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妊娠和分娩中子宫平滑肌及胎盘内皮素受体A表达的初步探讨

来源:滨州医学院学报 作者:刘志强 王豫黔 张洪涛 2006-12-20
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摘要: 【摘要】 目的 探讨临产前、后子宫平滑肌细胞及胎盘滋养细胞内皮素受体A(ETA)的表达变化。方法 应用免疫组化方法结合计算机图像分析技术分析60例足月妊娠剖宫产产妇子宫下段平滑肌细胞及胎盘滋养细胞ETA的表达,观察临产前、后两组的表达强度。结果 临产组子宫平滑肌细胞及胎盘滋养细胞ETA的表达显著强于未临产组,差异有......


  【摘要】  目的  探讨临产前、后子宫平滑肌细胞及胎盘滋养细胞内皮素受体A(ETA)的表达变化。方法  应用免疫组化方法结合计算机图像分析技术分析60例足月妊娠剖宫产产妇子宫下段平滑肌细胞及胎盘滋养细胞ETA的表达,观察临产前、后两组的表达强度。结果  临产组子宫平滑肌细胞及胎盘滋养细胞ETA的表达显著强于未临产组,差异有显著意义(P<001)。结论  ETA可能通过参与调节子宫平滑肌收缩和局部前列腺素的合成参与分娩发动。

  【关键词】  分娩发动;内皮素受体;免疫组化

  Expression of ETA in myometrium and placenta during pregnancy and parturition

  LIU Zhiqiang  WANG Yuqian  ZHANG Hongtao

  Department of Obstetrics & Gynecology,Affiliated Hospital of Binzhou Medical College,Binzhou 256603

  【Abstract】  Objective  To study the expression  of endothelin receptor A (ETA) in myometrium and placental trophoblastic cells before and after labor onset.Methods  Sixty women at term pregnancy were devided into two groups according to whether they were in labor or not.Both groups included thirty women and they were all delivered by cesarean section.Expression of ETA in myometrium and placental trophoblastic cells were detected by immunohistochemical SABC method and computerized quantitative image analysis.Results  The expression of ETA in myometrium and placental trophoblastic cells in the group at labor onset was  significantly higher than that in the group not at labor (P<001).Conclusion  ETA may be involved in the initiation of parturition by regulating the contraction of myometrium and improving prostaglandins level.

  【Key words】  labor onset,endothelin receptor A,immunohistochemistry

    分娩发动的研究至今备受关注,体外实验显示内皮素1(ET1)与内皮素受体A(ETA)结合后可刺激妊娠子宫平滑肌收缩并具有增加子宫平滑肌及蜕膜等组织合成前列腺素类物质的作用[1,2],但有人观察到,在整个妊娠期虽然测得ETA的mRNA转录水平增加了4~5倍,而ETA在总的绒毛组织和单个的滋养细胞表达的蛋白水平却呈下降趋势[3]。因此,本实验对照研究了临产前、后子宫平滑肌和胎盘组织ETA的表达,并分析其与分娩发动的关系。

  1  资料与方法

  1.1  研究对象 

  选取遵义医学院附属医院产科2002年10月至2003年5月期间足月妊娠(37~41周)、剖宫产产妇60例,临产组及未临产组各30例。分类标准如下:①未临产组:孕妇无阵痛,胎心电子监护仪显示无宫缩,肛查宫口未开。②临产组:自然临产,胎心电子监护仪显示有规律宫缩,肛查或阴道检查宫口扩张≥2 cm。两组产妇均无妊娠并发症及合并症;标本采集前均无特殊用药。

  12  标本采集 

  ①术中胎儿娩出后、宫体及全身应用宫缩剂前,切取子宫横切口上缘小块平滑肌组织约1 cm×1 cm×05 cm;胎盘娩出后立即在母体面中央及边缘部各剪取组织一块,处理至1 cm×1 cm×05 cm;②将所取子宫平滑肌和胎盘组织用生理盐水充分洗净,中性甲醛固定24 h,梯度酒精脱水,二甲苯透明,62℃浸蜡,常规石蜡包埋。连续切片,切片厚4~6 μm,标记后4℃冰箱保存待测。

  1.3  实验方法 

  以免疫组化SABC法测定子宫平滑肌和胎盘滋养细胞ETA的表达。第一抗体ETA兔抗人多克隆抗体由天津灏洋生物制品科技有限公司提供,即用型SABC免疫组化染色试剂盒由武汉博士德公司提供,按说明书指示操作。免疫组化染色结果判定:光镜下胞膜、胞浆内有棕黄色颗粒为阳性,阳性细胞必须结构清晰、定位好。计算机图像分析采用15400计算机图像分析仪(四川大学提供),每张子宫平滑肌切片随机选取10个视野,测定平均灰度值,代表子宫平滑肌ETA的表达强度。胎盘切片测定阳性细胞率(阳性细胞总面积/总扫描面积),分别代表子宫平滑肌细胞及胎盘滋养细胞ETA的表达强度和范围。

