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肾综合征出血热患者特异性抗体及免疫复合物测定

来源:中华微生物学和免疫学杂志 作者:风清扬 2009-2-21
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摘要: 肾综合征出血热患者特异性抗体及免疫复合物测定 中华微生物学和免疫学杂志 1999年第1期第19卷 出血热 作者:张东海 单位:255036 山东省淄博市中心医院内科 为进一步了解HFRS患者发病过程中特异性抗体及其抗原特异性CIC的形成和意义,平行测定了IgA,IgE,IgG,IgM抗体及上述4类抗原在血清中的水平(抗体几何平......


肾综合征出血热患者特异性抗体及免疫复合物测定

中华微生物学和免疫学杂志 1999年第1期第19卷 出血热

作者:张东海

单位:255036 山东省淄博市中心医院内科

  为进一步了解HFRS患者发病过程中特异性抗体及其抗原特异性CIC的形成和意义,平行测定了IgA,IgE,IgG,IgM抗体及上述4类抗原在血清中的水平(抗体几何平均滴度, GMT),并从临床分型(病情严重程度)等角度作了对比分析。同时应用抗NP、抗G2蛋白McAb进行了阻断特异性CIC的试验以比较病程早、后期血清间的差异性;还比较了不同病毒血清型〔汉滩(HTHV);汉城(SEOV)〕之间的差异。

  材料与方法

  1.HFRS病人血清:采集山东省淄博市54例HFRS病人入、出院血清 各一份, 共108份。另测定不同血清型患者血清共54份(均经血凝抑制试验重新确认) ,其中27份HTHV血清采自济宁,另27份选择病日、性别、临床型相同的淄博市SEOV血清做配对比较,年龄相差 <5岁。16对3~8病日采血(早期),11对10~18病日采血(后期)。

  2.试剂:①兔抗HFRS血清、鼠脑HFRSV抗原,由中国药品生物制品检定所俞永新教授赠。②鼠抗人IgA, IgG,IgM抗体及HRP-鼠抗人Igs抗体为医科院基础医学研究所产品。③兔抗人IgE抗体购自DaKo公司。④HRP-鼠抗HFRS:鼠腹水系南京军区总医院产品,纯化后标记HRP(RZ=3.0) 。 ⑤ 抗核蛋白(NP)(A25-1)及抗G2蛋白(A19)McAb鼠腹水,中国预防医学科学院陈伯权教授提供。

  3.实验方法: ①血清学分型:采用血凝抑制试验,试剂来自浙江省卫生防疫站。②检测特异性HFRS-Igs采用改良抗体捕获ELISA技术〔1〕。③检测IgA, IgG,IgM型CIC:采用双抗体夹心法〔2〕。④检测IgE型CIC:采用捕获法。参见文献 〔3〕 。⑤阻断试验:将 特异性CIC阳性血清与抗NP或抗G2-McAb混合并调整至最终阳性滴度或工 作滴度。混合物37℃孵育30分钟;3000r/min离心30分钟,上清液为待测样品。每个样品测双孔 (测吸光度值,A490nm),同时测未阻断前终滴度阳性血清A值。

  阻断试验阳性计算方法:

  以阻断比≥50%为阻断阳性。

  结果与讨论

  1. 不同临床型患者血清4类Igs GMT值:均是病程后期高于早期,但HFRS-IgA抗体GMT值在轻型病例高于中、重型病例,而 HFRS-IgE,IgG抗体GMT值则在重型病例始终高于中、轻型病例,这些差异在病程早期尤为明显(表1)。提示HFRS-IgA抗体可能具有保护性抗体的作用,而HFRS-IgE,IgG抗体在病程早期可能参与病理损伤。

 表1 早、后期HFRS病人4种特异性抗体及其特异性CIC的GMT值

型 别 早期(1~8病日) 后期(10~28病日)
 轻型  中型  重型  平均  轻型  中型  重型  平均
IgA Ab

  CIC

126.99

  12.23

46.99

  5.44

36.22

  14.91

66.87

  8.49

330.74

  35.43

198.04

  19.87

389.93

  31.78

263.94

  23.88

IgE Ab

  CIC

37.08

  13.48

75.58

  14.45

160.00

  65.63

64.76

  17.48

190.37

  4.95

310.86

  12.24

570.17

  8.27

282.52

  8.35

IgG Ab

  CIC

50.82

  12.64

163.42

  13.20

400.00

  22.87

116.53

  13.94

943.55

  71.69

1161.94

  61.28

1766.54

  118.88

1131.37

  70.98

IgM Ab

  CIC

4167.05

  24.70

3286.46

  26.84

4755.18

  53.84

3781.12

  28.44

10852.66

  38.75

15020.29

  27.80

15603.38

  47.23

13302.52

  33.88

  注:1.病程早期HFRS-IgA,IgE,IgG抗体在轻型与中、重型间P<0.05(t检验);中、重型之间无差异。2.早期病例CIC间t检验,轻与中、重型均为P<0.05。2.抗原特异性CIC测定:IgA型特异性CIC的GMT值在病型间无明显 差异。IgE型特异性GMT值则在轻、中型与重型病例间存在明显差异(P<0.05),在病程早期明显高于后期,其差异性在重型病例表现尤为突出(P<0.05),这些进一步提示HFRS-IgE抗体及CIC在病程早期参与 HFRS病理损伤,其水平与病情轻重相关的可能性。IgG型特异性CIC的GMT值仍以重型病例为高, 且在后期血清明显上升,与HFRS-IgG抗体的上升同步。因此,HFRS-IgG抗体及其CIC可能具有两种作用:在HFRS-IgE抗体及其CIC之后引起进一步损伤;同时在病程后期又肩负清除HFRS病毒的作用。

