当前位置:首页 > 合作平台 > 医学论文 > 临床医学与专科论文 > 检验医学 > BrdU单克隆抗体的制备及鉴定

BrdU单克隆抗体的制备及鉴定

来源:中华微生物学和免疫学杂志 作者:风清扬 2009-2-21
336*280 ads

摘要: BrdU单克隆抗体的制备及鉴定 中华微生物学和免疫学杂志 1999年第3期第19卷 基础免疫学 作者:韩淑红邓鸿业徐志伟邓玉兰黄大无丁桂凤 单位:100083 北京医科大学免疫学系 DNA的5-溴,2’-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法近年来作为一种新的、简便、敏感特异的检测方法,在肿瘤生物学、遗传学、分子生物学特别是......


BrdU单克隆抗体的制备及鉴定

中华微生物学和免疫学杂志 1999年第3期第19卷 基础免疫学

作者:韩淑红 邓鸿业 徐志伟 邓玉兰 黄大无 丁桂凤

单位:100083 北京医科大学免疫学系

  DNA的5-溴,2’-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法近年来作为一种新的、简便、敏感特异的检测方法,在肿瘤生物学、遗传学、分子生物学特别是细胞增殖动力学等领域得到广泛应用,在一定程度推动了相关学科的发展。为了满足广泛开展BrdU标记DNA检测对BrdU特异性单抗的需要,我们制备了一株产生BrdU单抗的杂交瘤细胞株。本文对此细胞株制备过程及单抗鉴定情况作了简单叙述。

  由于BrdU是半抗原,需制备完全抗原BU-OVA进行免疫,BU-OVA的制备方法是过碘酸钠氧化法。BrdU单抗制备过程的关键是排除与胸腺嘧啶核苷(TdR)发生非特异交叉的抗体产生细胞,所以,还增加两种用于筛选的抗原即BU-BSA和MU-BSA,其制备方法同BU-OVA。

  融合用的细胞为BALB/c小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0,BALB/c小鼠供免疫和诱发单抗腹水。按常规方法融合筛选一株与BrdU反应而与TdR无明显交叉反应的杂交瘤细胞株,经克隆化培养后命名为4F4。用这株细胞接种于小鼠腹腔可产生富含抗体的腹水,其抗体类型为IgG类,ELISA法测其效价在1∶5000以上,FACS分析时稀释度为1∶400,BrdU体内和体外法参入,FACS分析结果表明4F4单抗与未参入有BrdU的DNA无明显交叉反应,并能很好反映参入BrdU的DNA含量的动态变化。半抗原竞争抑制实验表明4F4单抗对BrdU的特异性很高,而与TdR无明显结合现象。综合以上鉴定结果,4F4单抗的敏感性和特异性都很高。此外,由于发生BrdU参入的细胞一定要经过细胞固定及DNA变性处理后才能用BrdU单抗作检测,但处理能够引起细胞凝聚及非特异吸附现象。所以,我们在实验中应用BrdU标记技术时注意克服了这些难点,使4F4细胞株产生的BrdU单抗在对BrdU参入细胞的检测中获得了准确而重复性高的结果。

(收稿:1998-10-21  修回:1999-01-24)



医学百科App—医学基础知识学习工具


页:
返回顶部】【打印本文】【放入收藏夹】【收藏到新浪】【发布评论



察看关于《BrdU单克隆抗体的制备及鉴定》的讨论


关闭

网站地图 | RSS订阅 | 图文 | 版权说明 | 友情链接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 医源世界 版权所有
医源世界所刊载之内容一般仅用于教育目的。您从医源世界获取的信息不得直接用于诊断、治疗疾病或应对您的健康问题。如果您怀疑自己有健康问题,请直接咨询您的保健医生。医源世界、作者、编辑都将不负任何责任和义务。
本站内容来源于网络,转载仅为传播信息促进医药行业发展,如果我们的行为侵犯了您的权益,请及时与我们联系我们将在收到通知后妥善处理该部分内容
联系Email: