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格林-巴利综合征患者血清中髓鞘脂自身抗体水平的测定

来源:临床检验杂志 作者:戚其学… 2009-2-21

摘要: 摘要应用免疫学方法检测了格林-巴利综合征(GBS)病人和正常对照组各30例的血清中髓鞘脂自身抗体含量,并进行了动态观察。结果显示,GBS病人血清中髓鞘脂自身抗体水平明显高于正常对照组(P<0。GBS患者髓鞘脂自身抗体出现的阳性率为20%。动态观察发现,GBS患者血清中髓鞘脂自身抗体水平的下降与临床症状的改善相一致。...


摘要 应用免疫学方法检测了格林-巴利综合征(GBS)病人和正常对照组各30例的血清中髓鞘脂自身抗体含量,并进行了动态观察。结果显示,GBS病人血清中髓鞘脂自身抗体水平明显高于正常对照组(P<0.01)。GBS患者髓鞘脂自身抗体出现的阳性率为20%。动态观察发现,GBS患者血清中髓鞘脂自身抗体水平的下降与临床症状的改善相一致。

Serum level of anti-myelin sheath antibody in patients with Guillain-Barre syndrome

  qI Qixue,LI Yufen(Laboratory of Neurology,The First Clinical college,China Medical University,Shenyang 110001)

  Abstract To determine the serum anti-myelin sheath antibody in 30 patients with guillain-Barre syndrome and 30 healthy subjects.A dynamic observation was performed in 5 patients with GBS.The result showed that the serum antimyelin sheath antibody increased signiflcantly in patients with GBS,compared with normal control(P<0.01).The positive rate of serum antimyelin sheath antibody titers in GBS patients was 20%,dynamic observation shows that the decrease of serum anti-myelin sheath antibody is correlated with clinical symptomatic improvement.

  Key words Guillain-Barre syndrome; antimyelin sheath antibody

  格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)的病因及发病机制至今尚不很清楚。近年来国外学者在GBS发病机制方面作了深入研究,推测是机体对自身周围神经髓鞘的异常免疫反应所致[1,2]。在髓鞘脂自身抗体的研究方面,国外已取得了较大的进展,发现GBS患者血清中髓鞘脂自身抗体水平升高,以神经节苷脂抗体增高为主。为探讨抗髓鞘脂的自身抗体在GBS发病中的作用,我们检测了30例GBS患者血清中髓鞘脂自身抗体水平。

  1 材料与方法

  1.1 检测对象 30例GBS病人,男性17例,女性13例,年龄16~58(岁),平均年龄31±11.8(岁),全部符合Asbury1990年修订的诊断标准[3]。正常对照组系健康志愿者,共30例,男16例,女14例,年龄22~43(岁),平均年龄31.8±5.5(岁)。病人首次采血均在发病后7~15(天)进行。两组性别、年龄匹配有可比性。

  1.2 临床分级 按照Asbury 1990年修订的诊断标准将病人分为5级[3]:0级健康;1级症状、体征轻微,可行走或进行日常工作;2级可独立行走5 m;3级需扶助行走5 m;4级需卧位或卧椅;5级需辅助人工通气。

  1.3 检测方法

  1.3.1 标本采集 取GBS病人和健康志愿者静脉血各3 ml,凝固后离心2 000 r/min分离血清。将待测血清储-80°C。对30例GBS患者首次采血时间在7~8(天)内进行,其中16例住院治疗后第4周采血进行动态观察。

  1.3.2 试剂与仪器 髓鞘脂标准品(Sigma公司)、辣根过氧化物酶标记羊抗人IgM结合物(北京生物制品研究所),所用的化学试剂均为分析纯。Sigma960型酶标测定仪、波长490 nm。