  3.不同型病毒间差异分析:4类Igs GMT值均是HTHV高于SEOV,其中前3种抗体在病毒型间差异有统计学意义(P<0.05) 。4型CIC的GMT值在早期血清均以HTHV高于SEOV;在后期血清则是SEOV高于HTHV(表2)。

表2 两种血清型54例HFRS患者特异性抗体及抗原特异性CIC测定

Ig类型 病期 CIC的GMT 抗体的GMT
HTAV SEOV HTAV SEOV
IgM   62.64   10.47  4149.87  3064.33
9.83 25.79 7731.77 6009.16
IgA 10.62 3.82 121.67 36.73
21.78 28.03 205.87 102.93
IgG 22.18 14.18 171.31 85.65
35.26 47.35 2058.66 360.64
IgE 45.18 26.61 204.62 75.55
9.62 10.59 233.52 83.49

  4.阻断试验的意义: 在病程早期总的阻断成功率高于病程后期;从不同McAb阻断结果可见, 在病程早期抗G2阻断率低于抗NP,而在后期则相反。这间接提示:①在病程早期形成的特异性CIC中,NP抗原成分多于G2抗原成分,病程后期则相反;②在病程早期形成的特异性CIC中所结合的HFRS病毒量(或暴露的抗原位点,或游离的HFRS病毒抗原成分)低于病程后期, 故清除病毒的能力较低; ③在病程早期,NP抗体及其与NP抗原形成 的CIC成分可能多于G2抗原抗 体及其CIC成分,即可能在HFRS病程中导致病理损伤的因素主要与NP抗原 抗体CIC相关(表3)。与既往报道相吻合〔4〕。IgM型CIC阻断率均低于IgA及IgG型, 提示IgM型CIC结合的病毒量或可溶性病毒蛋白量多于后两种。IgG型的阻断成功率居中,IgA型最高。对IgA型CIC的阻断, 在早期中、 重型病人中两种McAb阻断效应相近(P>0.05)。IgA抗体这种保护性作用是否与机体对HFRS病毒不同结构蛋白产生的抗体应答差异相关, 有必要进行探讨。从不同临床型角度分析,随病情严重程度增加而阻断率随之逐渐降低,此差异在病程早期尤为明显。

  表3 NP及G2 McAb阻断HFRS病原特异性CIC结果

病型 病期 阻断抗体 IgM型CIC IgA型CIC IgG型CIC
血清数 阻断率(%) 血清数 阻断率(%) 血清数 阻断率(%)
重型 抗G2 5 1/5 3 1/3 4 0/4
抗NP 5 1/5 3 1/3 4 2/4
抗G2 4 0/4 4 1/4 6 3/6
抗NP 4 0/4 4 1/4 6 1/6
中型 抗G2 21 14.29 14 42.86 17 33.29
抗NP 21 28.57 14 50.00 17 41.18
抗G2 22 4.55 18 55.56 23 30.43
抗NP 22 4.55 18 33.33 23 13.04
轻型 抗G2 15 6.67 11 54.55 12 41.67
抗NP 15 20.00 11 72.73 12 50.00
抗G2 16 6.25 13 53.85 17 41.18
抗NP 16 6.25 13 30.77 17 35.29
合并统计 抗G2 41 12.20 28 46.43 33 33.33
抗NP 41 24.39 28 64.29 33 45.45
抗G2 42 4.76 35 51.43 46 36.96
抗NP 42 4.76 35 31.43 46 21.74

  上述结果提示,在HFRS发病机理中体液免疫因素可能发挥一定作用。参考文献

  [1]张东海.改良抗体捕获ELISA方法检测流行性出血热特异性IgE, IgA,IgG抗体的初步研究,中国病毒学,1993,8(3)∶207-212.

  [2]张东海,孙辉,高峰.检测肾综合症出血热抗原特异性循环免 疫复合物ELISA方法的建立.中国病毒学,1996,11(4)∶369-372.

  [3]杨东亮,汪由昆,李琳,等.流行性出血热特异性IgE,IgD型循环免疫复合物检测及其意义.中华微生物学和免疫学杂志,1993,13∶137-140.

  [4]白雪帆,杨为松,张文彬,等.流行性出血热患者对EHFV三种结构蛋白的抗体应答.中华传染病杂志,1992,10(4)∶187-190.

(收稿:1998-02-05  修回:1998-07-02)



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