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e抗原阴性乙型肝炎患者病毒前C区1896点突变的检测

来源:中华医学检验杂志 作者:朱美玲… 2009-2-21
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摘要: 通过本文,我们主要分析报道乙型肝炎病毒(HBV)前C区中最重要、最常见的1 896位点突变在乙肝病毒e抗原(HBeAg)阴性的乙肝患者中的检测结果。引物设计:共设计两对引物,第一对用于扩增HBeAg阴性的乙肝患者血清中的HBV DNA,P1位于1 865到1 889,P3位于2 410到2 430,扩增片断为566 bp。第二对引物用于检测1 896 G~A点突变......


通过本文,我们主要分析报道乙型肝炎病毒(HBV)前C区中最重要、最常见的1 896位点突变在乙肝病毒e抗原(HBeAg)阴性的乙肝患者中的检测结果。

  一、材料和方法

  1.病例来源:均来自本院门诊及住院病人,随机取材。

  2.引物设计:共设计两对引物,第一对用于扩增HBeAg阴性的乙肝患者血清中的HBV DNA,P1位于1 865到1 889,P3位于2 410到2 430,扩增片断为566 bp;第二对引物用于检测1 896 G~A点突变是否发生:利用PCR扩增引物3′端碱基必须与模板配对才能进行PCR扩增的原理,在1 876~1 896位设定PCR上游引物P2,且3′末端设定为突变碱基A,下游引物与P3通用。而未发生1 896突变的HBV进行PCR扩增不会出现阳性结果,只对1 896 G~A突变病毒进行特异性扩增。P2、P3引物PCR扩增片断为552 bp。所有引物由上海细胞生物研究所合成。

  3.实验方法:酶联免疫吸附测定(ELISA)方法筛选符合实验要求的乙肝患者血清标本(HBeAg阴性)1 017份(试剂由上海科华实业有限公司生产);P1、P3引物对PCR扩增其中的HBV DNA(包括野生株和变异株);对HBV DNA阳性血清,利用P2、P3引物对PCR检测其中的HBV是否有1 896位点突变,同时在RA 1 000型自动生化分析仪上检测血清中的谷氨酰氨基转移酶(ALT)。

  二、结果

  1.对1 017例HBeAg阴性的乙肝患者,以P1、P2引物进行PCR扩增,扩增出78份HBV DNA阳性,阳性率达7.7%。扩增产物与标准品对照,为566 bp,与预期相符。

  2.78例HBV DNA阳性血清,同时进行1 896位突变点检测和ALT测定。结果有63例出现了1 896位点突变。占所有待检血清的6.2%,占DNA阳性血清的80.8%(63/78)。在分布上不存在年龄和性别差异。59例血清中ALT>45IU/L,其中感染HBV变异株血清中56份异常,占88.8%。15例感染野生株且DNA阳性血清中,仅3例ALT异常,占20.0%。ALT指标在2种患者中比较,差异有非常显著意义(P<0.01)。

  三、讨论

  通过上述研究发现,7.7%HBeAg阴性的乙肝患者HBV DNA阳性。由此可见HBeAg阴性不能作为诊治病情的唯一指标。前C区中1 896 G→7A位点突变最重要,因为它使前C区编码第28位色氨酸密码子变成了终止密码子TAG,使病毒不能在肝细胞内合成完整的HBeAg分泌入血清中。在Horikita的研究中,8例抗-HBe阳性病例中6例出现该点突变,而我们所研究的1 017份HBeAg阴性的乙肝患者血清中,63例出现了1 896位点突变,占6.2%,占HBV DNA阳性血清中的80.8%。

  Omata等研究发现前C区的突变常导致患者病情加重。我们的结果发现,63例变异株感染患者中56例(88.8%)ALT高于正常,而15例DNA阳性野生株感染患者中仅3例(20.0%)ALT异常。



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