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替代C-反应蛋白的脂肪乳剂凝集试验方法及其初步临床应用

来源:临床检验杂志 作者:单小京 2009-2-21
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摘要: 摘要脂肪乳剂凝集试验可替代C-反应蛋白检测。在玻片上,将含有氯化钙的脂肪乳剂与病人血清混合,观察凝集反应。并将其结果与免疫化学法的胶乳凝集试验及速率浊度法比较。用本法与CRP胶乳凝集试验平行检测了203例临床标本,二者均呈阳性的43例,本法阳性而后者阴性的36例,速率浊度法对比试验了44份临床标本,结果速率浊度......


摘要 脂肪乳剂凝集试验可替代C-反应蛋白检测。在玻片上,将含有氯化钙的脂肪乳剂与病人血清混合,观察凝集反应。并将其结果与免疫化学法的胶乳凝集试验及速率浊度法比较。用本法与CRP胶乳凝集试验平行检测了203例临床标本,二者均呈阳性的43例,本法阳性而后者阴性的36例,速率浊度法对比试验了44份临床标本,结果速率浊度法超出正常上限的34份标本本法均阳性,阳性程度与浓度呈正相关;速率浊度法CRP<10 mg/L的10份标本,本法均呈阴性。初步结果表明,本法是一种替代检测CRP的简单、快速、敏感、可信和经济的方法,并且可半定量,适合常规实验室作过筛试验。

  C-反应蛋白(CRP)是敏感的急性时相蛋白。在血清中显著增高见于细菌感染、损伤、外科手术、心肌梗塞、恶性肿瘤等。测定血清CRP,临床上常用于筛检器质性疾病,估价炎症疾病的活动性,检查治疗过程中的感染,监测肾同种移植受体排斥反应,特别是对儿科病人鉴别细菌与病毒感染更有价值(1,2)本文参考文献[1~3],观察了替代CRP的脂肪乳剂凝集试验(FAT)。经临床应用,认为FAT简单、快速、经济,敏感性和准确性符合一般临床需要。作者参考Richtert[2]的方法,研究了最适条件,并作了某些改进,初步应用效果满意,现予报道。

  原理:在钙离子存在下,CRP能与卵磷脂结合形成肉眼可见的“颗粒型”凝集反应。根据颗粒出现的时间长短和大小决定阳性程度。

  1 材料与方法

  1.1 检测对象 体检正常(小便、大便常规、血常规及临床检查正常)者100例。病毒性感冒初期30例;急性胰腺炎(治疗前)12例,慢性胰腺炎急性发作期12例,产后感染3例,细菌性痢疾4例,胆囊炎术后3例,上呼吸道细菌感染20例,慢性迁延性肝炎13例。

  1.2 试剂

  1.2.1 40 mmol/L氯化钙 准确称取444 mg无水氯化钙,加蒸馏水溶解并稀释至100 ml。

  1.2.2 脂肪乳剂应用液 取脂肪乳剂注射液(无锡华瑞制药公司产品,商品名英脱利匹特,introlipid 20%)1份,加40 mmol/L氯化钙4份,混合,再加叠氮钠使其浓度达0.5 g/L,混匀,置4℃冰箱可用一年。为节省脂肪乳剂,可用临床输注后瓶中剩余部份配制。

  1.3 方法

  1.3.1 FAT操作步骤 在清洁干燥的载物玻片上,用精密移液器(上海求精玻璃仪器厂产)加10 μl待检血清,10 μl脂肪乳剂应用液,混匀,轻轻地水平方向摇动1 min。

  结果观察与判断:1 min内出现凝集颗粒,并于2 min内逐渐形成粗大颗粒者为阳性(+++);2 min内出现凝集颗粒,5 min内逐渐形成粗大颗粒者为阳性(++);5 min内仅在乳浊状液体中出现细小凝集颗料者为阳性(+);5 min内不出现凝集颗料,仍呈均一乳浊状者为阴性。

  1.3.2 对比方法 CRP乳胶凝集试验(LAT),用上海市医化所产试剂盒。速率浊度法(RN)CRP,用Beckman Array 360 System及其试剂盒(合校正品,参考值<10 mg/L)。均按说明书操作。