  1.4  统计学分析 

  所有数据用SPSS 115统计学软件包处理。采用t检验或t'检验,结果以x±s表示。

  2  结果

  2.1  光镜所见 

  光镜下可见ETA在子宫平滑肌细胞胞浆和胞膜表达,呈棕黄色颗粒。临产组阳性着色明显强于未临产组,且视野中着色范围亦较未临产组广。两组胎盘绒毛滋养细胞均有ETA阳性染色,ETA定位于合体滋养细胞、细胞滋养细胞及间质细胞;阳性颗粒分布于胞膜、胞浆。临产组染色强度及阳性细胞分布范围均大于未临产组。

  2.2  计算机图像定量分析结果 

  临产前、后两组子宫平滑肌切片扫描视野ETA平均灰度值比较,差异有显著性,P<001。两组胎盘组织切片扫描视野阳性细胞率比较,差异有显著性,P<001。有关结果见表1。表1  临产前、后子宫平滑肌及胎盘ETA表达的比较(略)

  3  讨论

 研究表明,内皮素(ETs)及其受体广泛分布于人体组织和体液中,而胎儿胎盘单位是内皮素浓度最高的部位[4]。内皮素可以使血管平滑肌及非血管平滑肌如子宫平滑肌产生强有力的收缩。它对子宫平滑肌的收缩作用是由相应受体介导的,其受体因其生物学特性的不同而分为ETA和ETB两种。现已证实在孕期子宫局部发挥作用的主要是ET1,其相应受体为ETA[5]。ET1和ETA结合后可通过激活蛋白激酶C(PKC)引起Ca2+内流[6],从而使得子宫平滑肌细胞内Ca2+浓度升高,引起子宫平滑肌强有力的收缩。

  本实验对正常足月孕妇子宫平滑肌及胎盘组织上ETA的表达进行测定,以计算机图像分析技术将染色结果量化后发现,在子宫平滑肌细胞,临产组ETA表达明显高于未临产组(P<001)。证明无论子宫平滑肌细胞还是胎盘滋养细胞,临产组ETA表达均明显强于未临产组。本实验结果提示,临产后子宫平滑肌ETA的大量表达为ET1提供了结合位点,显示了ETA的表达增强是子宫平滑肌向分娩状态转换中的特征性改变之一,也证明ET1直接参与调节分娩期子宫平滑肌的收缩。而临产后胎盘绒毛滋养细胞ETA阳性颗粒明显增加,说明胎盘绒毛滋养细胞也是ET1的作用部位。考虑到在妊娠子宫蜕膜细胞中ET1可刺激磷酸肌醇水解增强及花生四烯酸释放增加,使前列腺素合成增加[2],推测胎盘滋养细胞亦可能具有类似机制,亦为临产后前列腺素合成并输送到子宫平滑肌局部的源头之一,输送方式则可能是自分泌或旁分泌。因此认为,子宫平滑肌和胎盘滋养细胞ETA的表达增强在子宫肌向分娩状态的转换中发挥了重要作用,有效介导了子宫平滑肌的收缩,甚至可能参与了分娩的发动。

  参  考  文  献

  1. Dallot E,Pouchelet M,Gouhier N,et al.Contraction of cultured human uterine smooth muscle cells after stimulation with endothelin1[J].Biol Reprod,2003,68(3):937

  2. Schrey MP,Hare A.Endothelin1 stimulates phosphalipid hydrolysis and prostaglandin F2 alpha production in primary human deciduas cell cultures[J].Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids,1992,47:321

  3. Cervar M,Huppertz B,Barth S,et al.Endothelin A and B receptors change their expression levels during development of human placental villi[J].Placenta,2000,21(5-6):536

  4.曹泽毅.中华妇产科学(上册)[M].北京:人民卫生出版社,1999.222

  5. Heluy V,Germain G,Fourneir T,et al.Endothelin  A receptors mediate human uterine muscle contraction[J].Eur J Pharmacol,1995,285(1):89

  6. Eude Ⅰ,Paris B,Cabrol D,et al.Selective protein kinase C isoforms are  involved in endothelin1induced human uterine contraction at the end of pregnancy[J].Biol Reprod,2000,63(5):1567

  1 滨州医学院附属医院妇产科  滨州市  256603;2 贵州省遵义医学院附属第五医院妇产科(珠海)

  (收稿日期:20050809)   


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