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一氧化氮在胃癌进展中的作用

来源:中国普通外科杂志 作者:邹益友冯德云伍赶球郑晖 2004-10-12
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摘要: 【摘要】目的探讨一氧化氮(NO)在胃癌发病过程中的作用。方法42例经胃镜活检、病理检查证实为胃癌,采用地高辛标记的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA探针经原位杂交显示细胞内的iNOSmRNA的表达情况,并与癌周组织及浅表胃炎组织比较。结果在42例胃癌患者,iNOSmRNA信号强阳性(+++)11例,中度阳性(++)14例,低度......


  【摘要】 目的 探讨一氧化氮(NO)在胃癌发病过程中的作用。方法 42例经胃镜活检、病理检查证实为胃癌,采用地高辛标记的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA探针经原位杂交显示细胞内的iNOSmRNA的表达情况,并与癌周组织及浅表胃炎组织比较。结果 在42例胃癌患者,iNOSmRNA信号强阳性(+++)11例,中度阳性(++)14例,低度阳性(+)13例,可疑阳性(±)3例,阴性(-)1例;在癌周组织多为(±)或(-);与浅表性胃炎相比,差异有高度显著性(P<0.01)。结论 大多数胃癌患者的癌细胞内iNOSmRNA表达阳性,提示胃癌细胞自身能产生一氧化氮。

  【中国图书分类号】:R735.2 R730 R61

  一氧化氮(NO)是生物体内近年来颇受关注的信息传递小分子,并与许多疾病发生发展过程有关。由于NO可引起DNA的损伤,导致基因突变,其氧化代谢产物亚硝酸盐(NO-2)是一个公认的致癌剂,加之在萎缩性胃炎(易发展为胃癌)观察到随着萎缩程度的加重胃液中NO-2显著增加,因此,在胃癌发生过程中可能包含NO机制[1]。目前认为,胃粘膜内NO来源于巨噬细胞和多形核白细胞[2],而胃癌细胞自身能否产生NO尚不清楚。鉴于一氧化氮合酶(NOS)是形成NO的关键限速酶,为此,我们观察了胃癌细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA(信使核糖核酸)的表达情况,现报告如下。

  1 材料和方法

  1.1 材料及分组

  (1)胃癌组 42例,均经胃镜检查及病理检查证实为胃癌。男20例,女22例,平均年龄49.9±13.5岁(26~72岁)。病理组织学类型:低分化腺癌28例(66.7%),印戒细胞癌5例(11.9%),中、高分化腺癌3例(7.1%),高分化腺癌2例(4.8%),低、未分化腺癌1例(2.4%),未分化腺癌1例(2.4%),中、低分化腺癌1例(2.4%),中、中分化腺癌1例(2.4%)。

  (2)浅表性胃炎组 44例,均经胃镜检查及病理检查证实。男26例,女18例,平均年龄45.4±11.2岁(18~64岁)。与胃癌组比较,性别、年龄均无显著性差异(P>0.05)。

  1.2 试剂

  地高辛配基标记的iNOSmRNA试剂盒系武汉博士德公司产品,蛋白酶K系德国E.Merck公司产品。

  1.3 方法

  1.3.1 iNOSmRNA原位杂交 按如下步骤进行:①石蜡切片常规脱蜡至水,3%H2O2室温处理10min以灭活内源性过氧化物酶;②切片滴加25mg/L的蛋白酶K,37℃消化15min,以暴露mRNA;磷酸盐缓冲液(PBS)清洗5min×3次;③杂交前的处理及杂交:将地高辛标记探针放入80~90℃水中变性10min,取出后立即插入碎冰中,保持3min。切片空气中干燥后,按每张切片加10μl地高辛记探针液,加盖杂交专用盖玻片,于37℃湿盒中杂交16~24h;④杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃2倍柠檬酸钠氯化钠缓冲液(2×SSC)洗涤5min×2次;37℃的0.1×SSC洗10min×1次,洗涤时间应予严格控制;⑤滴加封闭液,室温孵育20min,不洗;⑥滴加封闭液,室温孵育20min,不洗;⑦滴加鼠抗地高辛抗体于37℃温箱孵育30min,0.5MPBS洗5min×3次,勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤;⑧滴加生物素化羊抗小鼠IgG于37℃温箱孵育20min,0.5MPBS洗2min×3次,勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤;⑨滴加链青素标记的过氧化物4次,勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤;⑩二氨基联苯胺(DAB)显色,充分水洗;⑦酒精脱水,二甲苯透明,封片。

  用缓冲液2×SSC代替探针作空白对照;用(RNase)37℃消化1h作阴性对照;以随试剂盒所附阳性片作阳性对照。

  1.3.2 iNOSmRNA阳性信号强度评估 采用Fromowitz等[3]染色结果参照Fromowitz等的综合计分法并稍加改进作半定量分析(附表)。阳性细胞百分比即为某类细胞观5个视野(每个视野计数100个此类细胞)的阳性细胞平均数;而着色强度则以多数阳性细胞呈现的染色特征计分。


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