  2 实验与结果

  2.1 FAT法最适条件的选择 CRP是与脂肪乳剂中的卵磷脂结合[3],此种现象是钙依赖性的。CaCl2浓度过高时,脂肪乳剂不稳定,易分层。将CaCl2配成20、30、40、50、60、70、80 mmol/L,分别对62例血清样品试验(其中5例为已知阳性样品),按上法操作,阳性程度随CaCl2浓度增加而增加,40 mmol/L时阳性程度较高而乳剂又稳定。

  NaN3因其防腐作用可增进乳剂的稳定性。国外文献[(2)]用0.2 g/L,我们改用0.5 g/L,具有更强的防腐稳定作用,经试验对结果无影响。

  静脉脂肪乳剂与40 mmol/L CaCl2溶液按1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6稀释,结果显示:稀释倍数过低,因乳剂过浓,弱阳性的凝集颗料在其中不易观察;稀释倍数过高,则反应速度太慢;结果以1∶4稀释较佳。

  2.2 FAT与LAT对比试验 203例各种样品同时用两法测定,结果见表1、表2。

表1 203例样品CRP的FAT和 LAT检测结果

方法 n ++ +++
FAT

  LAT

203

  203

124

  160

27

  41

40

  2

12

  0

  2.3 各组标本检测结果见表2。

表2 各组CRP的FAT和LAT检测结果

分 组 n FAT LAT FAT LAT FAT LAT FAT LAT
++ +++
健康者 100 93 100 7 0 0 0 0

0

病毒性感冒 30 27 30 3 0 0 0 0

0

急性胰腺炎 18 0 0 0 16 10 2 8

0

慢性胰腺炎 12 0 7 3 5 6 0 3

0

产后感染 3 0 3 1 0 2 0 0

0

细菌性痢疾 4 0 3 1 1 3 0 0

0

胆囊炎术后

3

0

1 0 2 2 0 1 0
上呼吸道细菌性感染 20 4 8 11 12 5 0 0 0
慢性迁延性肝炎 13 0 8 1 5 12 0 0 0

  2.4 FAT与RN法比较结果 选取CRP RN法浓度为12~178 mg/L的样品34份,<10 mg/L的样品10份,用FAT法检,结果见图1。

图1 FAT与CRP RN法比较结果

  结果表明,本法与CRP RN法的关系大致为:-:<10 mg/L,+:11~30 mg/L,++:31~50 mg/L,+++:>50 mg/L。

  3 讨论

  3.1 本法约有8%的假阳性,但作为过筛试验,我们认为可有较高的灵敏度,以免漏检。而LAT法虽无假阳性,但有23%的假阴性,且我们所作的203例样品中很少有+++的结果,表明该法的灵敏度较差。

  3.2 FAT不仅试剂价廉、操作方便快速,且其敏感性高于LAT(见表1及其说明)。与CRP的RN的对比实验表明,CRP<10 mg/L的10例标本,FAT均呈阴性;CRP>10 mg/L的34例标本,FAT均呈阳性,且其阳性程度与CRP浓度呈正相关。可见FAT有较高的敏感性及准确性。大约11~30 mg/L为+,31~50 mg/L为++,>50 mg/L为+++。但这种关系只是大体上的估计,有条件者如有必要可对过筛试验阳性的样品再进一步作定量检测。但对大多数常规实验室,尤其是基层医院及门急诊化验室,FAT是一种可以替代LAT检测高于正常水平CRP的实用方法。

  3.3 FAT是一种非特异的试验,结果受其它引起脂肪凝集的因素的影响,肝素及抗心磷脂抗体会使脂肪乳产生奶油聚集(creaming)。故不可用肝素抗凝血浆作为样品。抗心磷脂抗体一般病人达不到引起FAT阳性的浓度。肝素化治疗病人(50 U/kg/day)的血清样品也不会产生假阳性(2)

  参考文献

  [1]Burtis C A,Ashwood E R,Tietz Textbook of Chinical Chemistry 2nd ed. WB Saunders Comp,1994,713~714

  [2]Richter D,Rohricht A M,Nurnberger W,et al.The fat emulision agglutination test:A reliable and cost effective alternative to the latex agglutination test for rapid bedside CRP measurement.Clin Chim Acta,1997,261:141

  [3]Hulman G,Fuller M,Pearson H J,et al.An accurate,simple and rapid test for detecting elevated levels of C-reactive protein in serum by agglutination of fat emulsion.Clin Clim Acta,1986,156:337



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