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张俊松 ,王晓利 ,罗 谦 ,杨汝德 :不同产地贯叶连翘中金丝桃素和伪金丝桃素的含量分析

来源: 作者:张俊松 ,王晓利 ,罗 谦 ,杨汝德 2006-9-19
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摘要: 2.华南理工大学,广东广州510641)贯叶连翘HypericumperfomatumL,又称贯叶金丝桃,为藤黄科金丝桃属的多年生草本,以全草人药,其味苦、辛,性平,功能清心明目、调经活血、止血生肌、解毒消炎。金丝桃属植物含有多种类型的化学成分,其中主要成分为金丝桃素(hypericin)和伪金丝桃素(pseudohypericin),具有抗病毒、抗抑......


(1.深圳职业技术学院,广东深圳  518055;  2.华南理工大学,广东广州  510641)
    贯叶连翘Hypericumperfomatum L,又称贯叶金丝桃,为藤黄科金丝桃属的多年生草本,以全草人药,其味苦、辛,性平,功能清心明目、调经活血、止血生肌、解毒消炎。金丝桃属植物含有多种类型的化学成分,其中主要成分为金丝桃素(hypericin)和伪金丝桃素(pseudohypericin),具有抗病毒、抗抑郁、抗肿瘤等药理活性,已成为当今世界上新药研究最热门的课题之一。该属植物是世界上分布最广的天然植物,共有400余种,我国有55种,8个亚种川,主要分布在西北、西南等地区。我国对贯叶连翘有效成分的研究和应用属于起步阶段,目前仅将金丝桃素含量大于0.3%的贯叶连翘提取物出口,且提取物中金丝桃素含量相差较大,而原药材的有效成分含量差别较大是原因之一。目前对不同产地市售贯叶连翘的质量评价未见报道。笔者采用高效液相色谱法(HPLC法)测定了我国陕西、四川、甘肃等地市售贯叶连翘中金丝桃素和伪金丝桃素的含量,为评价其药材质量提供了依据。
1  仪器与试药
    美国Agilent 1100型高效液相色谱仪(含四元梯度泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Chem Station色谱工作站)。所用药材购于不同产地,购于陕西的4批次样品编号为1.4,购于甘肃的2批次样品编号为5—6,购于四川的3批次样品编号为7—9,购于广西的l批次样品编号为lO,均系盛花期药材。原植物均经深圳市药品检验所熊英主任药师鉴定为Hypericum performatum L。取贯叶连翘顶端30 am部分用于含量测定。金丝桃素对照品(瑞士Alexis Biochemicals公司,纯度>99.0%):伪金丝桃素对照品(美国Chroma Dex公司,纯度为98.55%);甲醇为色谱纯(Merck公司);水为超纯水(Labeonco Water Pro PS纯水仪制得,并过O.45 μm水系微孔滤膜),磷酸氢二钠、磷酸为分析纯。
2  方法与结果
2.1  色谱条件
色谱柱:依利特Kromasil C.s柱(200 mm x4.6 mm,5 Ixm);流动相:甲醇一O.006mol/L磷酸氢二钠(87.5:12.5,y/y,用磷酸调节pH值至6.5);检测波长:590nm;流速:1.0mL/min;柱温:30℃。
2.2  溶液制备
    分别精密称取金丝桃素对照品O.95 mg,伪金丝桃素对照品1.19mg,各置5mL棕色量瓶中,加甲醇超声溶解并稀释至刻度,摇匀制得浓度为o.19 mg/mL的金丝桃素对照品贮备液和浓度为0.238 mg/mL的伪金丝桃素对照品贮备液。分别精密量取100 IxL和200 μL,加至2 mL棕色量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制成含9.5μg/mL金丝桃素和23.8μg/mL伪金丝桃素的对照品溶液。取贯叶连翘药材,粉碎,过80目筛,混匀后精密称取200 mg,置50 mL量瓶中,加适量甲醇,超声处理l h溶解,加甲醇稀释至刻度,摇匀,经0.20 Ixm PTFE滤膜过滤,取续滤液,即得供试品溶液。
2.3  方法学考察
    标准曲线绘制:分别精密吸取一定量的系列金丝桃素和伪金丝桃素对照品溶液,自动进样,注入高效液相色谱仪,测定金丝桃素和伪金丝桃素峰面积,以峰面积值(A)为纵坐标、金丝桃素含量(C金,μg)或伪金丝桃素含量(C 伪,μg)为横坐标绘制标准曲线,计算后分别得回归方程为A金=2484.5C金一2.7569,r=O.9999n=7);A伪=l610.1 C伪一2.046 8,r=0.999 9(n=7)。表明金丝桃素含量在O.009 5一O.285μg,伪金丝桃素含量在0.023 8一O.476μg范围内与峰面积值呈良好的线性关系。
    精密度试验:分别取金丝桃素和伪金丝桃素对照品溶液20 lLL和10 μL,重复进样5次,计算金丝桃素和伪金丝桃素含量。结果的RSD均为O.2%(n=5)。    重现性试验:称取同一份贯叶连翘药材,按照供试品溶液制备方法平行制备待测溶液5份,每次进样20 μL。结果金丝桃素和伪金丝桃素平均含量分别为o.068%和0.126%,RSD分别为1.5%和1.9%(n=5)。
    稳定性试验:将同一供试品溶液置棕色瓶中,室温下放置。于O,2.5,5,7.5,10,24 h时分别进样20 μL。结果金丝桃素和伪金丝桃素含量的RSD分别为2.1%和1.5%(n=6),表明供试品溶液中金丝桃素和伪金丝桃素在24 h内基本稳定。
    加样回收试验:称取已知金丝桃素和伪金丝桃素含量的同一药材粉碎样品各5份,每份200 mg,精密称定,分别精密加入金丝桃素、伪金丝桃素对照品贮备液(浓度分别为0.19 mg/mL和0.238 mg/mL)500 μL或250 μL,按供试品溶液制备方法制备,进样20 μL,计算回收率。结果见表l。
2.4  样品含量测定
    取贯叶连翘药材样品1—10号,按供试品溶液制备方法处理制得样品溶液,每个样品平行制备3份溶液,注入高效液相色谱仪,进样20 μL。同时分别取金丝桃素和伪金丝桃素对照品溶液进样20 μL,按照上述条件测定,以外标一点法计算样品中金丝桃素和伪金丝桃素的含量。色谱图见图l,结果见表2。
3  讨论
3.1  通过试验考察了不同购买地贯叶连翘药材中有效成分金丝桃素和伪金丝桃素的含量,可看出各地样品的有效成分含量存在一定差异,其中有的差异还较大。根据测定结果,西北地区的贯叶连翘优于其他地区,主要原因是药材中次生代谢产物含量与多种因素有关,如海拔高度、生长环境、光照、水分、土壤肥沃程度以及贮运等。本结果为制订贯叶连翘药材质量控制标准提供了重要依据,建议对药材实施购前含量测定。
3.2  贯叶连翘有效成分金丝桃素和伪金丝桃素主要集中在花中,本试验所采用的药材选自贯叶连翘顶端30 cm部分,所得药材有效成分的含量较高。故采购时可不必采购全草,以减少运输和贮存成本。金丝桃素和伪金丝桃素为光敏剂,对光、热及氧不稳定,因此在药材采购、运输及贮存过程中应尽量避免高温、高热、阳光照射等。
3.3  所有产地的贯叶连翘中伪金丝桃素含量均高于金丝桃素含量,建议关注伪金丝桃素的开发研究。


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