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烫伤豚鼠痂下水肿液收集动物模型的建立

来源:中华整形烧伤外科杂志 作者:杨磊李宾周一平 2004-10-14
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摘要: 皮肤烧伤后皮下组织可形成水肿,水肿回吸收后可产生轻重不同的全身中毒症状,而伤后早期切痂,去除大量坏死组织和痂下水肿液后患者病情可转趋平稳,这种现象提示水肿液有损伤作用。迄今为止,国内外关于痂下水肿液的研究较少。对于实验研究来讲,能够顺利地收集到痂下水肿液是实验得以进行的关键。我们在参阅国内外文献的......


  皮肤烧伤后皮下组织可形成水肿,水肿回吸收后可产生轻重不同的全身中毒症状,而伤后早期切痂,去除大量坏死组织和痂下水肿液后患者病情可转趋平稳,这种现象提示水肿液有损伤作用。迄今为止,国内外关于痂下水肿液的研究较少。对于实验研究来讲,能够顺利地收集到痂下水肿液是实验得以进行的关键。我们在参阅国内外文献的基础上制作了豚鼠烫伤后痂下水肿液收集的动物模型。

  1 材料和方法

  1.1 实验动物:豚鼠,雌雄不拘,体重(250±20)g,由南方医院动物所提供,喂养1周后使用。

  1.2 手术器械:常规手术器械若干套,高压消毒后使用。

  1.3 滤网:广州市红新医药塑料制品有限公司提供的输血器,动物手术时在超净台上无菌条件下除去滤网外塑料修剪滤网成所需形状。

  1.4 Oposite伤口喷雾胶:英国Smith and Nephew Medical Limited产品。

  1.5 动物模型制作

  依公式S(cm2)=KW(g)2/3K=9.85[1]计算出体重250g的豚鼠的体表面积,算出烫伤30%的面积(长×宽)。在可放置于水浴锅中的木板上按30%的面积(长×宽)掏空,以备烫伤动物时用。

  豚鼠用10%硫化钠脱背部毛发,腹腔注射0.6%戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后,置动物于超净台进行手术。豚鼠右侧卧位于手术盘中,以碘酒、酒精消毒术野皮肤,铺无菌洞巾,在左侧腰部剪开皮肤长约0.3cm,显露筋膜层。无菌镊提起切口边缘,小弯钳从切开处伸入皮下,沿躯体横轴方向钝性分离皮肤形成6cm×2cm的腔隙,将修剪好的滤网埋入腔中,其引流管口朝下,开口处用无菌塑料套套上封口,仔细缝合皮肤切口,尤其要注意引流管周围皮肤切口的缝合,用Opsite胶在切口周围喷雾,形成一层薄膜,保护创口,手术完成。随即烫伤动物,将术后动物背部浸入盛有100℃沸水中15秒,致TBSA30%烫伤,病理证实烫伤深度为Ⅲ度。烫伤部位用湿盐水纱布降温,腹腔注射生理盐水(4ml/100g体重)抗休克,单笼喂养,自由进食水,按时相点收集水肿液标本时,严格无菌操作。标本收集后再用Opsite胶封闭引流管口,饲养间地面用1%戊二醛消毒,空气用紫外线消毒,2次/日,维持室内温度在28~30℃。对照组动物,单纯手术埋网后不行烫行,术后72h内观察组织液渗出情况。

  2 结果

  动物烫伤后,伤后6,8,16,24,48,72h均可收集到水肿液。每个时相点可收集到0.4~1.0ml可供分析标本。伤后8~24h水肿液的量逐渐增加,24h量最多,平均1ml,此后呈下降趋势,72h平均为0.4ml。对照组动物单纯埋管后不烫伤,伤后各时相点均未收集到组织液。

  3 讨论

  为了研究痂下水肿液,Fadnes和Aukland等[2]最早用皮下埋置尼龙虹吸管的方法收集烫伤大鼠组织液,但方法复杂而且收集量太少,约5~10μl,难以进行多项分析。本动物模型中采取皮下埋网,动物皮下埋置无毒性的医用输血器滤网后,滤网孔较大,1平方厘米内有900孔,红细胞、白细胞血小板等均可通过网眼,因此血液中各种成份均可自由地通过滤网壁,不影响水肿液生成和回吸收,各时相点抽取水肿液可较准确地反映当时痂下组织的情况。手术创伤小,试验中动物单纯埋网后3天内观察动物,精神状态良好,滤网内抽不出组织液,而动物埋网烫伤后,各时相点均可从滤网中抽出水肿液,说明其产生是由于烫伤的作用引起。抽取标本时用碘酒,酒精消毒开口处抽空标本后用Opsite胶喷雾封闭开口处,减少了污染,标本抽取方便。我们用本法收集痂下水肿液,先后完成8批动物共200只,均稳定可靠地收集到了足够实验用的标本。

  参考文献

  1 Walker M.A Standard animal model.J Trauma,1964,8:1045-1052.

  2 Fadnes HO,Aukland K.Protein concerntration and colloid osmotic pressure of intersititial fluid collected by the wick technique.Analysis and evaluation of the method.Microvas Res,1977,14:11-25.


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