  1.3.3 抗原的制备与标定 将新鲜人坐骨神经100 mg去除神经鞘膜及外周组织,装入匀浆器中,加3倍容积的蒸溜水,在冰浴中匀浆。在匀浆液中加入10倍容积的甲醇,20°C下边搅拌边注入5倍体积的氯仿。经2000 r/min离心10 min后、收集上清液。将得到的沉淀用4倍体积的蒸溜水再悬浮后加入15倍体积的氯仿-甲醇(1∶2)。此混合物再2000 r/min离心10 min,将上清液收集在一起,注入旋转蒸发器在40°C下蒸发,得到神经髓鞘脂。将其与髓鞘脂标准品分别进行稀释,进行薄层层析,用间-苯二酚染色,对提取的髓鞘脂进行标定。提取的髓鞘脂与标准品均被染色、两者位于同一高度,说明提取的人坐骨神经髓鞘脂即为髓鞘脂。其分子量为845 kD。此抗原髓鞘脂为白色板状结晶,可溶于热甲醇、热乙醇、氯仿,不溶于乙醚、丙酮。在水中形成乳浊液。

  1.3.4 髓鞘脂自身抗体的检测 提取的人坐骨神经髓鞘脂为抗原,用包被缓冲液1∶100稀释,在聚苯乙烯微量反应板的每孔加0.2 ml。4°C过夜,用洗涤液洗3次。设复孔、空白孔,每孔加入100倍稀释的待测血清0.2 ml,4°C 4 h后加入新配制的1 000倍稀释的辣根过氧化物酶羊抗人IgM结合物每孔0.2 ml,最后以0.5 mol/L H2SO4终止反应,用酶标仪测定A值。

  1.3.5 统计学方法 A值用

  2 结果

  2.1 GBS组与正常对照组血清中髓鞘脂自身抗体水平比较(

  2.2 GBS病人病症严重程度与血清中髓鞘脂自身抗体水平之间的关系,血清中髓鞘脂自身抗体水平,病情属于4~5级者(0.351±0.043)高于1~3级者(0.310±0.142)。病情重者髓鞘脂自身抗体水平高于病情轻者,但各级别间的差别不显著,无统计学意义(P>0.05)。

  2.3 患者血清中抗体值的动态变化 对30例GBS患者中的16例住院患者进行了抗体值的动态观察。患者入院首次采血后,每隔7~10(天)采血1次,计4次。结果16例中5例髓鞘脂自身抗体呈阳性者列于表1。从这5例患者抗体值的变化,发现随着临床症状的改善其抗体值的水平逐渐下降。从表1中可见第3例患者入院后肢体瘫痪加重并伴呼吸困难、抗体值上升,经治疗病情好转后抗体值又逐渐下降。

表1 血清髓鞘脂自身抗体阳性GBS病人抗体A值动态变化

  Table 1 Dynamic changes of antibody A value in GBS patients whose serum antimyelin sheath antibody in positive

Case number of times(A value)
1 2 3 4
1

  2

  3

  4

  5

0.868

  0.479

  0.302

  0.687

  0.568

0.468

  0.467

  0.490

  0.308

  0.456

0.348

  0.379

  0.248

  0.282

  0.281

0.157

  0.188

  0.149

  0.174

  0.106

  3 讨论

  本文观察到GBS病人髓鞘脂自身抗体水平增高,因而髓鞘脂自身抗体水平的检测可做为GBS诊断提供一个有意义的依据。髓鞘脂自身抗体水平在GBS病程中的动态变化,Quarles等人[4]有报告但病例不多。本文30例GBS病人中6例抗体值阳性,4例入院后随着症状的好转、肢体功能的恢复,抗体值逐渐下降;另1例随着病情先加重后好转,其抗体值在入院后先上升后下降。这提示GBS病人抗体值的变化与临床症状的改善相一致。髓鞘脂自身抗体水平变化的观测,可能对了解GBS病人的发病机理、治疗效果及预后有一定的临床意义。

  参考文献

  1 Winer J B,Hughes R A C,Osmond C.A prospective study of acute idiopathic neuropathy I.Clinical features and their prognostic value.J Neuro Neurosurg psychiat,1988,51(5):605

  2 Brosnan C F,Claudio L,Tansey F A,et al.Mechanisms of autoimmune neuropathies.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S 75

  3 Asbury A K.Guillain-Barre Syndrome:historical aspects.Ann neurol,1990,27(Suppl):S2

  4 Quarles R H,llyas A A,Willison H J.Antibodies to gangliosides and myelin protein in Guillain-Barre syndrome.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S 48



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