摘要: 随着EIA诊断试剂的发展,如何提高检测灵敏度和特异性,以达到检测准确的目的成为大家始终追求的目标。在同一检测试剂条件下,操作过程的成功与否,直接影响检测水平的发挥。因此,笔者以抗-HCV为检测项目,对全自动酶标检测系统与常规手工操作检测进行了比较,结果报告如下。1材料Microlab AT FAME全自动酶标检测系统:......
1 材料与方法
1.1 材料 Microlab AT & FAME全自动酶标检测系统:AT为全自动样品处理系统, FAME为全自动酶标板处理系统,瑞士哈美顿公司生产;常规手工操作:使用芬兰DENLEY-MK-2酶标仪、洗板机及国产恒温孵箱;抗-HCV EIA试剂盒:美国Ortho公司和国产某试剂公司生产;抗-HCV参比品:购于中国药品生物制品检定所及卫生部临床检验中心;普通样品:采用供浆者常规检测标本。
1.2 方法 用FAME系统程序和常规手工试验程序进行样品的抗-HCV检测,并对检测的精密性、特异性等指标进行综合分析比较。
2 结果
2.1 精密性比较
2.1.1 孔间精密性比较 以抗-HCV阳性血清为质控物,用Ortho抗-HCV试剂检测,分别收集全自动程序和常规程序的板内连续10孔试验质控值,计算各自的均值(
2.1.2 板间精密性比较 以抗-HCV阳性血清为质控物,用Ortho抗-HCV检测,分别收集全自动程序和常规程序的连续20板试验质控值(每板作1孔质控),求出每一质控值相对于CO值的比率,并计算20个比率值的均值、标准差、变异系数,绘制质控图(附图)。FAME系统板间精密性比手工操作提高2.2倍,同时检测质控物的OD均值也升高,反应出灵敏度高于手工操作。
—— FAME系统:
手工操作
附图 抗-HCV EIA板间精密性比较
2.2 特异性比较 用全自动程序和常规程序对中检所及临检中心的抗-HCV阴性参考品进行检测(使用国产试剂),分别计算其阴性符合率,结果见附表。用国家抗-HCV阴性参考品检测,FAME系统的检测特异性比手工操作提高3.5%。
3 讨论
本实验表明,Microlab AT & FAME系统提供了更好的酶免试验特征,与常规酶免试验相比,抗-HCV检测试验的特异性、精密性等均有程度不同的提高,且FAME系统试验的稳定性、重复性明显高于常规检测。
FAME系统曲线覆盖范围变窄,拖尾现象大大减少,提高了试验的精密性、特异性,且曲线值较常规手工检测曲线前移,说明整体的反应水平升高。分析原因:FAME系统操作程序避免了常规程序的一些局限性,试验的全过程微机化控制,使每一块板的反应条件趋于一致,消除了常规程序所固有的缺陷和人为误差;自动加样系统的加样尖具有外壁擦
附表 抗-HCV EIA试剂FAME全自动酶标系统与手工操作的特异性比较
中检所第2代Panel | 中检所第3代Panel | 临检中心Panel | 总 符 合 | |||||||||
阴性
(76) |
阳性
(71) |
总符合率
(%) |
阴性
(40) |
阳性
(40) |
总符合率
(%) |
阴性
(25) |
阳性
(25) |
总符合率
(%) |
阴性符合率
(%) |
阳性符合率
(%) |
总符合率
(%) | |
手工操作 | 69 | 70 | 94.6
(139/147) |
38 | 39 | 96.3
(77/80) |
23 | 25 | 96.0
(48/50) |
92.2
(130/141) |
98.5
(134/136) |
95.3
(264/277) |
FAME系统 | 71 | 70 | 95.9
(141/147) |
40 | 39 | 98.8
(79/80) |
24 | 25 | 98.0
(49/50) |
95.7
(135/141) |
98.5
(134/136) |
97.1
(269/277) |
拭系统,使加样更加准确;另外,FAME系统无论加样品、加试剂均为悬空加样,避免了手工操作的拖带、交叉等现象。
FAME全自动酶标分析系统不仅能提高工作效率,更重要的是使检验过程标准化、规范化,符合GMP要求,最终保证原料血浆检测结果的可靠性。使用FAME全自动酶标分析系统应注意的几个问题:①样品处理:冰冻血浆小样要去除纤维蛋白,可用离心或其它方法去除;②使用全自动FAME系统一次性投入费用较高,但在使用过程中只要正确操作、做好日常维护工作,是可以发挥其提高检测水平及工作效率的作用的。