺进行灌洗。每次5ml共15ml，回收率85％以上。收集灌洗液离心（2000r/m，10min），取上清液检LDH、ACP和SA。
152 增强肺部免疫力作用 不设模型对照组。于第30d大鼠按Myrvik法对大鼠全肺进行灌洗。将灌洗液离心（2000r/m，10min），弃去上清液用含10％牛血清的RPMI-1640培养液将沉底细胞稀释成2×106/ml备用。取白色念珠菌24h培养物用含10％牛血清的RPMI-1640培养液配置成1×107/ml菌悬液。取细胞悬液和菌悬液各1ml 混合，37℃温箱静置培养1h，以1000r/m的速度离心5min，弃上清液，余约03ml液体，用吸管充分混匀，取培养物和002％的冰冷美兰染液各一滴于玻片上、混匀，加盖玻片静置5min，高倍镜下观察100个肺泡巨噬细胞并按以下公式计算肺泡巨噬细胞吞噬率和吞噬指数。
噬菌率（％）=（噬菌细胞数/观察细胞数）×100
吞噬指数=被吞细菌数/噬菌细胞数
16 阳性结果判断标准 若肺泡灌洗液中生化指标两项（或两项以上）与模型对照组比较，酶活性降低并有统计学意义可判定受试物具有抗肺损伤作用，若吞噬率或吞噬指数有两个（或两个以上）剂量组明显高于对照组并有统计学意义可判定受试物具有增强肺部免疫力的作用。
17 统计处理 全部数据均采用SPSS软件包进行统计处理。
2 结果
21 抗肺损伤作用 检测肺灌洗液中LDH、ACP和SA活性以评价V-C、V-E和橘红浸膏灌胃后抗肺损伤的效果，结果见表1～3。
表1 V-C对大鼠肺灌洗液中生化指标的影响 (略)
Table 1 Effects of V-C on biochemical indicators in BALF in rats
注：和分别表示与模型对照组比较P＜005和001,以下各表类同
表2 V-E对大鼠肺灌洗液中生化指标的影响 (略)
Table 2 Effects of V-E on biochemical indicators in BALF in rats
表3 橘红浸膏对大鼠肺灌洗液中生化指标的影响 (略)
Table 3 Effects of Chrysoidine extractives on biochemical indicators in BALF in rats
给药后，各样品对大鼠体重无明显影响。染尘后V-C、V-E和橘红浸膏低、中、高三个剂量组肺泡灌洗液中LDH活性明显降低，与模型对照组比较P＜005或001，与空白对照组比较P＞005; V-C、橘红浸膏中、高剂量和V-E低、中、高三个剂量组可使肺泡灌洗液中ACP活性明显降低，与模型对照组比较P＜005或001，与空白对照组比较P＞005;V-C、V-E和橘红浸膏虽可使肺泡灌洗液SA含量降低，但与模型对照组比较差别无显著性。根据判断标准V-C、V-E和橘红浸膏具有抗肺损伤作用。
22 增强肺部免疫力作用 V-E三个剂量组和V-C高剂量组使肺泡巨噬细胞吞噬率明显增强，与对照组比较P＜001或005;V-C、V-E和橘红浸膏对吞噬指数无明显影响。根据判断标准V-C和V-E具有增强肺部免疫力作用，结果见表4。
表4 V-C、V-E和橘红浸膏对大鼠肺灌洗液吞噬率与吞噬指数的影响 (略)
Table 4 Effects on phagocylic functions of AM in rats
3 讨论
LDH为胞浆酶，当膜通透性增加或细胞死亡溶解时LDH大量释放，使细胞外液中LDH活性增加，膜通透性的改变是很多毒物作用于细胞膜的
早期反应。ACP和AKP均为溶酶体酶，它参与防御肺部感染，在肺泡巨噬细胞中特别活跃。如肺泡巨噬细胞受到刺激或受到毒物的影响，溶酶体数量增多，肺泡巨噬细胞吞噬活跃或中毒死亡使ACP大量溢出。SA 的变化
迟，SA对生物膜结构与稳定性起着很重要的作用，肺泡灌洗液中SA含量增高提示细胞生物膜的完整性受到损害 、大量细胞死亡溶解，所以它是细胞受损严重的指标［6］，因此Henderson等人建议支气管肺泡灌洗液中生化指标和细胞成份的分析可做为探测肺组织细胞早期损伤的手段［7］。大气颗粒物是一种化学成份复杂、含有大量有毒重金属和多环芳烃类物质。它可引起组织细胞的脂质过氧化反应［8］。V-E、V-C是天然的抗氧化物质，具有防止氧自由基产生脂质过氧化物及多种介质作用［9］。实验结果显示V-E、V-C可降低由于大气颗粒物致肺细胞损伤所导致的LDH、ACP的活性，说明V-E、V-C对肺组织具有一定的保护作用。橘红浸膏是由十四种中草药浸提而成，传统的中医理论认为橘红、茯苓、法办夏、石膏、桔梗、甘草等均归肺经、具有治疗肺热、宣肺利咽、润肺清心之功效［4］。实验结果显示具有抗肺损伤作用是否与其中医理论有一定的联系，有待于进一步探讨。肺泡巨噬细胞在肺脏清除吸入的异物和抵抗有害微生物侵袭方面有及其重要的作用，此外肺泡巨噬细胞通过抗原的摄入、加工、传递等功能参与全身的免疫反应［10］。吞噬作用是肺泡巨噬细胞的基本功能，检测肺泡巨噬细胞吞噬功能是对其功能测试的主要手段，通常是测定吞噬率和吞噬指数。V-E给药后低、中、高三个剂量组均可使肺泡巨噬细胞吞噬率增高，说明V-E对增强肺组织细胞免疫力有一定的作用。本次实验结果表明利用肺泡灌洗技术测定肺泡灌洗液中生化指标和肺泡巨噬细胞吞噬功能来鉴定“具有增强肺部免疫力和抗肺损伤功能的保健食品”具有一定的可行性，对于此类保健食品的开发和监督检测提供科学依据。
参考文献：
［1］ 李新兰，未健如，李汉帆保健食品开发及应用［M］第一版武昌华中理工大学出版社，1999，4
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［4］ 江苏医学院中药大辞典［M］第一版上海上海科学社1977，10
［5］ 陈建国微量元素与肺癌［J］国外医学(卫生学分册)1994，21(6):50
［6］ 赵毓梅，扬文敏，雷玲大气粗细颗粒物致大鼠肺损伤的比较研究［J］卫生毒理学杂志1996，10(1):13
［7］ Henderson RF， Rebar AHEarly Dange Zndicators in the LungToxicol Appl Pharmacol 1970，50:123
［8］ 赵毓梅，扬文敏大气粗细颗粒物成分分析及其肺毒性研究［J］卫生研究1995，25(2):89
［9］ 赵毓梅，赵五红，李秋营，等大气总悬浮合理物的肺毒性抗毒性实验研究［J］环境与健康杂志1998，15(1):1
［10］ 周健，徐英含铅离子在体外对肺泡巨噬细胞免疫功能的影响［J］中华劳动卫生与职业病杂志1986，4(3):180
作者单位：海南省疾病预防控制中心，海南 海口 570203
作者简介：赵毓梅（1662～）女，医学硕士，主任医师，1985年以来一直从事卫生毒理包括食品毒理、环境毒理等研究
发布日期：2006-12-19
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